白芍生品及其炮制品中多糖及总糖的含量测定

秦亚东，周娟娟，李 飞，周 宙

（1.安徽中医药高等专科学校，安徽芜湖241002;2.芜湖市中医医院，安徽芜湖 241000，3.亳州市食品药品检验所，安徽亳州 236800）

白芍生品及其炮制品中多糖及总糖的含量测定

秦亚东1，周娟娟2，李 飞3，周 宙1

（1.安徽中医药高等专科学校，安徽芜湖241002;2.芜湖市中医医院，安徽芜湖 241000，3.亳州市食品药品检验所，安徽亳州 236800）

目的 比较不同炮制方法对白芍生品及其炮制品中多糖及总糖的含量变化。方法 采用硫酸-苯酚显色，使用紫外分光光度法在490 nm波长下测定吸光度。结果 白芍生品及其各种不同炮制品中多糖含量从高到低依次为:酒白芍＞白芍生品＞炒白芍;总糖含量从高到低依次为:酒白芍＞炒白芍＞白芍生品。结论 白芍生品及其炮制品中多糖及总糖含量存在显著性差异，不同的炮制工艺对白芍糖类成分的含量有一定的影响。

白芍;生品;炮制品;多糖;总糖

白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，药用白芍味苦、酸，微寒，归肝脾经。具有养血调经、敛阴止汗、柔肝止痛、平抑肝阳之功［1］。亳州所产白芍，又称为“亳白芍”，为安徽四大明药之一，是一种临床常用的重要中药材。现代研究往往集中于白芍药材小分子物质，如芍药苷、苯甲酰芍药苷、氧化芍药苷等，在心血管、神经、消化、内分泌代谢等系统疾病中具有一定的治疗作用［2］。芍药中大分子物质多糖活性在免疫系统及抗肿瘤方面有大量报道［3-6］。《中国药典》2010版（一部）收载白芍、炒白芍及酒白芍3种炮制品，白芍经炮制后小分子芍药苷含量明显下降［1，7］，而白芍中多糖及总糖的含量在炮制前后有何变化，报道甚少。本文通过对白芍生品及临床常用各种炮制品中多糖及总糖的含量测定，为临床合理用药及规范白芍GAP实施提供一些参考。

1 材料

1.1 仪器 安捷伦Cary 60型紫外可见分光光度仪（美国Agilent公司）;CAP124S型电子分析天平（德国赛多利斯公司）;Sigma3-18K型台式离心机（德国SIGMA公司）;FW100万能粉碎机（天津泰斯特公司）。

1.2 试药及试剂 白芍采集于安徽亳州市十九里镇，经安徽中药资源研究所刘晓龙研究员鉴定为Bletilla striata（Thunb.）Reichb.f.属，D-无水葡萄糖标准品购于中国食品药品检定研究院（批号:110833-201205），苯酚、硫酸、无水乙醇等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 白芍不同炮制品的制备

2.1.1 白芍生品 取3～5年生原药材根，去除泥沙，淋洗干净，趁鲜切片，60℃干燥至衡重，打粉，过40目筛，备用。

2.1.2 炒白芍 取上述净白芍片适量于热锅中，快速翻炒，待药材表面呈微黄时即可，温度190℃，翻炒约10 min，取出，室温放凉，打粉，过40目筛，备用。

2.1.3 酒白芍 取上述净白芍，加黄酒适量，拌匀、闷匀（约1.5 h），置锅中炒至白芍表面颜色呈微黄色时即可，室温放凉，打粉，过40目筛，备用。

2.2 葡萄糖标准溶液的配制 精密称量无水葡萄糖对照品100.3 μg，置于100 mL的容量瓶中，加蒸馏水溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。再精密量取10 mL，置于100 mL容量瓶中，定容，摇匀，制成浓度为100.3 μg/mL的标准葡萄糖溶液，备用。

2.3 5%苯酚溶液的配制 取苯酚约30.0 g，加铝片0.1 g，碳酸氢钠0.05 g，干馏，于182℃收集馏分。精密称量此馏分5.0 g，转移至100 mL棕色容量瓶中，趁热加入蒸馏水溶解并定容，摇匀备用。

2.4 线性关系考察 精密量取葡萄糖标准溶液0.10，0.20，0.40，0.80，1.20 mL，置于 5 只 20 mL 棕色比色管中，使用蒸馏水补充体积至2.00 mL，精密加入5%苯酚溶液1.00 mL，浓硫酸5.00 mL，震摇，热水浴中加热20 min，冰水浴中放冷至室温。于490 nm 处测定吸光度［8］，以葡萄糖浓度（C，μg/mL）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，得回归方程:Y=7.313 3+0.058 6，线性系数r=0.999 3。结果表明，葡萄糖在1.253 75～15.045 μg/mL浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.5 多糖的含量测定

2.5.1 白芍多糖供试品溶液的制备 分别精密称量“2.1”项下制备的白芍生品、炒白芍、酒白芍粉末约20 g，使用索式提取器，以石油醚（60～90℃）回流提取2次，料液比分别为10∶1，8∶1，回流时间分别为1，0.5 h，弃去提取液，除去脂溶性成分。药渣挥尽溶剂后，加入90%的乙醇，进行回流提取3次，料夜比分别为10∶1，8∶1，6∶1，提取时间分别为 1，0.5，0.5 h，弃去乙醇液，除去醇溶性杂质及低聚糖等。药渣挥尽乙醇后，加蒸馏水溶解，置于圆底烧瓶中进行水提，料夜比分别为10∶1，8∶1，提取时间分别为1，0.5 h，合并滤液，浓缩后加95%乙醇使含醇量达到90%，置冰箱中（4℃）过夜，离心处理得多糖，少量蒸馏水溶解，使用0.3%H2O230 mL褪色20 min、Sevage（正丁醇∶氯仿=5∶1）试剂脱蛋白处理，离心，弃去下层及变性蛋白，上层滤液浓缩至100 mL，摇匀备用。

2.5.2 精密度考察 分别精密吸取葡萄糖标准品溶液及白芍生品多糖供试液0.20 mL各6分，按“2.4”项下的测定方法进行测定。结果葡萄糖标准品溶液平均吸光度为0.300 2、白芍生品多糖供试液平均吸光度为0.752 1，RSD分别为0.42%和0.87%（n=6），表明该方法精密度符合要求。

2.5.3 稳定性考察 分别精密吸取葡萄糖标准品溶液及白芍生品多糖供试液0.20 mL各6分，按“2.4”项下的显色方法进行显色，每间隔30 min测定1次，连续测定5次。结果葡萄糖标准品溶液平均吸光度为0.310 8、白芍生品多糖供试液平均吸光度为0.761 5，RSD分别为1.89%和2.65%（n=6），表明稳定性良好，在2.5 h内测定结果可靠。

2.5.4 重复性试验 精密称取干燥至衡重的白芍生品粉末6分，按“2.5.1”项下先以石油醚除去脂溶性成分，以90%乙醇除去醇溶性杂质及低聚糖，再进行水提，利用活性炭进行退色、Sevage试剂脱蛋白处理，最后将滤液定容至100 mL。分别精密吸取0.10 mL，按“2.4”项下显色方法进行测定。结果，多糖平均含量为27.50%，RSD=1.78%（n=5），表明该方法重现性良好。

2.5.5 加样回收试验 精密称取干燥至恒重的白芍生品粉末约1.0 g，共6分，按照“2.5.1”项下进行石油醚脱脂、除去醇溶性及低聚糖杂质。精密称取葡萄糖标准品0.065 0 g置于10 mL容量瓶中，配制成0.006 5 g/mL的溶液。分别取该标准溶液1 mL，置于圆底烧瓶中，加入已脱脂、除去醇溶性及低聚糖杂质的白芍生品药渣适量，进行水提，定容至10 mL。精密吸取0.20 mL该供试液，置于具塞比色管中，按照“2.4”项下进行显色并测定。加样回收结果见表1。

2.5.6 白芍生品及其炮制品中多糖的含量测定 精密称取干燥至恒重的白芍生品及炮制品约10 g，按“2.5.1”项下制备各供试液，精密吸取白芍生品（0.30 mL）、炒白芍（0.20 mL）、酒白芍（0.20 mL）供试液各5分，置于棕色具塞比色皿中，按“2.4”项下进行显色并测定。白芍生品及炮制品中多糖含量结果见表2。

表1 白芍多糖加样回收率试验结果

表2 白芍生品及各炮制品中多糖的含量测定结果（n=5）

2.6 多糖的含量测定

2.6.1 白芍总糖供试品溶液的制备 分别精密称量“2.1”项下制备的白芍生品、炒白芍、酒白芍粉末约10 g，使用索式提取器，以石油醚（60～90℃）回流提取2次，料液比分别为10∶1，8∶1，回流时间分别为1，0.5 h，弃去提取液，除去脂溶性成分。药渣挥尽溶剂后转移至圆底烧瓶中，100℃水浴提取3次，料夜比分别为10∶1，8∶1，6∶1，提取时间分别为 1，0.5，0.5 h，合并提取液，浓缩至 200 mL，使用 0.3%H2O230 mL褪色20 min、Sevage（正丁醇∶氯仿=5∶1）试剂脱蛋白处理，滤液浓缩至100 mL。精密吸取此溶液10 mL，稀释至100 mL容量瓶中，摇匀备用。

2.6.2 精密度试验 精密吸取白芍生品多糖供试液6分，每分0.2 mL，按照“2.4”项下进行显色并测定含量。结果，平均吸光度值为0.668 3，RSD=1.07%（n=6），表明此方法精密度符合要求。

2.6.3 稳定性试验 精密吸取白芍生品多糖供试液6分，每分0.2 mL，按照“2.4”项下进行显色，每间隔30 min测定1次，连续测定5次。结果白芍生品多糖供试液平均吸光度为0.661 5，RSD分别为2.19%（n=6），表明稳定性良好，在2.5 h内测定结果可靠。

2.6.4 重复性试验 精密称取干燥至衡重的白芍生品粉末6分，每分约5 g，以石油醚（60～90℃）回流提取，除去脂溶性成分，再以蒸馏水于100℃进行提取，提取液浓缩后，利用活性炭进行退色、Sevage试剂脱蛋白处理，最后将滤液定容至100 mL。分别精密吸取0.10 mL，按“2.4”项下显色方法进行测定。结果，总糖平均含量为32.41%，RSD=3.20%（n=5），表明该方法重复性良好。

2.6.5 加样回收试验 精密称取干燥至恒重的白芍生品粉末约1.0 g，共6分，按照“2.5.1”项下进行石油醚脱脂处理。精密称取葡萄糖标准品0.080 g置于10 mL容量瓶中，配成0.008 0 g/mL的溶液。分别取该标准溶液1 mL，置于圆底烧瓶中，加入已脱脂处理的白芍生品药渣适量，进行水提，定容至10 mL。精密吸取0.20 mL该供试液，置于具塞比色管中，按照“2.4”项下进行显色并测定。加样回收结果见表3。

表3 白芍总糖加样回收率试验结果

2.6.6 白芍生品及其炮制品中总糖的含量测定 精密称取干燥至横重的白芍生品及炮制品约0.5 g，按“2.5.1”项下制备各供试液，精密吸取白芍生品（0.20 mL）、炒白芍（0.10 mL）、酒白芍（0.10 mL）总糖供试液各5分，置于棕色具塞比色皿中，按“2.4”项下进行显色并测定。白芍生品及炮制品中总糖含量结果见表4。

表4 白芍生品及各炮制品中总糖的含量测定结果（n=5）

3 讨论

本研究采用UV-VIS分光光度法，以硫酸-苯酚显色，测定亳白芍及其炮制品中多糖、总糖的含量，结果与其他文献报道［8］结果相近。表明采用UV-VIS分光光度法，以硫酸-苯酚显色适用于测定亳白芍多糖及总糖的含量测定。该方法具有显色稳定、灵敏度高、结果准确等特点。

在多糖含量测定样品处理中考察了以80%、90%、95%乙醇以及70%、90%甲醇进行回流提取以除去低聚糖、色素等杂质的单因素试验，发现以90%乙醇回流后，药渣经水提醇沉后多糖的含量最高。故本研究在除去药材中低聚糖等杂质时选用的溶媒为90%乙醇，所测多糖为粗多糖，包括可溶性淀粉等物质。

通过试验可知，亳白芍及其炮制品中多糖、总糖的含量存在明显差异。多糖的含量从高到低依次为酒白芍、白芍生品、炒白芍;总糖的含量从高到低依次为酒白芍、炒白芍、白芍生品。其含量变化可能是与药材受热或受到乙醇的作用发生分解，导致含量有所差异。植物多糖越来越受到重视，大量报道一些植物多糖具有抗菌［9］、抗氧化［10］及对细胞［11］等方面的作用，其药理作用也在不断的被证实。白芍多糖已被证实具有免疫调节作用及抗肿瘤作用，若仅仅以芍药苷的含量来评价白芍的内在质量，显然是不尽合理的。本研究以亳白芍为研究对象，以多糖及总糖含量为指标，发现其含量具有显著差异，不同炮制方法对多糖及总糖含量造成影响。通过本研究为白芍多糖及总糖的深入研究提供参考，为白芍多糖的开发及临床应用提供一些理论依据。

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Content determination of total sugar and polysaccharide in raw radix paeoniae alba and its different processed products

QIN Yadong1，ZHOU Juanjuan2，LI Fei3，ZHOU Zhou1
（1.Anhui Junior College of Traditional Chinese Medicine，Wuhu 241002，Anhui Province，China;2.Wuhu Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wuhu 241000，Anhui Province，China;3.Bozhou Institute for Food and Drug Control，Bozhou 236800，Anhui Province，China）

ObjectiveTo compare the changes of the content of polysaccharide and total sugar in raw radix paeoniae alba and its processed product by different methods.MethodsThe sulfuric acid-phenol was applied for coloration and a UV-VIS method was used under 490 nm wavelength to determine the absorbency.ResultsThe content of polysaccharide in raw radix paeoniae alba and its processed product from high to low were as follows:prepared radix paeoniae alba with wine，raw radix paeoniae alba and prepared stir-baked radix paeoniae alba;the content of total sugar from high to low were as follows:prepared radix paeoniae alba with wine，prepared stir-baked radix paeoniae alba and raw radix paeoniae alba.ConclusionThe content of polysaccharide and total sugar in raw radix paeoniae alba and its processed product were significantly different and different preparation had certain impact on the content of carbohydrates in raw radix paeoniae alba.

raw radix paeoniae alba;raw product;processed product;polysaccharide;total sugar

R284.1

A

2095－6258（2014）05－0804－04

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.016

安徽省高校省级科研项目（KJ2013B114）。

秦亚东（1979－），男，硕士，讲师。研究方向:中药及复方药效物质基础研究。

2014－05－17）