甲孕酮对K562/AO2 细胞及P-gp、Bcl-2耐药蛋白表达的影响*

(泰山医学院附属泰安医院肿瘤内科，山东 泰安271000)

多药耐药往往是许多白血病患者化疗失败的主要原因之一。多药耐药的机制较为复杂，其中多药耐药基因mdr1及其编码的P-糖蛋白(P-glycoprotin,P-gp)的过度表达、以及bcl-2等的过度表达是较公认的产生MDR(多药耐药)的机制[1]。本研究观察经甲孕酮作用后的K562/AO2 细胞的凋亡，以及细胞内P-gp、Bcl-2表达的变化，探讨甲孕酮耐药逆转的作用及机制。

1 材料与方法

1.1细胞系 K562、耐药K562/AO2细胞株(ADM诱导产生)购自中国协和医科大学血液病研究所, 常规培养，置37 ℃、5% CO2饱和湿度环境，培养液为含10%热灭活胎牛血清的RPMI1640, 每2～3天换1次培养液。

1.2药物和试剂 阿霉素(ADM，浙江海正药业)，醋酸甲孕酮(MPA,中国药品生物制品检定所)，流式细胞仪(FACS Calibur， BD公司)，小牛血清购自杭州四季青生物工程公司，二甲基亚砜(DMSO,北京化工厂),四甲基偶氮唑兰(MTT，Sigma公司)。

1.3方法

1.3.1实验分组与细胞培养方法 实验分对照组(K562/AO2细胞只加培养基不加药物)，甲孕酮组(又分为1×10-6～ 1×10-4mol/L 3个不同的浓度组)、阿霉素组、甲孕酮联合阿霉素组。取对数生长的K562/AO2细胞, 1×106/孔，接种到96孔培养板中, 设置ADM浓度10 μg/ml为工作浓度，阿霉素组加入浓度为10 μg /ml的阿霉素，甲孕酮组分别加入不同浓度的甲孕酮，甲孕酮联合阿霉素组分别加入不同浓度的甲孕酮联合浓度为10 μg /ml的阿霉素予以处理, 对照组只加等体积的培养基不加药物，每孔设9个平行孔。加入药物后继续培养48 h。

1.3.2MTT 法测定细胞抑制率 药物作用K562/AO2细胞48 h后，分对照组、阿霉素组、甲孕酮1×10-6mol/L +阿霉素组、甲孕酮1×10-5mol/L +阿霉素组和甲孕酮1×10-4mol/L +阿霉素……