HPLC法测定注射用甲硝唑磷酸二钠的含量

陕西博森生物制药股份集团有限公司，陕西 西安 710118

HPLC法测定注射用甲硝唑磷酸二钠的含量

王英许波陈峻刘艳玲郝群群

陕西博森生物制药股份集团有限公司，陕西 西安 710118

目的建立高效液相色谱法测定注射用甲硝唑磷酸二钠含量的方法。方法采用Shim-pack VP-ODS(4.6mm×250mm，5μm)；以0.68%磷酸二氢钾溶液(用氢氧化钠试液调节pH至6.0)-甲醇(80 ∶20)为流动相，流速为1.0ml·min-1，检测波长为321nm，进样体积为20μl。结果甲硝唑磷酸二钠浓度在82.7～248.1mg·L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r= 0.999 9)；平均加样回收率为100.5%(RSD=0.49%，n=9)。结论本方法简单、快速、准确，稳定，重现性好。

注射用甲硝唑磷酸二钠；HPLC；含量

甲硝唑磷酸二钠(Metronidazole Disodium Phosphate)是一种硝基咪唑类抗生素，具有杀菌能力强，抗菌谱广，不易产生耐药性，价格低廉，疗效好，对厌氧菌及原虫有独特的杀灭作用的特点。甲硝唑[1]及其磷酸盐甲硝唑磷酸二钠(含其制剂)的质量标准[2、3]的含量测定方法均为非水滴定法，用电位法指示终点。亦有文献报道[4]对甲硝唑磷酸二钠注射剂采用紫外分光光度法进行含量测定，但上述方法均不能完全排除有关物质的干扰，结果的准确性较低。本文采用了高效液相色谱法测定注射用甲硝唑磷酸二钠的含量。结果表明，该方法分离度高，重现性好，且此方法简单、快速、准确，稳定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪；Shim-pack VP-ODS(4.6mm×250mm，5μm)。

1.2 试药 甲硝唑磷酸二钠对照品(自制，乙醇重结晶)；注射用甲硝唑磷酸二钠样品(自制，批号：20120901，20120903，20120905)。甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Shim-pack VP-ODS(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：0.68%磷酸二氢钾溶液(用氢氧化钠试液调节pH至6.0)-甲醇=80∶20；检测波长为321nm；柱温：室温；流速：1.0ml·min-1；进样体积：20μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的配制 取用五氧化二磷减压干燥至恒重的甲硝唑磷酸二钠对照品适量，精密称定，加流动相制成每mL约含0.08mg甲硝唑磷酸二钠的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的配制 取注射用甲硝唑磷酸二钠适量，精密称定，加流动相制成每ml约含0.08mg甲硝唑磷酸二钠的溶液，即得。

2.3 方法学的考察

2.3.1 系统适用性试验 精密量取“2.2.1”项下溶液、“2.2.2”项下溶液及流动相各20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，试验结果表明：甲硝唑磷酸二钠与其他物质分离良好，且流动相在此条件下无干扰，色谱图见图1。

A对照品；B供试品；C流动相；1 甲硝唑磷酸二钠峰

2.3.2 线性关系考察 精密称取用五氧化二磷减压至恒重的甲硝唑磷酸二钠对照品8.15mg，置100ml棕色量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精量取10、15、20、25、30μl，注入液相色谱仪，按照“2.1”项下色谱条件进行检测，记录色谱图及峰面积。以甲硝唑磷酸二钠质量浓度C(mg·L-1)为横坐标，以峰面积A为纵坐标绘制标准曲线，并进行回归分析，得回归方程：Y = 13586X+ 93175(r= 0.999 9)。结果表明，甲硝唑磷酸二钠在82.7～248.1mg·l-1范围内呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验 精密量取“2.2.1”项下溶液20μl注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图，测定甲硝唑磷酸二钠的精密度，其峰面积的RSD为0.25%，表明该方法的精密度良好。

2.3.4 重复性试验 取同一批号(20120901)的样品6份，依照“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，测定甲硝唑磷酸二钠的含量，其相对标准偏差RSD为0.42%，表明本法重现性较好。

2.3.5 稳定性试验 取新制备的供试品溶液，分别于0、6、12，、16、24h进样20μl，记录色谱图及峰面积，计算RSD。结果表明甲硝唑磷酸二钠在24h内稳定。

2.3.6 回收率试验 取甲硝唑磷酸二钠约32、40、48mg，三个剂量组各三份，精密称定，分别置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度。取5ml加流动相稀释至25ml，作为供试品溶液，另取用五氧化二磷减压干燥至恒重的甲硝唑磷酸二钠对照品适量，加流动相制成每1ml约含0.08mg的溶液，作为对照溶液。按照“2.1”项下色谱条件进行检测，测定注射用甲硝唑磷酸二钠含量，平均回收率为100.5 %(RSD为0.5%)，表明本法具有良好的回收率。

2.4.7 样品测定 取连续生产的3批样品按正文供试品溶液的制备方法制备，并按拟定色谱条件测定，结果批号20120901、20120903及20120905三批注射用甲硝唑磷酸二钠中甲硝唑磷酸二钠含量分别为标示量的100.2%，99.9%和100.0%。

3 讨论

3.1 甲硝唑磷酸二钠在水中易溶，参考文献[4]含量测定的溶剂，最初选择水为注射用甲硝唑磷酸二钠的溶剂，但经试验证实，水为溶剂时，溶液的稳定性差，故选择流动相作为检测甲硝唑磷酸二钠的溶剂。

3.2 在色谱系统流动相的选择中，0.68%磷酸二氢钾溶液(用氢氧化钠试液调节pH至6.0)-甲醇(80:20)为流动相时，甲硝唑磷酸二钠峰形对称，保留时间相对合适(4～5min)，并且与其他杂质峰均能达到基线分离，分离度符合要求。

[1] 国家药典委员会．中华人民共和国药典(二部)[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：153.

[2] YBH1581205，国家食品药品监督管理局标准[S]．

[3] WS1-(X-169)-97Z-2001，甲硝唑磷酸二钠(含其制剂)的质量标准[S]．

[4] 傅素君，陈彤．紫外分光光度法测定注射用甲硝唑磷酸二钠的含量[J]．华西药学杂志，1998，13(2)：114-115．

DeterminationofMetronidazoleDisodiumPhosphateforInjectionbyHPLC

WANG Ying XU Bo CHEN Jun LIU Yan-ling HAO Qun-qun

Shanxi Bosen Bio-Pharmaceutical Group Co.,Ltd. Xi’an 710118,China

ObjectiveTo establish the HPLC method for determination of Metronidazole Disodium Phosphate.MethodAn HPLC method was developed, chromatographic conditions included a Shim-pack VP-ODS colunm with the mobile phase 0.68% buffer stock solution(With sodium hydroxide solution to adjust pH to 6.0)- methyl alcohol(80∶20), The flow rate of 1.0 mL·min-1, detection wavelength of 321 nm, sample amount to 20μL.Resultsthe linearity was good in the range of 82.7mg～248.1mg·L-1(r= 0.999 9); The average sample recovery rate was100.5%(RSD=0.49%，n=9).ConclusionThis method is simple, rapid, accurate, stable, with good reproducibility.

Metronidazole Disodium Phosphate for Injection; HPLC; content

R286.0

A

1007-8517(2014)14-0024-02

2014.06.04)