中国林蛙栖息地环境质量评价

肖井雷，朱键勋，于洋洋，姜大成

(长春中医药大学，长春 130117)

中国林蛙(RanatemporariachensinensisDavid)属于国家二级保护动物，亦被世界自然保护联盟列为易危物种。中国林蛙全身皆为宝，是一种有重要经济价值和科学研究价值的两栖陆生动物。由于中国林蛙栖息的生态环境不断遭到破坏，再加上人民生活水平不断提高，中国林蛙及其制品也倍受人们偏爱，致使人们大量捕捉中国林蛙，从而导致野生中国林蛙资源日益减少，个别地区野生中国林蛙已经绝迹。因此，近年来已在东北地区进行了大量的人工养殖。为保证养殖基地生产出安全、有效、质量稳定可控的中国林蛙及其附属产品原料，保证药材及其系列产品的质量要求,我省在第四次全国中药资源普查之际，开展了中国林蛙资源现状专项普查,采集了3个养殖地的生长环境实验样品。现对土壤和水质样品进行检测评价，以期为建立中国林蛙规范化养殖示范基地提供科学依据。

1 仪器与材料

AFS-930型顺序注射原子荧光光度计(北京吉天仪器有限公司)，AA-6800原子吸收分光光度计(日本岛津公司)。5种重金属标准物质均购于国家标准物质中心，规格为1.00 mg/mL。盐酸、硝酸、高氯酸、氢氧化钾均为优级纯，氢氟酸氯化钠、氢氧化钠、硫脲、抗坏血酸、硼氢化钾为分析纯。

2 样品采集

2.1 土壤样品的采集[1]在中国林蛙生活的林地(50 m×50 m)范围内，取梅花形6个分点，拂去表面落叶层和草本植被，用塑料铲子取地表表层0～20 cm的土样混合约2～3 kg，置于洁净干燥的布袋中，置阴凉处保存备用，采样地点见表1。

表1 样品采集地点

2.2 水样品的采集[2]在中国林蛙生活的森林中、森林附近的小溪、小河以及中国林蛙进行冬眠的越冬池进行水样采集。采样前先用被采集水样反复冲洗干燥的聚乙烯塑料瓶(事先用20%稀硝酸浸泡48 h后，用去离子水冲洗干净)2～3遍后采集。采集后的样品中需每升水样加入2 mL硝酸，4 ℃保存。

3 方法与结果

3.1 水样的处理 取水样1 000 mL于烧杯内，置于电炉上加热蒸发至近干，冷却后用去离子水洗涤杯壁数次，定容至20 mL，供测定用。

3.2 土样的处理 参照相关文献[1]中的方法对土样进行前处理。

3.3 空白溶液制备 精密吸取适量混酸(硝酸∶高氯酸=4∶1)放入凯氏烧瓶中至于电炉上加热至近干，停止加热，降至室温，加入5 mL去离子水加热排酸。取下降至室温。用2%硝酸溶液定容至50 mL，用于铅(Pb)、镉(Cd)和铜(Cu)的测定。

精密吸取5 mL混酸(硝酸∶高氯酸=4∶1)放入凯氏烧瓶中，瓶口加一个小三角漏斗，电炉上加热至近干，停止加热，降至室温，加入5 mL去离子水加热排酸。取下降至室温。用5%的盐酸定容到50 mL，用于砷(As)和汞(Hg)的测定。

3.4 供试品的制备 参照《中国药典》中相应项下制备。

3.5 含量测定[3-11]

3.5.1 仪器工作条件 1)铅测定工作条件，波长：283.3 nm；灯电流：440 mA；狭缝:0.7 nm；燃烧高度：1 nm；干燥温度：110～130 ℃；灰化温度：850 ℃；原子化温度:160 ℃；净化温度：2 450 ℃；乙炔气压力：1 MPa。

2)镉测定仪器条件，波长：228.8 nm；灯电流：230 mA；狭缝：0.7 nm；燃烧高度:1 mm；干燥温度：110 ℃～130 ℃；灰化温度：500 ℃；原子化温度:1 600 ℃；净化温度：2 450 ℃。

3)铜测定仪器条件，检测波长：324.75 nm；空气-乙炔火焰；氘灯背景校正；火焰高度：5 mm；狭缝：0.2 nm；灯电流：3 mA。

4)砷测定仪器条件，光电倍增管负高压：270 V；灯电流：60 mA；载气流量：400 mL/min；屏蔽气流量:800 mL/min；原子化器高度：8 mm。

5)汞测定仪器条件，光电倍增管负高压：270 V；灯电流：30 mA；载气流量：400 mL/min；屏蔽气流量:800 mL/min；原子化器高度：8 mm。

3.5.2 方法学考察 线性关系:分别对铅、镉、铜、砷和汞进行线性关系的考察，结果显示各种元素在相应线性范围内线性关系良好，结果见表2。

表2 Pb、Cd、Cu、As和Hg的标准曲线

精密度试验：取适量对照品溶液，按照上述条件进行重金属含量测定，平行进样10次，计算每种元素的RSD值，结果见表3。5种元素RSD值分别在0.431%～2.917%之间，表明该仪器精密度良好。

表3 5种重金属元素精密度检查

稳定性试验:将定容后的样品放置，分别于0，12，24，48，72 h后进行测定，结果见表4。

各个元素的含量随着放置时间没有明显改变，表明重金属元素在0～72 h内稳定性良好。

表4 样品中重金属元素稳定性 ng/mL

回收率试验：在已知含量的水样和土壤样品中加入一定量的标准品，按照上述方法进行操作，求各元素的回收率，结果见表5～6。水样中重金属元素回收率在95.3%～101.2%,土壤中重金属元素回收率在96.9%～100.2%,表明实验所用方法对各个元素回收率较高。

表5 水样品中重金属回收率

注：“—”为未检出或低于检出限

表6 土壤样品中重金属回收率

3.5.3 重金属含量测定 以去离子水(每升水加入2 mL硝酸)为空白对照，按照上述方法进行测定，每份样品平行进样6次取平均值，结果见表7～8。

表7 水样品中重金属含量 mg/L

注：“—”为未检出或低于检出限

表8 土壤样品中重金属含量 mg/kg

3.5.4 土壤的pH值测定 称取5.0 g土样(过20目筛)，加入无二氧化碳的蒸馏水50 mL，用玻璃棒剧烈搅动2 min，静置30 min后，用pH计进行测定，结果见表9。

表9 土壤的pH值

4 结论

4.1 中国林蛙栖息地环境中水质评价 依据我国地表水环境质量标准GB 3838-2002中对铅、铜、镉、砷、汞的限量要求，中国林蛙栖息地水质中铅、镉、砷、汞符合国家Ⅰ类标准；Y1、Y2产地水质中铜元素符合国家Ⅱ类标准、Y3产地越冬池水中铜元素符合国家Ⅰ类标准。

4.2 中国林蛙栖息地环境中土壤质量评价 按照土壤环境质量标准GB 15618-1995,Y1产地土壤中铅、汞符合国家二级标级，铜符合国家一级标级，镉符合国家三级标准，砷超出国家标准；Y2产地土壤中铅符合国家一级标准，镉、砷符合国家三级标准，铜、汞符合国家二级标准；Y3产地土壤中铜符合国家一级标准，铅、汞符合国家二级标准，镉、砷符合国家三级标准。

该研究表明，中国林蛙栖息地生态环境质量符合国家相关标准规定，该环境下所养殖的中国林蛙及其产哈蟆油具有一定的安全性。

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