独角莲油微乳的抗肿瘤作用

李 昭 周月宏 王俊平

1.沈阳医学院药理学教研室，辽宁沈阳 110034；2.沈阳医学院附属奉天医院，辽宁沈阳 110024

独角莲系天南星科多年生草本植物，在我国传统中医治疗中广泛用于治疗多种恶性肿瘤，有较好的临床疗效，同时动物模型实验也显示独角莲明显抑制肿瘤生长[1]。有人研究了独角莲的抗肿瘤活性成分，结果表明其水提取物、二氯甲烷提取物和乙醚提取物均具有较强的体外抗肿瘤作用[2-3]。独角莲口服对消化系统刺激性很强，脂溶性成分不利于静脉给药[4]。因此，我们研制了独角莲油微乳，以解决独角莲口服刺激性大和静脉给药的困难。

1 实验材料

1.1 仪器和药品

BSXT-06型索氏提取器（上海）；ELS800激光粒度/Zeta电位分析仪（日本）；JSM-T200扫描型电子显微镜（JEOL，日本）。生独角莲 （辽宁凤城）；聚乙二醇－二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺 （PEGDSPE）（Polylipid Co.Ltd， 美国）。

1.2 动物

昆明小鼠，18～20g，雌性，（沈阳医学院实验动物中心，许可证：SYXK(辽)2003-0026）；S180肉瘤瘤原及艾氏腹水癌（由天津医药科学研究院）。

2 试验方法

2.1 独角莲油微乳的制备

取干燥独角莲块茎500g,用粉碎机制成粉末。采用索氏提取器，以二氯甲烷为溶剂，提取至2 h,转移提取液入旋转蒸发仪，回收二氯甲烷，即得到淡黄色独角莲油，置通风橱中，挥发残留二氯甲烷至无味为止，大约5 mL。取独角莲油0.5 mL，PEG-DSPE（PEG分子量为 2000，表面活性剂）1 g，胆固醇 50 mg，把表面活性剂和胆固醇溶于100 mL无水乙醇中，然后与独角莲油混合，在50℃的水浴中混合成透明溶液，转移到旋转蒸发仪中，除去乙醇，制成薄膜，然后加入50 mL5%注射用葡萄糖，于冰水中高速分散5 min，反复3次，200nm无菌微孔滤膜过滤即得独角莲油微乳。

2.2 急性毒性试验

寇氏法计算独角莲油微乳的半数致死量（LD50）和95%可信限。

2.3 动物肿瘤模型的建立

在无菌条件下，取第10～14天生长良好的S180瘤原和艾氏腹水癌瘤原，剥去包膜及中心坏死组织，用生理盐水洗净，分别制备体积比为1：10的匀浆。在动物前肢右腋下进行碘酒/乙醇消毒，然后接种S180肉瘤，每只动物0.2 mL瘤细胞匀浆悬液，建立实体型动物肿瘤模型。将艾氏腹水癌瘤原用注射用生理盐水稀释10倍，摇匀，每只小鼠腹腔注射0.2 mL，建立腹水型肿瘤模型。于接种后次日，按体重差别最小原则，将动物按体重差最小原则分为5组每组20只，且雌、雄动物数相等。

2.4 给药与药效评价

给药方案：阳性对照阿霉素剂量为1mg/kg,每日尾静脉给药1次，共9次。实验组共设高、中、低三个剂量，分别为：0.08、0.04和0.02（mL独角莲油微乳/kg动物）。肿瘤接种后第21天，处死动物，解剖剥离S180瘤块,称瘤重，计算肿瘤生长抑制率（TIR），计算公式为TIR＝（对照组平均瘤重-实验组平均瘤重）/对照组平均瘤重。腹水型动物肿瘤模型，采用生命延长率来评价药效。

2.5 统计学方法

3 结果

3.1 独角莲油微乳的急性毒性

LD50＝0.4mL 独角莲油/kg动物，95%可信限为：[0.36，0.52]（独角莲油/kg动物)。

3.2 独角莲油微乳的抗肿瘤作用

见表 1。

结果表明，独角莲油微乳，经静脉给药，可以显著降低S180肉瘤的生长速度，并延长艾氏腹水癌动物的生存时间。

4 讨论

微乳（nanoemulsion）是由水、油、表面活性剂等组成，粒径为1～150nm、各向同性的透明或半透明的均相分散体系[5]。微乳具有许多其它制剂无可比拟的优点：属热力学稳定系统，经热压灭菌或离心也不能使之分层；工艺简单，制备过程不需特殊设备；黏度低，可减少注射时的疼痛；具有缓释和靶向作用，能够促进所携带的药物蓄积到血管通透性较高的肿瘤组织，减少所携带药物向正常组织分布，降低其不良反应。独角莲油不溶于水难以静脉注射，加之毒性大，口服刺激性严重[6]。因此，微乳是独角莲油比较理想的载体。

表1 独角莲油微乳（DON）静脉给药对小鼠S180抑瘤率及小鼠艾氏腹水癌肉瘤生命延长率的作用

本实验制备的独角莲油微乳，粒径大约100nm。采用静脉注射给药途径，对S180肉瘤和艾氏腹水癌小鼠模型进行抗肿瘤作用的研究，以肿瘤生长抑制率（TIR）和生命延长率作为考察指标，独角莲油微乳高、中、低剂量组均抑制肿瘤S180的生长，其中高剂量独角莲油微乳组抑瘤率高达51.3%，并且各组P＜0.01，三剂量组对艾氏腹水癌的生长延长率最高达82.9%，各组P＜0.01，可见独角莲油微乳具有显著地抑制小鼠S180肉瘤的生长速度，延长艾氏腹水癌的小鼠的生命的作用。

本实验显示独角莲油微乳，大小均匀，实现了注射液给药，避免了独角莲对胃肠道的强烈刺激，独角莲油微乳可以作为抗肿瘤药物的理想载体[7-8]。独角莲油微乳具有显著地抗实体肿瘤作用，也能够延长腹水型荷瘤动物的生命时间。因此，独角莲油微乳有可能成为一种新型的抗肿瘤药物。然而，对于独角莲油的抗癌活性成分、独角莲油的抗癌作用机制及制造工艺、其是否与其它抗肿瘤药物具有协同抗肿瘤作用等方面，尚待进一步研究。

[1]何秀霞.独角莲提取液体外抗宫颈癌Hela细胞增殖和诱导凋亡的研究[J].时珍国医国药,2011,22(7):1629-1621.

[2]客蕊.独角莲含药血清对肿瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用的研究[J].中医药学报,2011,39(2):37-40.

[3]段玉敏.独角莲乙醇提取物体外抗肿瘤实验研究[J].中医药学报,2010（3）:20.

[4]张婷婷.禹白附的化学成分与药理作用研究进展[J].时珍国医国药,2010,21(10):2642-2644.

[5]Li D,Yang K,Li JS,et al.Int J Nanomedicine,2012,7:6105-6114.

[6]张红伟,张振凌,刘博.白附子炮制后新增成分的分离和结构鉴定[J].时珍国医国药,2010,21(5):1197-1198.

[7]王俊平.阿克拉霉素A长循环微乳用于肿瘤小剂量化疗的研究[J].中国医院药学杂志,2009,29(19):1645-1648.

[8]王俊平.紫杉醇微乳抗肿瘤作用的研究[J].中国现代医药杂志,2009,11(2):10-12.