高谱对银杏叶黄酮内酯含量的测定及银杏叶的鉴用

阮成锋 阮成钧

（河南省信阳市潢川县人民医院中药房，河南 信阳 465150）

1 银杏叶的含量测定

1.1 仪器与试药：①高效液相色谱仪。②微量注射器。③分析天平。④水浴锅，分析漏斗蒸发器。⑤甲醇。⑥蒸馏水。⑦C18色谱柱，⑧银杏总黄酮醇苷，萜类内酯对照品。⑨银杏叶。⑩甲醇-40%磷酸、五氧化二磷、醋酸乙酸等。11微孔滤膜（0.45 mm）有机组。

1.2 总黄铜醇进行含量测定

1.2.1 利用高效液色谱条件与系统适用性进行试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）为流动组，检测波长为360 nm。理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于2500、山奈素峰与异鼠李素峰的分离度应＞1.5[1]。

对照品溶液的制备：分别精密称取五氧化二磷干燥的槲皮素，山奈素，异鼠李素对照品，各加甲醇制成每1 mL含槲皮素0.03 mg、山奈素0.03 mg、异鼠李素0.02 mg的溶液作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取银杏叶20 g，除去杂质精密称定，研细取约相当于总黄酮醇苷19.2 mg的粉末，精密称定，精密加入甲醇20 mL称定重量超声处理20 min，放冷。再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，置100 mL锥形瓶中，加甲醇10 mL，25%盐酸溶液5 mL，摇匀，置水浴中加热回流30 min，迅速冷却至室温转移至50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微子（滤膜0.45 mm）滤过，去滤液，既得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 mL注入液相色谱仪，测定。分别计算檞皮素，山奈素，和异鼠李素的含量，测定出总黄酮醇苷的含量。

1.2.2 用高效液色谱仪再对萜类内酯含量进行测定。高效液色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂以正丙醇-四氢呋喃-水（1∶15∶84）为流动相，用蒸发光散射检测器检测，理论塔板数按白果内酯峰计算应不低于2500，白果内酯峰与银杏内酯C峰的分离度应＞1.5。

对照品溶液的制备：分别精密称取白果内酯，银杏内酯A银杏内酯B和银杏内酯C对照品适量加甲醇制成每1 mL含银杏内酯A 1 mL，银杏内酯B 1 mL银杏内酯C 1 mL的混合溶液既得。

供试品溶液的制备：取银杏叶20 g，除去杂质，精密称定，研细，取相当于总黄酮醇苷的76.8 mg、萜内酯19.2 mg的粉末，精密称定。精密加入甲醇50 mL称定重量，超声处理20 min，放冷再称重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20 mL回收甲醇残渣加水10 mL，置水浴中温热使溶散加2%盐酸溶液2滴，用乙酸乙酯振摇提取4次（15、10、10、10 mL）合并提取液，用5%醋酸钠溶液20 mL洗涤，分取醋酸钠液，再用醋酸乙酯10 mL洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20 mL，合并水洗液，用醋酸乙酯10 mL洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣用丙酮溶解并转移至5 mL量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，既得。

用测定法：分别精密吸取对照品溶液10、15 μL，供试品液10 μL，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯，银杏内酯A银杏内脂B银杏内酯C的含量。既得。本品每片含萜类内酯以白果内酯（CH15H18O8），银杏内酯A（C20H24O9）银杏内酯B（C20H24O10）银杏内酯C（C20H24O11）的含量之和记。

2 银杏叶属性

2.1 银杏叶属纲：银杏叶属银杏纲Ginkgopsida植物为落叶乔木，枝条有长短枝之分。单叶，扇形，先端二裂，叶脉二叉状分枝。花雌雄异株，精子具多纤毛。种子核果状[2]。

2.2 银杏叶属科：银杏叶属银杏科Ginkgoaceae：它的形态特征是落叶乔木，营养性长枝顶生，叶螺旋状排列，稀疏，有较长的叶柄：生殖性短枝侧生，叶簇生。叶片扇形，2裂。雄球花葇荑花序状，雄蕊多数具短柄，花药2室：雌球花具长柄，柄端有两个杯状心皮，又称珠托，其上各生一直立胚珠，长一个发育。种子核果状：外种皮肉质，成熟时橙黄色：中种皮白色，骨质：内种淡红色，纸质。胚乳肉质。

3 性状鉴别

叶片多皱折或破碎，完整呈扇形，长4～8 cm，宽5～10 cm，上缘有不规则波状缺刻，有的中央凹入，基部楔形，叶脉细密，为多数二叉状平行脉；叶柄长2～7 cm。纸质，易纵向撕裂。气微，味微涩。以色黄绿、完整者为佳。分布：仅有一属一种和几个变种，产于中国及日本。

4 化学成分

银杏叶的有效成分为黄酮类：其中有3种双黄酮：①单黄酮类主要为槲皮素，山奈酚和异鼠李素及它们形成的苷类物质。②双黄酮类化合物主要有银杏双黄酮、异银杏双黄酮、去甲银杏双黄酮、穗花衫黄酮、金松双黄酮及1-5甲氧基去甲银杏双黄酮等。③茶素类主要有儿茶素、表二茶素、没食子酸儿茶素和表没食子酸儿茶素等[3]。除此之外，还有苦味质，酸性化合物，萜内酯主要有银杏内酯A、B、C、M、J和白果内酯等。

5 银杏叶的药理作用

①对心血管系统的作用：从银杏叶中提取的黄酮醇对豚鼠离体心脏灌流能引起冠状血管扩张；注射给药对豚鼠后肢血管亦有扩张作用。叶的粗提物（每毫升含总黄酮甙4.263 mg）可对抗肾上腺素所致离体兔耳的血管收缩作用，总甙的作用较弱；对麻醉兔肌肉注射临床用量的20～40倍，对血压、呼吸均无影响。②对脑血管系统的影响：叶的提取制剂口服或静脉注射，可使帕金森病患者的脑血流量增加，改善脑的营养[4]。银杏叶制剂（CBE）能增加脑血流量，对脑细胞缺血缺氧，脑水肿有保护作用。③对血小板聚集，血栓形成的影响：银杏内酯可浓度依赖性地仰制血小板活化因子（PAF）诱导的血小板聚集，但对花生四烯酸及adp诱导的血小板聚集几无影响。④对呼吸系统的影响：槲皮素具有良好的祛痰作用，能促进痰液分泌和气管纤毛运动β-谷甾醇有镇咳祛痰的作用。⑤镇痛：皮下注射银杏叶总黄酮可显著减少醋酸所致小鼠扭动次数，皮下注射和侧脑室注射银杏叶总黄酮均可显著提高小鼠热板法祛痛。

6 银杏叶的临床运用

银杏叶可广泛用于帕金森病、脑血管病、冠心病、心绞痛、高胆固醇血症等症的治疗[5-8]。

7 总 论

本实验通过银杏叶高效液色谱法，所建立的基于高效液相色谱法进行化学分析同时，测定银杏叶提取物中总黄酮醇苷和萜类内酯的含量及鉴别应用，具有快速、高效、简单、准确的特点，该方法为提高银杏叶提取物及其制剂的质量控制水平，准确全面地评价其内在品质提供了有力的技术数据。保证了疗效使临床用药更加安全有效。

参考资料

[1]梁生旺.中药制剂分析[M].北京:中国中医药出版社,2002:135.

[2]姚振生.药用植物学[M].北京:中国中医药出版社,2002:215.

[3]匡海学.中药化学[M].北京:中国中医药出版社,2002:178.

[4]侯佳玉.中药药理学[M].北京:中国中医药出版社,2002:151.

[5]李静玲,林小凤,冯鹏,等.银杏叶提取物保护心肌缺血再灌注损伤的研究进展[J].临床合理用药杂志,2013,6(25):180-181.

[6]刘馨雨,郑咏秋,刘建勋.银杏叶有效成分抗脑缺血再灌注损伤作用的机制研究进展[J].世界中医药,2013,8(10):1142-1146.

[7]吕锡亮.中药治疗帕金森病方法及其药理作用研究[J].亚太传统医药,2013,9(7):62-63.

[8]孙秀玲.银杏叶制剂的临床应用[J].中国医药指南,2014,12(35):262-263.