奥曲肽对大鼠急性胰腺炎腺泡死亡方式的影响

曹 勇 蔡 伟 黄林义 张中文

南京医科大学附属江宁医院普外二科 南京 211100

急性胰腺炎(Acute Pancreatitis，AP)是外科常见的急腹症，其发病机制的腺泡细胞凋亡学说近年来引人注目［1］，而奥曲肽对AP 的治疗效果已经得到临床普遍认可［2］，但其作用机理尚未完全清楚。本课题试图通过奥曲肽诱导胰腺腺泡细胞凋亡的角度，初步探讨其治疗胰腺炎的可能作用机制。

1 材料与方法

1.1 试验动物及试剂 SD 大鼠由南通大学实验动物中心提供，蛙皮素购自美国Sigma 公司，原位细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL 试剂盒)、血清淀粉酶(AMY)检测试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。TaqDNA 聚合酶及缓冲系统、蛋白酶K、脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)、Fluorescein -dUTP、RNA 酶抑制剂(rRNasin)由美国Promega 公司提供。

1.2 动物分组、模型制备 SD 大鼠30 只，雌雄不限，体质量250～300 g。将动物随机分为三组，每组10 只，试验前禁食不禁水12 h。(1)空白对照组。(2)急性胰腺炎组:麻醉后于大鼠后肢根部皮下注射蛙皮素15 g/只，1 次/h，共4 次。(3)急性胰腺炎治疗组:按奥曲肽0.001 mg/kg，后肢根部皮下注射，1 次/8h，制作AP 模型过程同［2］。

1.3 检测方法

1.3.1 血清AMY 检测 采用碘-淀粉比色法测定，细胞凋亡检测采用末端脱氧核苷酸介导的dUTP 缺口末端标记(TUNEL)法。凋亡指数(Apoptotic Index，AI)计算方法:数4个高倍镜视野，每个视野中计算250个腺泡中凋亡细胞数。病理组织学评分标准按改良Schmidt 法［3］进行。

1.3.2 逆转录-多聚酶链反应(RT -PCR)检测 引物序列均由南京若尔曼生物技术有限公司合成，引物信息如下:

检测步骤:(1)总RNA 的制备。(2)RT 反应。(3)PCR 反应。(4)反应结束后进行PCR 产物电泳。

1.4 统计学方法 数据采用Stata7.0 版本进行统计学处理。……