多肽药物固相合成中的水解杂质和非对映异构体杂质的研究

郜炎龙，吴超柱，徐凡，姜和，2

(1.重庆理工大学药学与生物学院，重庆 400050;

2.重庆前沿生物技术有限公司，重庆 400041)

多肽药物固相合成中的水解杂质和非对映异构体杂质的研究

郜炎龙1，吴超柱1，徐凡1，姜和1，2

(1.重庆理工大学药学与生物学院，重庆 400050;

2.重庆前沿生物技术有限公司，重庆 400041)

对多肽固相合成中水解杂质和非对映异构体杂质进行研究。介绍了多肽合成中氨基酸水解机制和消旋机制，从合成原料、质量控制、工艺过程控制和检测方法选择等方面为多肽合成研究者提供参考。结果表明:某些氨基酸水解产生的水解杂质和消旋产生的非对映异构体杂质是多肽药物的重要有关物质之一，因此应加强对水解杂质和非对映异构体杂质的研究与控制。

多肽固相合成;杂质;水解;非对映异构体

多肽的化学合成最初始于液相合成，但由于液相合成多肽每一步都要进行纯化和分离，因此在实际操作时受到很大的限制。1963年美国化学家Merrifield［1］发表了第一例用固相树脂作为载体合成四肽化合物(Leu－Ala－Gly－Val)的文章，标志着固相有机合成化学时代的开始，也实现了固相合成多肽的规模化生产。如今固相合成法已广泛应用于蛋白质和多肽研究领域。固相合成的基本原理是以连接在固相载体的首个氨基酸为起点，经脱除保护基团、活化、耦连的循环过程，将氨基酸逐一连接得到目的多肽［2－3］。由于肽链中某些氨基酸(如Gln、Asn)或多肽药物的修饰基团存在侧链酰胺键，在合成过程中难免会遇到酸碱环境或有水分的环境，造成部分水解，而水解产物与目标产物分子量和LC/MS信息相差很小，常规的有关物质检查方法通常并不能将其良好地检出。另外由于氨基酸多为手性物质(除Gly)，在合成多肽过程中，在氨基酸的官能团参与保护基的接入及脱除、羧基活化等反应时可能发生消旋化反应，这可能导致肽分子立体化学信息的缺失。由于多肽药物的药理活性与立体构型紧密相关，因此须对多肽合成中的非对映异构体杂质进行控制和研究。另外，非对映异构体杂质的色谱特征多与主成分非常相似，常见的物质检查方法也难将它较好地分离检出。本文阐述多肽固相合成中氨基酸侧链酰胺键以及常见修饰基团的水解和消旋化机制，综述水解杂质和非对映异构体杂质当前的研究技术与进展，最终对两类杂质的控制与研究进行分析讨论，并提出合理建议。

1 水解机制和消旋化机制

1.1 水解机制

1.1.1 水解影响因素与机制

多肽药物在不同的环境中可以被酸、碱、蛋白酶催化［4］或被金属离子催化水解［5］。例如，在25℃的温度下，二肽甘氨酰甘氨酸在1 mol/L NaOH中水解的半衰期约为2天，在1 mol/L盐酸中水解的半衰期则为150天［6］。而难活化的肽键在钯［7］和铜［8］配合物的催化下能迅速裂解。过去非催化肽键水解并未得到较多关注，直到1988年Kahne和Still用14C标记了甘氨酸并使其结合在肽C－末端，在中性pH值范围内和25℃的温度下能监测到释放少量的甘氨酸，它的水解速率为3× 10－9s－1，从而推算得出它的半衰期为7年［9］。

1)pH因素

多肽药物在酸性和碱性条件下易水解，在中性条件下水解速率最低。Kahne和Still用14C标记了一个四肽的C－末端甘氨酸，在pH值为0到14的范围内和25℃的温度下［10］，测定多肽的水解情况，并绘制出了水解速率和pH值的曲线关系(如图1所示)。其中:在pH=7时多肽的水解速率为3 ×10－9s－1，从而推算得出它的半衰期为7年。

图1 Kahne等测定的四肽水解与pH的曲线关系

2)温度因素

多肽药物在高温下的水解速率明显快于室温下的水解速率。两者相差较大，一般相差在103～105倍。Kahne和Still用14C标记了一个四肽，测定该四肽在热冷不同树脂下的水解情况。可以看到，尽管随着时间的推移热树脂的水解始终大于冷树脂水解，但在1 500 min后保持相对平衡［9］。Radzicka等检测了5种二肽在150℃和25℃下的水解速率，发现150℃下的水解速率约为25℃下的105倍［11］，如图2和表1所示。

图2 Kahne等测定的四肽在热冷不同背景下水解速率随时间变化的曲线关系

表1 Anna Radzicka等测定的5种二肽在150℃和25℃下的水解速率(G为甘氨酸)

3)酶催化因素

多肽药物不同位置的肽键需要采用不同的酶和不同的温度进行水解，而且不同位置的水解速率也不相同。表2所示为Radzicka等根据前人检测的C－端肽键(如AcGG)与羧肽酶B (23℃)［12］、内部肽键(如AcGGNHMe)与血管紧张素转换酶(37℃)［13］、二肽键(如GG)与腹水瘤二肽酶(40℃)［14］3个位置肽键的水解速率以及半衰期。再加上检测3类肽键在无酶催化条件下的反应速率与酶催化后的水解速率，最终得出结论:羧肽酶B是这3类酶中催化能力最强的酶［11］。

表2 Anna Radzicka等测定的C端肽键、内部肽键、二肽键的水解速率(G:甘氨酸、Knon为无酶条件下反应速率)

4)金属离子催化因素

Kopera等对7类序列的多肽(R1－Ser－Arg－His－Trp－R2，R1－Ser－Lys－His－Trp－R2，R1－Ser－Ala－His－Trp－R2，R1－Ser－Arg－His－Ala－R2，R1－Ser－Gly－His－Ala－R2，R1－Thr－Arg－His－Trp－R2，R1－Thr－His－His－Trp－R2)，在镍离子催化下的水解进行了研究，最终推断出R1－(S/T)XHZ－R2肽在镍离子催化下的水解机制(S为丝氨酸，T为苏氨酸，H为组氨酸，X为丙氨酸或组氨酸，Z为赖氨酸，R1、R2为非特定序列)［15］。在镍离子作用下，形成了2个五元杂环和1个六元环的过渡态物质，如图3所示。

图3 Kopera等推断出R1－(S/T)XHZ－R2肽在镍离子催化下的水解机制

1.1.2 水解位置与机制

多肽药物的水解按水解位置主要分为4类:肽链全水解、肽链部分水解、主链氨基酸的侧链酰胺键水解、修饰基团水解。

1)肽链全水解

肽链全水解的化学方法有酸水解和碱水解。

①酸水解:一般用6 mol/L HCl或4 mol/L H2SO4回流20 h左右可完全水解，不引起消旋，得到的是L－型氨基酸。陈平等［16］采用毛细管水解多肽法，将多肽样品溶解在20 μL的5.7 mol/L盐酸(含0.5%苯酚)或4 mol/L甲磺酸(含0.2%色胺)中，再加入5 μL亚二硫基二乙酸(10 mg/ml，溶于0.2 mol/L Na0H中)，用微量注射器将其导入一个下端封闭毛细管中(1mmi.d)，然后将管子在液体弯月面上部1 cm处封闭，封好的管子于150℃保温2 h。毛细管酸水解法能够防止氨基酸氧化降解。

②碱水解:多肽与5 mol/L NaOH共煮10～20 h，完全水解，多数氨基酸被不同程度地破坏，如精氨酸脱氨，得到的是L型和D型的混合物。由于此方法得到的氨基酸多数遭到破坏，不建议采用此法全水解。

2)肽链部分水解

多肽药物发生部分水解的位置是羧基中的碳原子和氨基中的氮原子相连的肽键。多肽部分水解后生成短的多肽。此类水解中易发生水解的位点可能是天冬氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、苏氨酸等。鲁伟等［17］用胰蛋白酶将蛋白质部分水解为多肽后，利用三氯乙酸法和双缩脲法确定了其水解液中的多肽含量。

3)修饰基团水解

修饰基团水解的反应类型主要包含卤代烃水解，酯水解，有机物盐类水解(醇钠、酚钠、羧酸钠)，糖类水解，油脂类水解等，如下所示:

4)主链氨基酸的侧链酰胺键水解

这类水解的反应原理很简单，即:AA1－CONH2+H2O→AA1－COOH+NH3。易发生此类反应的常见氨基酸为Gln、Asn。此类反应不破坏主链结构，最终使多肽水解产物相对分子质量仅增加1，色谱信息和质谱信息与原多肽非常接近，因此是一类较难分离的杂质，应重点选择此类杂质作为研究和质控对象。

综上所述，多肽水解易受pH值、温度、蛋白酶和金属离子催化等因素影响。在水解位置影响因素中，全水解得到的是单个氨基酸，部分水解得到的是短肽，而修饰基团水解因为被水解基团的不确定性，水解产物的相对分子质量一般变化比较大(除水解基团为酰胺键外)。三者的水解产物与目标产物的色谱和质谱信息相差甚远，因此，在杂质分离研究中不具有实际意义。本文重点研究氨基酸侧链酰胺键和修饰基团酰胺键的水解。

1.2 消旋化机制

肽化学中的“消旋化”是指一个手性中心部分或全部差向异构化，导致其旋光性信息发生改变。消旋化机制主要有直接烯醇化机制和5(4H)－噁唑酮机制。

1.2.1 直接烯醇化机制

在肽缩合时，碱催化的烯醇化机制起主要作用，消旋程度取决于活化羧基α位质子的酸性、溶剂、温度及碱的性质。氨基酸α位质子的酸性与取代基的性质紧密相关［18］。直接烯醇化机制见图4。

图4 活化的氨基酸和肽的碱催化消旋机制(A)和酸催化消旋机制(B)

1.2.25 (4 H)－噁唑酮机制

5(4 H)－噁唑酮(D/L－4)产生在氨基酸活化过程中，是肽合成的重要中间体，其化学构型的不稳定也是导致氨基酸消旋化的重要因素。化合物1中活化基X的活化能力及N－酰基R1－CO－的电子特征与噁唑酮的形成倾向紧密相关。噁唑酮的氨解速率和它的形成能力决定了肽耦合反应的消旋程度。氨基组分的亲核能力也对多肽缩合反应有重要影响［18］。5(4H)－噁唑酮的消旋机制如图5所示。

图55 (4H)－噁唑酮的消旋机制

2 水解杂质和非对映异构体杂质的研究方法和进展

多肽药物中的水解杂质和非对映异构体杂质都属于多肽合成中的有关物质，因此在分析方法上有相似性，但又有一定的差异性。如非对映异构体可以采用手性色谱法，而水解杂质则不能。

由于合成多肽中有关物质的复杂性，且单一特定研究方法总会存在一定的局限性，因此对于新合成多肽的有关物质研究而言，通常需同时结合使用不同原理的方法进行研究。一般认为，对合成多肽杂质认知的程度与研究中使用的独立技术的数量成正比。常见的合成多肽的有关物质研究方法包括基于各种不同原理的高效液相色谱法(如反相HPLC法、离子交换HPLC法、分子排阻HPLC法)，聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，毛细管电泳，液质联用法以及激光散射等［19］。下面将介绍几种常用的分析水解杂质和非对映异构体杂质的方法。

2.1 反相高效液相色潽法(RP－HPLC)

合成多肽中水解杂质和非对映异构体杂质的研究与其他化学药物的有关物质研究相同，也可采用HPLC进行检测。最常用的是反相色谱法(RP－HPLC)，采用C18、C8或C4柱等［18］。RPHPLC具有极高的分辨率，已广泛应用于多肽和蛋白的分离。由于多肽在疏水性固定相表面上的吸附与解吸不仅取决于氨基酸序列，而且与其空间结构有关，即“疏水脚”的细微差别将使构象不同的多肽具有不同的色谱保留行为［20］，因此RPHPLC可有效分离序列几乎完全相同的多肽及多肽的消旋化产物［21－23］。

陈平等［16］采用毛细管在亚二硫基二乙酸存在下用甲磺酸对蛋白质与多肽水解进行氨基酸分析。亚二硫基二乙酸的加入可稳定半胱氨酸［24］，采用含色胺的甲磺酸水解可以保护色氨酸。最终应用反相高效液相色谱法RP－HPLC成功分离了多肽的水解产物。

张若蘅等［25］应用反相高效液相色谱法RPHPLC研究了5对L，D－多肤非对映异构体在不同条件下的分离情况。通过改换色谱柱、改变流动相的组成及梯度洗脱条件，发现其中的2对可以得到较好的分离。Boc－Ala－L，D－Ala－GlyOBzl在Synchropak RP－P(250×4.5 mm i.d.)柱上，梯度为20%～60%的0.1%TFA/MeCN(20 min)时的分离度为1.l;Boc－Gly－L，D－Ala－Val OBzl在Novapak C18(3.9×150 mm i.d.)柱上，以30%的0.1%TFA/MeCN恒流动相组成进行分离时得到的R值高达1.6。

齐崴等［26］采用水(0.1%TFA)和乙腈(0.1% TFA)流动相梯度洗脱，在C18柱的色谱系统下对使用固相合成的肽H2N－PFNSLAI－COOH进行了研究。通过优化色谱条件，可将4种非对映异构体分离，并利用MS进行结构鉴定。

2.2 离子交换色谱法(HPIEC)

伴随肽链的增长，一些氨基酸消旋产生的非对映异构体杂质采用反相色谱系统难以有效检出，建议根据样品的理化特性尝试应用其他不同原理的色谱检测系统，如毛细管电泳法(HPCE)、离子交换色谱法等。

迄今为止，离子交换色谱法被认为是在低到中压条件下分离多肽水解产物的较好方法。1993年金贵仙等［27］用NaAc溶液作起始缓冲溶液，含NaAc的NaCl溶液作终止缓冲溶液，在CM－52阳离子纤维素柱上从水解胶原多肽中分离出了4个组分。之后岳爱兵等也在该柱上对明胶中的不同构象组分进行了分离。

某肽链长度为三十肽以上的创新多肽药物在研发的初期，采用反相色谱检测样品纯度为97.8%，但当采用强阳离子交换色谱法(SCXHPLC)测定纯度时仅为88.0%，其中组氨酸的差向异构体杂质高达9.8%。后经改进优化制备工艺，较好地控制了组氨酸差向异构体杂质含量［28］。

2.3 手性色谱柱法

手性色谱柱(Chiral HPLC Columns)是将具有光学活性的单体固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相(chiral stationary phases)，通过将对映异构体引入到手性环境中，使其呈现出物理特征的差异，进而达到拆分光学异构体的目的。因此手性色谱在分离对映异构体和非对映异构体时有独特优势。

Hamase等［28－30］采用Pirkle型手性柱Sumichiral OA－2500S，以柠檬酸甲醇溶液为流动相成功地分离过NBD－氨基酸对映异构体。在同样条件下，NBD－D，L－Thr和NBD－D，L－allo－Thr这2对对映体也非常容易分离。宋志峰等［31］采用手性色谱法结合荧光法检测将DAP(细菌细胞壁肽聚糖短肽链上的第三位氨基酸)的3种非对映异构体(即左旋(LL)、右旋(DD)和内消旋型(meso))良好地分离。

2.4 液质联用法(LC/MS)

液质联用(HPLC－MS)又叫液相色谱－质谱联用技术，它以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。HPLC－MS体现了色谱和质谱优势的强强联合，将液相色谱对复杂样品的高分离能力和MS拥有高灵敏度、高选择性及能够提供相对分子质量与结构信息的优点完美地结合起来。

陈媛等［32］通过使用HPLC－MS/MS方法分别对天然发酵酱油原油和酸水解植物蛋白液中的多肽的水解氨基酸的含量和比例进行了研究，准确得出了水解后氨基酸的种类和含量。

Goodlett等［33］采用液质联用技术测定了多肽样品的光学纯度。先将肽样品溶于DCl/ CD3COOD中，进行水解然后采用N－a－(2，4－二硝基－5－氟苯基)－L－丙氨酰胺(FDAA，Marfey’s试剂)对处理后的氨基酸进行衍生化，使用普通的反相高效液相色谱或气相色谱即可较好地分离衍生化后的D和L－构型的氨基酸，进而检测得到肽样品中氨基酸消旋的含量。水解时必须使用氘(D)代试剂，这样可以使水解反应过程中产生的消旋氨基酸的α位质子为氘(D)，利用ESI－MS检测能将水解反应中产生的消旋与多肽中本身的氨基酸消旋较好地区分开来。此方法有良好的专属性，可以广泛地应用，能检测各种多肽药物。目前，国外研究人员已广泛应用此类方法对多肽药物合成中的光学纯度进行控制［34］，并且通过此方法指导制备工艺的优化改进。

综上所述，水解杂质适用于除手性色谱法外的其他各种常见色谱法，尤其适用于反相高效色谱法。非对映异构体杂质在短肽时适用于反相高效液相色谱法，但随着肽链增加反相色谱系统常常无法有效检出，建议采用离子交换色谱法。当含有其他对映异构体杂质或者内消旋体时应采用手性色谱法。液质联用时可以根据所检测分析物质的特性，采用适合的色谱柱对水解杂质和非对映异构体杂质进行分离，并通过质谱法进行鉴定和验证。

3 对水解杂质和非对映异构体杂质的控制和研究的建议

3.1 加强合成的起始原料的质量控制

加强合成的起始原料的质量控制是非常必要的，因为合成多肽的侧链酰胺键和各手性中心直接来源于合成起始原料——各种保护氨基酸［35－36］。起始物料的氨基酸及其衍生物的质量标准一般包括化学纯度、熔点、性状、比旋度、含量、光学纯度及色谱纯度等。其中起始原料的化学纯度和光学纯度的质量控制是最为重要的2个指标。

关于水解杂质，由于原料氨基酸多保存在－20℃冰箱中，在反应前转移到干燥器中进行复温和干燥，因此除了在合成前进行必要的化学纯度质检外，在复温时应保证复温时间和干燥器的内硅胶的干燥活性，从而确保氨基酸恢复到室温和复温过程中冷凝的水蒸气能完全被吸收，避免原料在反应前发生水解。

关于非对映异构体杂质，目前多数多肽合成单位仅对起始原料比旋度进行质量控制。由于比旋度检查方法在灵敏度、专属性方面存在不足，此项指标并不能对氨基酸的光学纯度进行有效的控制，尤其是遇到比旋度绝对值较小的氨基酸时，如Fmoc－Gln(Trt)－OH为－1.0°(±0.8°)(C=1，甲醇)、Fmoc－Glu(OtBu)－OH为+1.2°(±0.5°)(C =1，乙酸乙酯)。因此，本文提倡采用专属性更强的手性高效液相色谱法来控制起始原料的光学纯度。

3.2 注意控制工艺流程

多肽合成中的工艺流程和试剂选择都对水解杂质和非对映异构体杂质的产生有重要影响。

关于水解杂质，在多肽合成中应注意溶剂DMF易吸水、称量氨基酸和缩合剂在外暴露吸水、投料前冰浴活化时氨基酸活化液易吸水的问题。DMF和DCM是多肽固相合成中大量使用的溶剂，但是二者易吸水，尤其是DMF可与水任意比互溶，常温下放置24 h，吸水率达到0.25%。因此溶剂在放置时一般要加入分子筛保持干燥，投料溶解氨基酸和缩合剂时应尽可能缩短暴露在空气中的时间。氨基酸和缩合剂暴露在空气中时也易吸水，所以要尽可能缩短称量时间。在多肽固相合成中，投料前的活化步骤中多要求在低温条件下搅拌或摇匀，低温和搅拌都增大吸水的风险，因此应尽量降低室内湿度，缩小室温与反应温度的温差，尽可能地密封投料瓶并匀速搅拌，这样有利于降低水解杂质的产生。

关于非对映异构体杂质，由于多肽固相合成中消旋与肽键的形成是彼此竞争的，因而应根据消旋的机制，注意缩合剂、氨基酸侧链保护基团的选择，以及对反应条件、投料比的考虑，尽可能降低多肽合成的消旋程度。例如关于肽键缩合的试剂和缩合方法的选择。常见的缩合方法和试剂有碳二亚胺法、活化酯法、酰基叠氮物法、脲鎓盐试剂法、磷鎓盐试剂法、酸酐法等。以上缩合方法及缩合试剂都有各自特性:磷鎓盐试剂中的BOP是一种比较高效的缩合剂，但反应中易生成具有致癌性和强毒性的HMPA;叠氮法被认为是目前最不易产生消旋化倾向的缩合方法;脲鎓盐试剂中的HBTU和TBTU的缩合产率高，并且能减少甚至排除消旋及副反应的发生;碳二亚胺化合物中的DCC价格较经济曾是常用的缩合剂，但它具有较高的C端差向异构化和消旋化倾向;而当DCC与HOBt等联合使用时能有效地解决消旋化等问题，现在又得到了广泛应用。多肽合成研究者应该充分了解这些缩合方法的特性，再结合目标合成肽的现实情况(包含氨基酸侧链的情况)选择合适的缩合试剂与方法。当肽链中含有苯丙氨酸、半胱氨酸、组氨酸等易消旋的氨基酸时，更须注意对合成工艺进行研究。另外采用D－型的氨基酸制备异构体对照样品时，应通过合适的色谱条件检验当前工艺下该氨基酸的消旋化程度，以指导优化改进此位点氨基酸的缩合工艺。例如，某多肽合成单位对四肽(NH2－His－Gly－Glu－Gly－COOH)固相合成中组氨酸缩合步骤的消旋程度进行了研究，通过增加Fmoc－His(Trt)－OH的投料量、采用高效缩合剂的方法，加快了肽缩合的速率，降低组氨酸的消旋几率。检测结果表明此方法能将组氨酸的消旋降低一半左右。

3.3 优化冻干、制剂、存储和运输条件

在冻干、制剂、存储、运输等过程中，多肽药物与一般化学药物相比稳定性差，由于所处环境的温度、湿度、光照、pH值发生改变，很容易产生水解或消旋化反应。因此需要根据肽类药物稳定性的特性选择合适的考察项目与试验条件，进行相关的稳定性试验，得到多肽药物的最适宜存储条件，并根据最适宜的条件优化冻干和制剂中的条件。比如，某新型抗艾多肽药物在弱碱性条件中比较稳定，则在冻干和制剂过程中应尽可能避免酸性试剂和强碱性试剂的使用。因为即便后续步骤中可以通过试剂酸碱中和调节pH值，但在pH值调和前往往易发生消旋化等不可逆反应;在存储和运输中更是应该杜绝酸性和强碱性环境，最终使药物的纯度和有效性得到保证。

与其他化学药物不同，多肽药物一般具有不同程度的表面活性，可能会与直接接触药物的容器和包装材料发生吸附等相互作用，从而引起水解或消旋化反应。例如玻璃表面的硅醇基能够与某些多肽发生相互作用。因此，在选择包装材料时应注意研究多肽药物与包材的相互作用，有时可选用经过特殊处理的包装容器，如将容器的表面进行硅烷化处理等。

4 结论与展望

某些氨基酸水解产生的水解杂质和消旋产生的非对映异构体杂质是多肽药物合成中一类重要的有关物质，当前大多数多肽合成容易忽视对这2类杂质的控制。本文通过对合成多肽中氨基酸的水解和消旋进行分析，提出了一些合理建议，要求采用合适的分析检测方法研究多肽的水解杂质和非对映异构体杂质，通过加强起始原料质量控制，改进工艺过程的控制，优化冻干制剂存储运输的条件，从而最终使多肽合成产业更好、更健康地发展。

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(责任编辑 何杰玲)

Hydrolysis Impurities and Diastereoisomeric Impurities in
Solid-phase Peptide Synthetic Drugs

GAO Yan－long1，WU Chao－zhu1，XU Fan1，JIANG He1，2
(1.School of Pharmacy and Biology，Chongqing University of Technology，Chongqing 400050，
China;2.Chongqing Frontier Biological Technology Co.Ltd.，Chongqing 400041，China)

This paper discusses the research and control of hydrolysis impurities and diaste－reoisomeric impurities in solid－phase peptide synthetic drugs development.The hydrolysis and racemic mechanisms during a peptide－bond－forming reaction were introduced.Recommendations were provided on quality control of synthetic materials，control of manufacturing process，and choice of analytical methods.Results show that hydrolysis and diastereoisomeric impurities are important parts of related substances in synthetic peptide drugs development.More attention should be paid to the research and control of hydrolysis impurities and dia－stereoisomeric impurities.

solid－phase peptide synthetic;impurity;hydrolysis;diastereoisomer

R512.91

A

1674－8425(2014)03－0069－08

10.3969/j.issn.1674－8425(z).2014.03.013

2013－11－26

重庆市科技攻关计划项目(cstc2001ggc10003－29)

郜炎龙(1988—)，男，河南人，硕士研究生，主要从事多肽相合成与抗HIV药物研究。

郜炎龙，吴超柱，徐凡，等.多肽药物固相合成中的水解杂质和非对映异构体杂质的研究［J］.重庆理工大学学报:自然科学版，2014(3):69－76.

format:GAO Yan－long，WU Chao－zhu，XU Fan，et al.Hydrolysis Impurities and Diastereoisomeric Impurities in Solid－phase Peptide Synthetic Drugs［J］.Journal of Chongqing University of Technology:Natural Science，2014(3):69－76.