HPV16L1在整合型重组毕赤酵母中的表达及病毒样颗粒的纯化

田晓娟，冯 娟，张丽芳，李文姝，薛向阳

宫颈癌是全球妇女第二大常见的恶性肿瘤，严重威胁女性生命健康，而且近年来宫颈癌发病呈现年轻化趋势［1］。我国每年宫颈癌的新发病例大约15万人，导致约8万人死亡［2］。大量研究证实，高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染是宫颈癌的重要病因［3－4］，其中，50%～60%宫颈癌组织可检测到HPV16［5］，因此，HPV16是引起宫颈癌最重要的型别［6］。

HPV衣壳蛋白L1真核或原核细胞表达后可自行装配成病毒样颗粒 （virus-like particles，VLPs）。这种不含病毒核酸的VLPs已证实能有效的诱导机体产生针对HPV的保护性免疫反应［7］。目前，基于 HPV L1VLPs的Gardasil四价疫苗和Cervarix二价疫苗已经批准上市，接种后可诱导出良好的预防效果。但这两种HPV疫苗价格均较昂贵，尤其是对发展中的国家，限制其推广使用。中国大陆目前尚未正式引进HPV疫苗［8］。因此，研制经济有效的HPV疫苗迫在眉睫。特探索HPV16L1在整合型重组毕赤酵母中的表达及病毒样颗粒的纯化，以为HPV疫苗开发奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料 真核表达载体pPIC3.5K，原核原核E.coli.DH5α菌株，真核GS115菌株均由本实验室保存。pMD18-T载体购自TaKaRa公司，限制性内切酶BamHⅠ、EcoR I、BglII，T4DNA 连接酶、核酸分子质量标准DNA Marker、蛋白预染Marker，2×PCR Master Mix均购自Ferments公司；无内毒素质粒抽提纯化试剂盒（Endofree Plasmid Maxi Kit）购自Omega公司；HPV 16L1单克隆抗体购自abcam公司，HRP-羊抗鼠IgG购自联科生物技术有限公司（KPL公司产品）；增强型HRP-DAB底物显色试剂盒购自天根生化，小量质粒DNA提取试剂盒、PCR产物纯化试剂盒、DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒均购自上海捷瑞生物技术有限公司；Hi-TrapTM Heparin HP column购自美国GE Healthcare公司；其它试剂为国产或进口分析纯试剂。……