吗啡诱导大鼠条件性位置偏爱建立和消退研究

崔跃 李莉 郭鹏骥 崔皓哲 徐畅

吗啡诱导大鼠条件性位置偏爱建立和消退研究

崔跃 李莉 郭鹏骥 崔皓哲 徐畅

目的观察吗啡诱导的条件性位置偏爱(CPP)的建立和消退过程。方法健康雄性SD大鼠20只随机分为对照组和吗啡组,每组10只。采用恒定剂量法(10 mg/kg)连续背部皮下注射吗啡,每次吗啡CPP训练后,在伴药箱停留30 min；CPP建立后,用生理盐水替代吗啡进行CPP消退训练,观测吗啡CPP消退过程。结果皮下注射10 mg/kg吗啡6 d可以成功诱导大鼠CPP建立,与对照组相比,吗啡组在伴药箱停留时间明显增加(P＜0.05)；生理盐水替代训练可以使建立的CPP消退,训练第9天后,与对照组比较,在伴药箱停留时间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论吗啡训练6 d可以诱导大鼠CPP模型建立,生理盐水替代训练可以使建立的CPP效应消退。

条件性位置偏爱；吗啡；建立；消退

药物成瘾是一种反复发作的慢性脑疾病,有其复杂的神经生物学基础[1］。成瘾被认为是一种异常学习记忆过程,该过程涉及药物奖赏和药物相关环境、线索之间的关联性学习[2］。成瘾的主要特征是强迫性用药和复发,其中高复吸率是成瘾研究领域的难题,而消退性学习可以增加成瘾动物的戒断时间,抑制觅药能力的恢复,具有干预复吸的潜力[2,3］。本研究通过对吗啡诱导的大鼠CPP的建立和消退的观测,为阿片类成瘾的过程特点和成瘾的防治提供一定的实验依据。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 健康雄性SD大鼠20只(由沈阳医学院实验动物中心提供),平均体重(225±25)g；盐酸吗啡(青岛制药厂有限公司,中国)。

1.2 方法

1.2.1 分组 大鼠随机分为对照组和吗啡组,每组10只,分笼饲养,自由进食饮水。

1.2.2 主要仪器设备 条件性位置偏爱箱(CPP箱)∶CPP箱由两个规格相同(长53 cm,宽30 cm,高30 cm)的隔音箱组成。中间有挡板,可以抽拉。挡板底端有小门,动物可自由穿梭,测试时用。另有一套无小门挡板,实验训练用。其中一个箱子为黑色,地板为网格状,另一个箱子为白色,地板为条纹状。箱体的上方有摄像头,可以记录动物活动情况。

1.2.3 CPP实验方法

1.2.3.1 CPP模型制备分三个阶段[4,5］预测试∶建立模型之前,连续3 d,每天8:00,让大鼠自由穿梭于两个箱体15 min(900 s),第3天记录大鼠在两个箱体停留的时间,确定其天然偏好。以大鼠非天然偏好箱为伴药箱,天然偏好箱为非伴药箱。条件化训练∶用替代挡板封闭两箱通道,吗啡组动物8:00皮下注射吗啡(10 mg/kg),随即放入伴药箱30 min；16:00皮下注射等量的生理盐水,随即放非伴药箱30 min,各1次/d。对照组除将吗啡替换为生理盐水之外,其他训练相同。连续训练6 d。CPP形成测试∶第7天进行训练后测试,将有小门的挡板置于两箱之间,未做任何处理的大鼠放入箱内,让其自由活动15 min(900 s),记录其在右箱(伴药箱)停留时间。

1.2.3.2 消退阶段[6］CPP形成测试后的次日开始进行消退训练,吗啡组和对照组上下午分别在伴药箱或非伴药箱给予生理盐水训练30 min,连续训练11 d,每间隔2 d(即消退训练的第3、6、9、12天)进行CPP测试。记录大鼠在右箱(伴药箱)停留时间,观测其CPP效应的消退程度。消退完全的标准∶大鼠对伴药箱的偏爱程度降低到测试前水平。

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 吗啡诱导的CPP建立 吗啡CPP训练6 d后,与对照组相比,大鼠在伴药箱停留时间显著增加[(364.20±36.48)s VS (140.22±31.26)s］,差异具有统计学意义(P＜0.05)。显示CPP模型制备成功。见表1。

2.2 吗啡诱导的CPP消退 经过11 d CPP消退训练后,吗啡组和对照组大鼠在伴药箱停留时间测试结果分别为∶第3天(336.86±39.92)s VS (127.00±16.52)s,差异具有统计学意义(P＜0.05)；第6天(214.86±21.22)s VS (135.60±26.99)s,差异具有统计学意义 (P＜0.05)；第9天(151.30±36.71)s VS (136.90± 25.93)s,差异无统计学意义(P＞0.05)；第12天(137.90±25.49)s VS (126.20±16.44)s,差异无统计学意义(P＞0.05)。提示第9天后CPP已消退。见表1。

表1 吗啡诱导的CPP建立、消退阶段大鼠在伴药箱停留时间比较(±s,s)

表1 吗啡诱导的CPP建立、消退阶段大鼠在伴药箱停留时间比较(±s,s)

注∶与对照组比较,aP＜0.05,bP＞0.05

组别 例数 CPP建立阶段伴药箱停留时间 CPP消退训练阶段伴药箱停留时间预测试 形成测试 第3天 第6天 第9天 第12天对照组 10 133.70±21.74 140.22±31.26 127.00±16.52 135.60±26.99 136.90±25.93 126.20±16.44吗啡组 10 147.90±24.19 364.20±36.48a 336.86±39.92a 214.86±21.22a 151.30±36.71b 137.90±25.49b

3 小结

CPP实验是用于评价药物成瘾性的经典实验模型[7］。广泛用于评价药物的精神依赖情况。该实验的基本原理是经过训练后使动物建立药物奖赏效应与环境之间的联系,再通过测定动物对先前体验药物奖赏效应的环境是否产生偏爱来评价动物对药物的精神依赖程度[8,9］。

药物成瘾被认为是一种异常学习记忆过程,该过程涉及药物奖赏和环境、线索之间的关联性学习,并且伴药环境、药物本身或用药线索的暴露可以激活原有成瘾记忆,使记忆处于不稳定状态,长时的记忆激活后可诱发消退过程,而消退则能抑制觅药行为的恢复,具有干预药物复吸的潜力[2］。

本研究检测了吗啡CPP的建立和消退情况,结果显示经CPP建立阶段训练后,成瘾大鼠在伴药箱停留时间明显增加(即偏爱),表明对吗啡产生了精神依赖。消退阶段的结果显示,经过生理盐水CPP消退训练后,已经建立的CPP可以消退。实验结果揭示了吗啡诱导的CPP的建立和消退过程,如果能深入研究其内在机制,将对成瘾的形成机制和探索成瘾治疗靶点提供理论依据和治疗新思路。

[1]Merighi S,Gessi S,Varani K,et al.Morphine mediates a proinflammatory phenotype via μ-opioid receptor-PKCε-Akt-ERK1/2 signaling pathway in activated microglial cells.Biochem Pharmacol,2013,86(4):487-496.

[2]王益琦,刘惠芬.觅药行为消退的研究进展.中国药物依赖性杂志,2011,20(5):334-339.

[3]刘文涛,王维胜,何玲,等.成瘾行为消退性学习的研究进展.中国药理学通报,2011,27(6):741-745.

[4]Niwa M,Nitta A,Mizoguchi H,et al.A novel molecule "shati" is involved in methamphetamine-induced hyperlocomotion,sensitization,and conditioned place preference.J Neurosci,2007,27(28):7604-7615.

[5]邵晓霞,李洁,何繁漪,等.吗啡诱导条件位置性偏爱大鼠海马CA1区NR2A、NR2B的变化.昆明医科大学学报,2013,34(6):17-20.

[6]卢关伊,吴宁,李锦,等.不同消退方法对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱行为的影响.国际药学研究杂志,2014,41(4): 473-477.

[7]张开镐.评价药物精神依赖性的试验方法(二).中国药物依赖性杂志,2000,9(3):172-173.

[8]崔彩莲,韩济生.天然奖赏与药物奖赏.生理科学进展,2005,36(2):103-108.

[9]郭萍,钱刚,杨明理,等.延胡索和左旋延胡索乙素对大鼠吗啡条件性位置偏爱效应消退作用的比较.时珍国医国药,2012,23(4):831-833.

Research of acquisition and extinction of conditioned place preference in morphine-induced rats

CUI Yue,LI Li,GUO Peng-ji,et al.School of Basic Medicine of Shenyang Medical College,Shenyang 110034,China

ObjectiveTo observe process in acquisition and extinction of conditioned place preference (CPP) in morphine-induced rats.MethodsA total of 20 healthy male SD rats were randomly divided into control group and morphine group,with 10 rats in each group.Morphine was given through continuous back subcutaneous injection by constant dosage (10 mg/kg).Rats were put in morphine-paired chamber for 30 min after each time of morphine CPP training.After acquisition of CPP,normal saline was used,replacing morphine,for CPP extinction training.Process in morphine CPP extinction was observed.ResultsSubcutaneous injection of morphine by 10 mg/kg for 6 d could provide successfully induced acquisition of CPP in rats.Compared with the control group,the morphine group had longer remain time in morphine-paired chamber (P＜0.05).Injection of normal saline would provide CPP extinction.In 9 d of training,there was no statistically significant difference of remain time in morphine-paired chamber between the two groups (P＞0.05).ConclusionMorphine training for 6 D can induce acquisition of CPP in rats,and normal saline can provide extinction of CPP.

Conditioned place preference; Morphine; Acquisition; Extinction

2015-04-13］

∶国家自然科学基金资助(项目编号∶81441110)；辽宁省教育厅科学研究一般项目(项目编号∶L2014405)；沈阳医学院博士科研启动基金(项目编号∶20133049)

∶110034 沈阳医学院基础医学院

DOI∶10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.17.205