不同剂量淫羊藿苷对雷公藤多苷模型小鼠睾丸病理损伤的影响

覃光辉姚重华王 骁田 雨薛轶燕曲环汝苏 励

（1深圳市龙岗区中医院，深圳415812；2上海市中医医院，上海200071；3上海中医药大学附属龙华医院，上海200032）

不同剂量淫羊藿苷对雷公藤多苷模型小鼠睾丸病理损伤的影响

覃光辉1姚重华2王 骁3田 雨3薛轶燕3曲环汝3苏 励3

（1深圳市龙岗区中医院，深圳415812；2上海市中医医院，上海200071；3上海中医药大学附属龙华医院，上海200032）

目的探讨淫羊藿苷拮抗雷公藤多苷小鼠睾丸病理损伤的量效关系。方法应用雷公藤多苷所致的睾丸生精障碍小鼠模型，观察不同剂量淫羊藿苷对小鼠睾丸病理形态学的影响。结果模型组小鼠睾丸组织可见明显的病理损伤；3份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治疗组小鼠睾丸生精小管管壁较厚，细胞层次较宽，各级生精细胞排列较规则，基底面至腔面可见精原细胞、初级精母细胞、精子细胞等各个发育阶段的细胞，细胞增殖旺盛，可见较多分裂期细胞，腔内可见成熟精子，间质稀少，血管丰富，间质细胞发育良好。1份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治疗组和9份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治疗组小鼠睾丸病理表现相似，好于模型组，但差于3份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治疗组。结论在淫羊藿苷／雷公藤多苷的1∶1、3∶1、9∶1三种剂量配比中，3∶1配比具有最好的拮抗雷公藤多苷睾丸病理损伤的作用。

淫羊藿苷；雷公藤多苷；睾丸；病理损伤

在前期研究中，我们发现淫羊藿苷具有拮抗雷公藤多苷睾丸病理损伤的作用［1］。在此基础上，我们进一步探讨了淫羊藿苷拮抗雷公藤多苷睾丸病理损伤的量效关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及分组选用8周龄昆明种雄性小鼠50只，体重（40.95±2.76）g，SPF级，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，动物许可证号：SCXX（沪）2007-0005。饲养在上海中医药大学附属龙华医院动物房内，室温（27±1）℃，食用全价营养颗粒饲料，饮用自来水。适应性喂养1周，随机分为5组（正常组、模型组、1份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治疗组＜简称1倍比组＞、3份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治疗组＜简称3倍比组＞、9份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治疗组＜简称9倍比组＞），每组10只，经卡方检验，P＞0.05，各组之间体重差异无统计学意义，见表1。

1.1.2 药物及试剂淫羊藿苷（规格：98%HPLC），由西安小草植物科技有限公司提供，用双蒸水分别配成12mg／ml、36mg／ml、108mg／ml的混悬液，置4℃保存备用；雷公藤多苷片，江苏美通制药有限公司生产，批号：080913。用双蒸水配成12mg／ml的混悬液，置4℃保存备用。

表1 治疗前各组体重

表1 治疗前各组体重

组别样本量体重P正常组10 39.90±2.78 0.451模型组10 42.18±3.14 1倍比组10 40.91±2.60 3倍比组10 40.52±2.52

1.1.3 仪器设备LEICA-RM2135型切片机，LEICADME光学显微镜，由上海徕卡显微系统有限公司制造。

1.2 方法

1.2.1 给药剂量正常组：每日生理盐水0.5ml／100g体重灌胃，连续30天，每天1次。

模型组：参考文献［2］进行造模。雷公藤多苷混悬液0.25ml／100g／d／体重灌胃，以及生理盐水0.25ml／100g／d体重灌胃，连续30天，每天1次。

1倍比组：雷公藤多苷混悬液0.25ml／100g／d／体重灌胃，以及12mg／ml淫羊藿苷混悬液0.25ml／100g／d／体重灌胃，连续30天，每天1次。

3倍比组：雷公藤多苷混悬液0.25ml／100g／d／体重灌胃，以及36mg／ml淫羊藿苷混悬液0.25ml／100g／d／体重灌胃，连续30天，每天1次。

9倍比组：雷公藤多苷混悬液0.25ml／100g／d／体重灌胃，以及1080mg／ml淫羊藿苷混悬液0.25ml／100g／d／体重灌胃，连续30天，每天1次。

1.2.2 观察症状体征实验自开始起，每周称重1次，观察小鼠的体形、毛色、步态、觅食及活动情况，并记录动物每天死亡只数。

1.2.3 观察睾丸病理形态第31天用颈椎脱臼法处死小鼠，取左侧睾丸，用Bouin液（冰醋酸∶甲醛∶苦味酸饱和水溶液按1∶5∶15比例配制，现配现用）固定24小时，经梯度乙醇脱水，石蜡包埋，分别制成4张厚约4μm连续石蜡切片，将石蜡切片置于37℃烤箱过夜后，经二甲苯脱蜡后梯度乙醇脱水，苏木精染色5min，经1%盐酸乙醇分色，自来水充分冲洗蓝化后，再用0.1%伊红复染5min，最后经梯度乙醇脱水，二甲苯透明后，封片。光镜下观察睾丸组织切片病理形态的改变。

2 结果

2.1 一般情况死亡6只，均为灌胃不当当场死亡。各组体重均增加，经卡方检验，P＞0.05，各组之间体重差异无统计学意义，见表2。除正常组外，其它各组小鼠于造模后均逐渐出现活动减少，反应迟钝，畏寒蜷卧，体毛疏松，失去光泽，进食量、饮水量减少等表现，模型组最严重，各治疗组比较轻微。

表2 治疗后各组体重

表2 治疗后各组体重

组别样本量体重P正常组10 47.90±3.57 0.721模型组9 48.17±2.36 1倍比组8 48.69±3.67 3倍比组9 48.51±4.51 9倍比组846.51±2.26

2.2 光镜观察结果正常组小鼠睾丸，生精上皮（管壁）厚，细胞层次宽，各级生精细胞排列规则，基底面至腔面可见精原细胞、初级精母细胞、精子细胞等各个发育阶段的细胞，细胞增殖旺盛，可见到较多分裂期细胞，腔内可见成熟精子，间质稀少，血管丰富，间质细胞发育良好（图1）；模型组生精小管大部分退化变性，萎缩，生精上皮（管壁）明显变薄，细胞层次减少，各级生精细胞排列紊乱甚至缺失，数量明显减少，生精小管腔内空虚，少见甚至未见成熟的精子，间质成分增宽，并且出现较大空隙，血管稀少，间质细胞减少或消失（图2）；3倍比组的镜下表现与正常组基本相同，生精小管管壁较厚，细胞层次较宽，各级生精细胞排列较规则，基底面至腔面可见精原细胞、初级精母细胞、精子细胞等各个发育阶段的细胞，细胞增殖旺盛，可见到较多分裂期细胞，腔内可见成熟精子，间质稀少，血管丰富，间质细胞发育良好（图3）。

图1

图2

图3

1倍比组的镜下表现（图4）与9倍比组（图5）基本相同，生精小管管壁较薄，细胞层次较窄，各级生精细胞排列欠规则，数量减少，基底面至腔面可见精原细胞、初级精母细胞、精子细胞等各个发育阶段的细胞，少见成熟的精子，间质成分增宽，血管稀少，间质细胞减少。

图4

图5

3 结论

淫羊藿苷拮抗雷公藤多苷睾丸病理损害的作用随剂量的增加呈现由弱到强再减弱的趋势。在淫羊藿苷／雷公藤多苷的1∶1、3∶1、9∶1三种剂量配比中，3∶1的配伍比例具有最好的拮抗雷公藤多苷睾丸病理损伤的作用。

［1］覃光辉，王骁，姚重华，等.淫羊藿苷对雷公藤多苷模型小鼠睾丸病理损伤的影响［J］.中医药导报，2009，（7）：8-10.

In fluen c e o f Dif f e r e n t Volume o f Ica riine on Trip t e r y gium Gl y c o sid e s Mo d el Ra t wit h Pat holo gical Inju r y o f Te sti

Qin Guanghui1Yao Chonghua2W ang Xiao3Tian Yu3Xue Yiyan3Qu Huanru3Su Li3(1 Shen zhen Longgang hospital of traditional chinese M edicine,Guangdong Province,415812,China; 2 Shanghai Hospitalof Traditional Chinese M edicine,Shanghai,200071,China; 3 Longhua,Shanghai University of Traditional Chinese M edicine,Shanghai,200032,China)

ObjectiveTo investigate dose-effect relationship of Icariin'Antagonism to TWP model pathological testicular damage in mice.MethodsWe applied TWP-induced obstacles spermatogenic mice to observe the the mouse testis pathomorphologx impact of different doses of Icariin.ResultsThe testicular tissue in the model group of mice can be seen clearlx pathological damage；3 Icariin／1 TWP treatment group mice spermatogenic tubule vall change more thicker，cell-level vider，spermatogenic cells at all levels more regular，the basement surface can be seen to-cavitx surface-spermatogonia，primarx spermatocxte，sperm cells in various developmental stages of the cell，strong cell proliferation，more split-phase cells，mature sperm cavitx，scarce interstitial，vascular-rich，vell-developed interstitial cells.1 Icariin／1 TWP treatment group and 9 Icariin／1 TWP treatment group are similar to mouse testis pathologx，better than the model group，but vorse than the 3 Icariin／1 TWP treatment group.ConclusionIn the ratio of Icariin／TWP 1∶1，3∶1，9∶1，the 3∶1 has the best antagonistic TWP model pathological testicular injurx role.

Icariin；Tripterxgium Glxcosides；Testis；Pathological injurx

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.02.105

：1672-2779（2014）-02-0156-03

��苏 玲 本文校对：张云城

2013-10-21）