影响外周血DNA提取质量因素分析

李江曼，韩雪娜，袁 果,2，陈莉莎,2，侯志超，户彦龙,2，李 丹,3，黄 佳，王立东,2*

(1.郑州大学第一附属医院 河南省食管癌重点开放实验室，郑州大学 基础医学院，河南 郑州 450052;2.新乡医学院，河南 新乡 453003;3.河南省荣康医院，河南 新乡 453003)

提取优质的基因组DNA是目前肿瘤分子生物学研究能否取得重要结果的关键。外周血标本采集方便，不受地点、时间等客观因素的影响，是肿瘤分子生物学研究中使用最广泛的标本。血样离体后可立即进行预处理，甚至立即提取DNA、RNA等。但是在科研实践中，病例标本来源多零散，采集的血液样品不能立即处理，需要暂时存放，甚至在-70 ℃以下[1]的深低温冰箱存放数年，待收集样品达一定数量后才能开始进行研究。提取DNA质量的好坏对研究有很大影响[2]。冰冻外周血标本提取DNA的质量是否受存放时间的影响尚不十分清楚。为此，我们通过分析比较-80 ℃冻存1 a、2 a、3 a和4 a的外周血标本提取DNA质量，为研究者提供冻存时间对外周血提取DNA质量影响的相关数据。

1 材料和方法

1.1 样品来源

40例血液标本(-80℃储存1 a、2 a、3 a和4 a的标本各10例)均来自河南省食管癌重点开放实验室生物样品资料库。血样采集：在采集对象知情同意的情况下，抽取5 mL空腹外周静脉血，EDTA-K2抗凝[3]，-80℃冰箱保存备用。

1.2 DNA提取

DNA提取试剂盒FlexiGene DNA Kit(250)[4]购于Qiagen公司。全血标本从-80℃冰箱里取出后，进行梯度解冻(-40 ℃ 24 h，-20 ℃ 24 h，4 ℃ 24 h)。取450 μL全血样品，按试剂盒提供方法进行DNA抽提。提取DNA置4 ℃冰箱待用。

1.3 DNA质量检测

DNA电泳：采用质量分数为1%琼脂糖进行电泳，BTS-20.M全自动数字显影凝胶成像系统和LUV-260D紫外线投射仪进行图像采集。……