糖尿病肾病患者血浆动态蛋白质组学研究

王衍慧，傅明捷，黄玉宇，李 静

(广州市第一人民医院，广州510180)

随着人们生活水平提高、生活方式改变及社会老龄化问题日益严重，糖尿病(DM)发病率逐年上升，目前我国约有9 240万DM患者，已成为全球DM第一大国［1］。糖尿病肾病(DN)作为DM常见的微血管并发症，是终末期肾病最常见的原因［2］，也是DM的重要致死、致残原因。本研究采用动态血浆蛋白质组学的研究方法，探讨了DN与健康人群血浆差异蛋白表达，旨在为筛选DN血浆蛋白标志物提供理论和实践依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2012年10月～2013年10月住院的DN患者4例，均符合王海燕主编的《肾脏病学》(3版)中的诊断标准及1999年WHO糖尿病诊断标准［3］。男2例、女2例，年龄56～62岁。选择同期来自体检中心的健康查体人群4例作为健康对照，男2例、女2例，年龄55～63岁。纳入标准:符合诊断标准者;年龄18～80岁;血肌酐≤140 μmol/L;知情同意者。排除标准:妊娠、哺乳期妇女;血肌酐＞140 μmol/L;合并原发性心血管、肝脏、神经系统、血液系统疾病;合并严重感染等并发症者。

1.2 方法

1.2.1 血清采集及处理 清晨空腹抽取两组静脉血10 mL，速冻存于液氮中，置于-70℃保存，备双向电泳及质谱分析用。

1.2.2 双向电泳及质谱分析

1.2.2.1 组织总蛋白抽提及蛋白质测定 将血清以12 000 r/min，4℃离心30 min后，吸取上清入EP管，用50 mmol/L氢氧化钠调节pH值至8.5，取5 μL用于蛋白质浓度测定，其余上清置于-70℃保存备用。采用2D Quant Kit蛋白质定量试剂盒测定总蛋白浓度，其操作步骤严格按照试剂盒说明书进行，绘制标准曲线，计算直线回归方程。

1.2.2.2 蛋白质荧光染料标记 每组蛋白质均取25 μg等量……