牦牛O型口蹄疫免疫程序研究

李 劲 ，张朝辉 ，蔡冬冬 ，刘 进 ，廖 昆 ，彭玉婷

（1.四川省甘孜州动物疫病预防控制中心，四川 康定 626000；2.四川省动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041；3.四川省白玉县动物疫病预防控制中心，四川 白玉 627150）

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄动物感染为主的急性、热性、高度接触性传染病，被世界动物卫生组织列为一类传染病之首。四川省甘孜州自然条件恶劣、灾害频繁，加之经济落后，致使全州的动物防疫工作滞后，特别是在技术研究领域基本处于空白。长期以来，全州对牦牛口蹄疫的防控，主要参照黄牛的免疫规程进行，免疫后的效果及保护性等方面没有完整的依据。开展牦牛O型口蹄疫免疫程序研究，确定牦牛的最佳免疫次数及首免时间，对于藏区有效控制牦牛口蹄疫有着重大意义。

1 材料与方法

1.1 试验动物 来自甘孜州白玉县昌台种畜场。犊牛组：选择健康的牦牛犊30头；试验组及对照组：选择120头健康成年牦牛，分成3个试验组（A、B、C）及一个对照组（D）。所选试验牦牛在上年年底进行过口蹄疫免疫。

1.2 疫苗及检测试剂 O型亚洲I型二价灭活苗（OJMS+JSL），金宇保灵生物药品有限公司生产；O型口蹄疫抗体液相阻断ELISA（LB-ELISA）检测试剂盒，购自兰州兽医研究所，试剂批号：2013121901。

1.3 免疫方法 A组在首次免疫后2周进行二免；B组在首次免疫后4周进行二免；C组在首次免疫后6周进行二免；D组为对照组，只免疫1次。免疫剂量为每次2.5mL。

1.4 样品采集 颈静脉采血，无菌分离血清，-20℃保存。犊牛组：在出生后第15、30、45、60d采集血清进行母源抗体检测；试验组及对照组:在免疫前先采样一次，对照组在免疫后、试验组在加强免疫后的第2、4、9个月又一次采集血清进行抗体检测。

1.5 抗体检测 用液相阻断ELISA试验检测O型口蹄疫抗体,方法按照试剂盒说明书进行。按照试剂盒判断标准，当抗体效价大于或等于27（即128）时为抗体阳性，对牛有99%以上的保护。

2 结果及分析

2.1 犊牛母源抗体检测结果 用液相阻断ELISA方法对牦牛犊的O型口蹄疫母源抗体进行了检测，结果发现，15日龄时母源抗体的滴度较高,为犊牛提供了良好的保护水平；随着日龄增长，犊牛抗体滴度逐渐下降，至60日龄时抗体滴度回落至临界值附近，此时应及时进行口蹄疫疫苗免疫。试验结果说明，60日龄是牦牛较理想的口蹄疫首免日期（结果详见表1、图 1）。

表1 牦牛犊母源抗体平均效价变化（x¯±sd）

2.2 各试验组和对照组的抗体检测结果 用液相阻断ELISA方法对各试验组和对照组进行抗体检测，结果发现各组在加强免疫后2个月至9个月，抗体滴度呈现下降趋势，但是2个月至4个月各组的抗体滴度始终维持在较高水平，尤其是A组抗体滴度远高于其他组；加强免疫后9个月试验B组和D组的抗体滴度接近临界值，A组和C组的抗体滴度相近并高于临界值。试验结果表明，A组的平均抗体滴度最高，建议牦牛在首免后2周进行加强免疫（结果详见表 2、图 2）。

图1 牦牛犊母源抗体效价变化曲线

表2 各试验组和对照组平均抗体效价变化（±sd）

表2 各试验组和对照组平均抗体效价变化（±sd）

组别 免疫前加强免疫后9个月A 组 227.95±183.31 1044.00±419.50 621.00±270.63 278.26±228.65 B 组 235.83±292.89 550.00±333.75 386.05±329.77 151.88±98.99 C 组 248.17±356.67 570.79±502.90 435.35±401.61 281.69±338.68 D 组 227.23±110.95 936±443.22 594±286.69 140.93±107.13加强免疫后2个月加强免疫后4个月

图2 各试验组和对照组的抗体效价变化曲线

3 结论

3.1 牦牛犊母源抗体消长情况 本试验中牦牛犊的母源抗体在60日龄时已经下降至临界值附近，此时母源抗体对疫苗的免疫影响较小，为避免留下免疫空挡，建议牦牛犊首次的免疫时间在60日龄左右。

3.2 成年牦牛的免疫时间 生产实际中一般应在抗体滴度下降到临界值以前就进行再次免疫，以降低疫病发生风险。从本试验结果看，成年牦牛在首次免疫后2周进行加强免疫，其效果是最好的。

[1]刘颖，冉多良，王香祖.O型口蹄疫疫苗免疫家畜抗体水平的检测[J].动物医学发展，2008，29（10）:38-41.

[2]贾泽颖，刘邓，郭又春，等.奶牛O型、亚洲型、A型口蹄疫免疫抗体变化规律观察[J].中国奶牛，2013，（4）:36-38.