消痤胶囊对兔耳痤疮模型抗角化作用及血清睾酮、雌二醇含量的影响

张 丽，王 凡，尹小娥，朱 镭，薛国娜，马拴全

（1.陕西中医学院附属医院，陕西咸阳 712000;2.陕西中医学院2011级硕士研究生，陕西咸阳 712046）

消痤胶囊对兔耳痤疮模型抗角化作用及血清睾酮、雌二醇含量的影响

张 丽1，王 凡1，尹小娥1，朱 镭2，薛国娜2，马拴全1

（1.陕西中医学院附属医院，陕西咸阳 712000;2.陕西中医学院2011级硕士研究生，陕西咸阳 712046）

目的 观察消痤胶囊对兔耳痤疮模型毛囊皮脂腺导管的抗角化作用及对血清睾酮（T）、雌二醇（E2）含量的影响。方法 将健康新西兰白兔随机分为消痤胶囊大、中、小剂量组、清热暗疮丸组、模型实验组、正常对照组，采用Kligman法建立兔耳痤疮模型，造模成功后分别灌饲消痤胶囊、清热暗疮丸和纯净水2周。通过肉眼和镜下病检观察皮损的角化情况，采用电化学发光法测定血清T、E2含量。结果 消痤胶囊各剂量组和清热暗疮丸组均可不同程度的改善兔耳痤疮模型毛囊皮脂腺导管的异常角化，对血清T的含量有降低作用、对血清E2含量有升高作用，并呈量效关系。结论 消痤胶囊可改善兔耳痤疮模型毛囊皮脂腺导管的异常角化，调节体内激素水平，对兔耳实验性痤疮有较好的治疗作用。

消痤胶囊;痤疮;血清睾酮;雌二醇

消痤胶囊是我院马拴全等老师经过多年的临床 实践研究而制成的院内制剂，具有清泄肺胃蕴热，凉血解毒通便之功效，临床用于寻常痤疮的治疗取得了较好的疗效。本实验根据痤疮发病机制，观察消痤胶囊对兔耳痤疮模型的抗角化作用及对血清T、E2含量的影响，为临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 试验动物 健康新西兰白兔36只，雄性，体质量2.0～2.5 kg，标准饲料喂养，由西安市沣渭新区实验动物养殖场提供，动物合格证号2012-002。

1.1.2 药物及试剂 消痤胶囊:陕西中医学院附属医院制剂室提供;清热暗疮丸:吉林省天光药业有限公司，批准文号:国药准字Z22020488;煤焦油。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与建立模型 雄性白兔36只，适应性喂养1周。采用随机对照方法分为消痤胶囊大、中、小剂量组、清热暗疮丸组、模型实验组、正常对照组，每组动物6只。除正常对照组外其余各组均按Kligman法［1］分别在其双耳内侧面耳管开口处约2 cm×2 cm范围，涂煤焦油0.5 mL/次，1次/d，连续2周，建立痤疮模型。

1.2.2 给药方法 造模2周后，分别用相应药物给以灌胃，给药剂量参考徐叔云主编的《药理实验方法学》（第3版）［2］计算（兔的等效剂量相当于成人的3.27倍）。消痤胶囊大、中、小剂量分别按1.2，0.6，0.3 g/kg（相当于成人用药量的4，2，1倍）灌饲消痤胶囊溶液，阳性对照药清热暗疮丸组按0.1 g/kg（相当于成人用量的1倍）灌饲清热暗疮丸溶液，给药容积为10 mL/kg，正常对照组、模型实验组同法灌胃等容积的纯净水，1次/d，连续2周。

1.2.3 取材及观察 造模及给药过程中，肉眼观察兔耳皮肤变化。末次给药18 h后用注射器穿刺心脏取血5 mL，分离血清，保存标本，采用电化学发光法检测血清T、E2含量。随后给兔耳缘静脉注射5 mL空气处死，迅速于左右耳内侧面耳管开口处同一位置切取皮损，以10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，显微镜下观察组织学改变。

1.2.4 实验性痤疮的病理组织学判定标准［3］（－）为漏斗部仅有松散的角化的细胞，无粉刺生成;（+）为漏斗部仅有少量的黏连在一起的角化细胞，漏斗部不扩张;（++）为毛囊中中等量的角质栓塞，伸入皮脂腺导管，伴随皮脂腺导管的增生，漏斗扩张;（+++）为毛囊中紧密的角质栓塞引起毛囊重度扩张，皮脂腺导管上皮明显增生，部分皮脂腺发生退行变。

1.2.5 统计学处理 实验数据均采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，所有计量（定量）资料以均数±标准差（±s）表示，多组间均数的比较采用单因素方差分析，等级资料采用秩和检验，检验水平α=0.05。

2 结果

2.1 肉眼观察 空白组兔耳朵柔软、菲薄、透光度良好，其上可见清晰的毛细血管网，耳管开口处毛囊口排列整齐。其余各组涂抹煤焦油4～5 d后可见局部皮肤泛红、水肿，毛孔增大，有丘疹样物，触之有温热感;7～8 d后水肿消退，兔耳内侧面皮肤粗糙、增厚、变硬，透光度降低，毛囊口有黑色角栓，部分毛囊口隆起呈丘疹状，肉眼很难分清个数，与人类的粉刺相似;14～15 d达到高峰。经灌胃治疗14 d后，消痤胶囊各剂量组可见兔耳皮肤变薄变软，隆起状丘疹大部分消退，毛孔明显缩小，毛囊角栓减少明显，部分角栓脱落后遗留点状凹陷的毛囊;清热暗疮丸组兔耳表面仍较粗糙，丘疹有所消退，毛囊角栓部分脱落。

2.2 组织病理观察 正常组兔耳表皮较薄，约1层颗粒层，2～4层棘细胞层，表皮与真皮交界清楚;可见毛囊、皮脂腺。模型组可见表皮增厚，表皮和毛囊上皮的颗粒层增厚，棘层肥厚;部分相邻扩张的毛囊互相融合，毛囊口及漏斗部充满角化物质，并向皮脂腺延伸，皮脂腺分叶增多，单个皮脂腺直径明显增大;毛囊口被角质栓堵塞，毛囊漏斗部充满角化物质并扩大呈壶状;真皮上层毛细血管扩张，毛囊周围散在炎细胞浸润;基底细胞排列整齐，未见变性、液化和坏死等。消痤胶囊各剂量组可见表皮增厚、毛囊四周角化程度明显减轻，部分毛囊皮脂腺导管口轻度扩张，其内角化物质疏松、减少，皮脂腺缩小，真皮层炎症细胞减少，部分已接近正常组织。清热暗疮丸组表皮增厚及毛囊四周角化程度减轻，部分棘细胞及颗粒层肥厚，毛囊皮脂腺导管口及漏斗部有角质物，毛囊漏斗部扩大，内见少量角化物质充填，真皮层见少许炎症细胞浸润。

2.3 治疗后各组兔耳实验性痤疮组织病理学分级比较 见表1。

表1 治疗后各组兔耳实验性痤疮组织病理学分级比较（n=6） 只

2.4 消痤胶囊对兔血清睾酮水平的影响 见表2。

表2 消痤胶囊对兔血清睾酮水平的影响（±s，n=6）ng/mL

表2 消痤胶囊对兔血清睾酮水平的影响（±s，n=6）ng/mL

注:与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01;与清热暗疮丸组比较，△P＜0.05

组 别T正常对照组 0.865±0.351模型试验组 2.422±0.322消痤胶囊大剂量组 0.321±0.449##△消痤胶囊中剂量组 0.402±0.469##△消痤胶囊小剂量组 0.626±0.464##△清热暗疮丸组 1.600±0.417#

2.5 消痤胶囊对兔血清雌二醇水平的影响 见表3。表3消痤胶囊对兔血清雌二醇（E2）含量的影响（±s，n=6） pmol/L

2.5 消痤胶囊对兔血清雌二醇水平的影响 见表3。表3消痤胶囊对兔血清雌二醇（E2）含量的影响（±s，n=6） pmol/L

注:与模型组比较，##P＜0.01;与清热暗疮丸组比较，△△P＜0.01

组 别 E2正常对照组 47.387±3.620模型试验组 34.808±3.186消痤胶囊大剂量组 57.412±7.450##△△消痤胶囊中剂量组 56.082±8.646##△△消痤胶囊小剂量组 50.218±7.971##△△清热暗疮丸组 39.827±5.367

3 讨论

痤疮的发生为多种因素综合作用的结果，其病因及发病机制复杂，至今尚未完全明了，多与雄激素、皮脂分泌、痤疮丙酸杆菌增殖、毛囊皮脂腺导管的异常角化、心理及遗传等因素有关。主要原因是体内雄激素水平升高或相对升高，刺激皮脂腺增生，皮脂分泌多且浓稠，为痤疮丙酸杆菌繁殖提供有利条件，加之皮脂腺导管角化，毛囊口堵塞，引起局部炎症反应，形成丘疹、脓疱、结节等［4］。

本实验采用Kligman法在兔耳造模，是最常用的痤疮药物抗角化实验模型，具有可靠性高、重复性好的特点［5］，选用雄性家兔，使其体内的雄性激素对皮脂腺具有一定的刺激作用。按文献方法造模14 d后，兔耳内侧面煤焦油涂布处肉眼可见毛囊口有黑色角栓，部分毛囊口隆起呈丘疹状，显微镜下亦符合人类痤疮病理改变，提示造模成功。给予消痤胶囊治疗2周后，毛囊角化异常得到明显改善，其组织病理学分级与模型实验组比较，差异有统计学意义（P＜0.01），表明消痤胶囊可能通过纠正毛囊皮脂腺导管的角化异常改善寻常痤疮。

本实验中模型实验组动物血清睾酮与雌二醇水平较正常组有明显改变，经消痤胶囊各剂量组治疗后血清激素水平与模型实验组相比，差异有统计学意义（P＜0.01），提示消痤胶囊能通过降低血清睾酮含量，提升血清雌二醇含量来调节雌雄激素水平，达到治疗痤疮的目的［6］。

消痤胶囊由黄芩、枇杷叶、金银花、连翘、赤芍、丹参、生甘草等药物组成，方中黄芩清热泻火、解毒凉血为君药;连翘、金银花、枇杷叶、黄连、白花蛇舌草清热解毒为臣药;佐以丹参、白芷、大黄清热凉血消痈;甘草清热解毒、调和诸药为使药。诸药合用具有清泄肺胃蕴热，凉血解毒通便之功效，对肺胃蕴热型痤疮疗效较好。现代药理学研究［7-9］表明，黄芩具有较强的抗菌、消炎之功效，黄芩苷、黄芩素等是黄芩的主要成分，具有清热解毒、利肝保胆等药理作用，黄芩苷可能通过抑制雄性激素受体的表达而具有拮抗雄性激素对皮脂腺细胞活性的作用。丹参中丰富的丹参酮具有抗菌消炎、改善微循环、促进皮肤新陈代谢的作用，而且还有较温和的雌性激素活性和抗雄性激素的作用以及皮脂腺抑制作用。金银花、连翘、大黄等药均具有较强的抗病原微生物、减少炎性反应之功效。诸药合用从抗雄激素、抗菌消炎、减少皮脂腺分泌、改善毛囊导管的角化异常等方面，达到治疗痤疮的作用。

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Effects of resolving acne capsule on anti-keratinization and the content of testosterone，estradiol in rabbit ear acne model

ZHANG Li1，WANG Fan1，YI Xiao'e1，ZHU Lei2，XUE Guona2，MA Shuanquan1
（1.Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712000，Shaanxi Province，China;2.Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，Shaanxi Province，China）

ObjectiveTo observe the effect of resolving acne capsule on acne model of rabbit ear and the content of serum testosterone（T），estradiol（E2）.MethodsRabbits were randomly divided into resolving acne capsule group in high dose，middle dose，low dose，Qingre Anchuang pill group，the model group，normal control group.The kligman method was used to build animal model，then given resolving acne capsule，Qingre Anchuang pill and pure water two weeks.The anti-keratosis actions of the tested drugs were observed by naked eye and by microscope，the serum testosterone and estradiol was measured by Electro-Chemiluminescence immunoassay（ECLI）.ResultsAfter giving resolving acne capsule and Qingre Anchuang pill 2 weeks later，the acne keratosis was suppressed and the level of testosterone was decreased，the level of estradiol was increased and showed dosage-effect relationship.ConclusionResolving acne capsule can improve abnormal cornification of hair follicle and regulating hormone levels in acne model ofrabbits ear，resolving acne capsule has anti-acne effects.

resolving acne capsule;acne;serum testosterone;estradiol

R285.5

A

2095－6258（2014）05－0796－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.013

陕西省科学技术研究发展计划项目“消痤胶囊药效物质及作用机制研究”（2012k-05-06）。

张 丽（1975－），女，大学本科，副主任药师。研究方向:中药新剂型与新技术。

2014－04－14）