糖尿病肾病大鼠血浆差异表达蛋白的质谱分析

魏 敏，罗 仁，李璟怡，柳志伟，郑雪花

(1福建中医药大学中西医结合学院，福州 350122;2南方医科大学中医药学院;*通讯作者，E-mail:minwei99@163.com)

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病最严重的并发症之一，也是重要的死亡原因。近年来，DN已经成为导致终末期肾病(ESRD)的主要病因［1］，糖尿病肾病严重威胁人类健康。早期诊断、早期治疗对糖尿病肾病预后有重要的影响，因此寻找灵敏度特异度高的分子标志物，以达到早期诊断的目的具有重要的意义。蛋白组学技术的发展适用于寻找疾病的分子标记物研究［2，3］。本研究以糖尿病肾病(DN)大鼠模型为研究对象，应用双向电泳和质谱分析技术，初步筛选糖尿病肾病的差异表达蛋白质，为糖尿病肾病的发生机制研究提供线索。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 选用SPF级Wistar雄性大鼠16只，体重200－280 g，鼠龄为3个月左右，南方医科大学动物实验中心供应，合格证:SCXK(粤)2011－0015。

1.1.2 主要仪器设备 等电聚焦仪(Protean IEF cell)、垂直电泳仪(ProteanⅡxi cell)及其配件均为Bio-Rad公司配套仪器;图像分析软件为PD-Quest;质谱仪用德国布鲁克(Bruker Dalton)Autoflex speed MALDI－TOF/TOF质谱仪。

1.1.3 试剂 干胶条 drystrip(24 cm，pH 4－7)购自Bio-Rad公司;IPG Buffer(pH 4－7)、水化盘、覆盖油购自GE公司;尿素、二硫苏糖醇(DTT)、3－［(3－胆酰胺丙基)－二乙铵］－丙磺酸(CHAPS)、十二烷基磺酸钠(SDS)、三羧基氨基甲烷(Tris碱)、丙烯酰胺(Arc)、甲叉双丙烯酰胺(Bis)、过硫酸铵(AP)、碘代乙酰胺(IAA)均为Sigma公司产品;硫脲为Fluka公司产品;硫代硫酸钠、无水碳酸钠、甲醛、硝酸银、乙醇、冰醋酸、醋酸钠、甘氨酸均为天津大茂化学试剂厂试剂，分析纯。所有缓冲液均用Milli-Q水配制。药物STA、血浆去高丰度蛋白试剂盒(ProteoPrep Blue Albumin and IgG Depletion Kit)购自Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 动物模型的建立 大鼠适应性喂养1周后，禁食12 h，造模大鼠8只按65 mg/kg腹腔内一次性注射STZ。……