全自动生化分析仪检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶性能验证

高 宁，许 楠，周 挺，张 妮，何 谦

(西安交通大学第二附属医院检验科 710004)



·论 著·

全自动生化分析仪检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶性能验证

高 宁，许 楠，周 挺，张 妮，何 谦△

(西安交通大学第二附属医院检验科 710004)

目的 对奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)进行性能验证。方法 参照CLSI EP5-A2、EP6-A、C28-A2文件和相关文献要求，对奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测NAG进行精密度、功能灵敏度、线性范围、临床可报告范围和参考区间的验证试验。结果 NAG的高、低浓度标本总变异系数分别为6.05%和9.50%；功能灵敏度为0.72 U/L；线性范围为1.5～196.0 U/L；临床可报告范围为0.72～1 960.00 U/L；参考区间为0.3～12.0 U/L。结论 奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测NAG的各项分析性能与厂家的声明基本一致，可用于临床检测。

生化分析仪；精密度；功能灵敏度；线性范围；临床可报告范围；参考区间

尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)是一种溶酶体酶，相对分子质量为(130～140)×103，在肾近曲小管上皮细胞内浓度最高，是反映肾小管早期损害的一项很灵敏、特异性较强的诊断指标。《医学实验室质量和能力认可准则》ISO15189和美国临床实验室修正法规均要求临床实验室对引进或改变的检测系统做性能验证后方可应用于临床检测[1-2]。本研究按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)指南中有关检测系统性能验证文件，对奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测NAG的精密度、功能灵敏度、线性范围、临床可报告范围及参考区间进行验证，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本院健康体检者的首次晨尿，尿液留取后及时送检，2 h内检测。若2 h内不能检测必须保存于4 ℃冰箱，若6 h内不能检测置于-20 ℃保存。

1.2 仪器与试剂 采用奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测,NAG试剂(批号14-0516)、校准品(批号13-1226,14-0404)、质控品(批号13-1226,14-0404)均由北京九强生物技术股份有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 精密度验证 精密度验证根据CLSI EP5-A2文件[3]的精密度评价方案进行，两种浓度的标本每种浓度每天检测2批，2批检测时间至少间隔4 h，每批重复检测2次，每次测定至少做一个质控，共测定20 d。试验前5 d属熟悉阶段，并进行精密度可接受性预试验，后15 d是主要的试验阶段，每隔5 d要重新检查质控数据，检验所有数据的可接受性。每种浓度获得80个可接受的数据，对这些数据进行统计分析，计算批内及实验室内标准差和变异系数(CV)。如果实验室内CV小于厂家的声明，说明实验室的数据验证了厂家声明的精密度。

1.3.3 线性范围验证 根据CLSI EP6-A文件[4]，取高值(H)和低值(L)尿液各1份，按照5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L的比例配制成不同浓度的尿液6份，每份重复测定3次计算平均值。以预期值为X，实测均值为Y做线性回归分析，得到线性方程Y=aX+b。判定标准：若a在0.97～1.03范围内，r2>0.95，可判断线性范围在试验已涉及浓度；若a不在0.97～1.03范围内，b较大，舍去高值或低值组数据，另做回归统计。直至缩小的分析范围其回归方程中a和b的判断符合要求，该范围为线性范围。

1.3.4 临床可报告范围评价 把NAG质控品按照1∶2、1∶5、1∶10、1∶15、1∶20稀释，分别重复测定3次并计算均值，然后计算预期值与测量均值的比值，即回收率。以(100.0±10.0)%范围内为判定标准。

1.3.5 参考区间验证 参照CLSI C28-A2文件[5]，选择20名健康体检合格者为试验对象，留取首次晨尿进行NAG测定，如果20份标本的检测结果均在试剂说明书提供的参考区间内或仅有2个标本超标，则验证通过。否则，需要进行参考区间确立试验。

1.4 统计学处理 采用Excel 2003进行数据整理，采用SPSS19.0软件包进行统计分析。

2 结 果

2.1 NAG精密度验证 见表1。两种浓度的实验室内总CV分别为6.05%和9.50%，均小于厂家声明的10.00%。说明厂家声明的精密度可以接受。

表1 NAG的精密度验证

2.2 功能灵敏度验证 见表2。低值浓度的混合尿液经系列稀释后的浓度分别为3.60、1.44、0.72、0.48、0.36 U/L，其对应的CV分别为8.92%、11.85%、17.15%、23.44%、34.32%。选择CV小于20.00%时所对应的浓度为该检测系统的功能灵敏度，即0.72 U/L。

表2 NAG的功能灵敏度验证

2.3 线性范围验证 高、低值尿液按比例配制的预期浓度值为1.50、40.40、79.30、118.20、157.10、196.00 U/L，测量均值分别为1.37、39.67、77.73、118.53、157.07、197.60 U/L，得到的回归方程为Y=1.009 3X+1.007 6，r2=0.999 9，见图1。按照a在0.97～1.03范围内，r2>0.95的判断标准，此段浓度的线性范围符合要求，故本系统检测尿酶NAG的线性范围为1.50～196.00 U/L。

图1 预期值与测量均值的散点图

2.4 临床可报告范围评价 浓度为60.90 U/L的NAG质控品，经系列稀释后的预期浓度值分别为20.50、8.20、4.10、2.73、2.05 U/L，重复测定3次后计算均值及回收率，结果见表3。以(100.0±10.0)%范围内为判定标准，可确定NAG的最大稀释度为1∶10，结合功能灵敏度0.72 U/L，确认奥林巴斯AU2700检测系统检测NAG的可报告范围为0.72～1 960.0 U/L。

表3 NAG的最大稀释度测定

2.5 参考区间验证 20名对象的NAG检测结果为0.50～13.30 U/L，其中有2名对象的NAG测定值为12.90和13.30 U/L，超过了参考区间0.30～12.00 U/L，其余均在参考区间内，因此可判断现行的参考区间有效。

3 讨 论

精密度是检验系统重要的分析性能之一，因为临床医生和患者最关心的是检验结果的重现性，并以此作为疾病诊断和治疗的依据。CLSI EP5-A2文件“定量测量方法的精密度性能评价”指南为临床实验室对所有仪器或自建检测系统的精密度性能验证或评价提供了方案和数据分析[6]。经验证，AU2700全自动生化分析仪检测NAG的精密度与厂家的声明一致，能满足临床测试的需要。

功能灵敏度的定义为以天间重复CV为20.00%时对应检测限样品具有的平均浓度，确定检测系统或方法可定量报告分析物的最低浓度或其他量值的限值[7]。功能灵敏度是基于低浓度的基础上，用于区分检测系统从有到无的分析能力。对低值浓度的混合尿液进行系列稀释后，确定本检测系统的功能灵敏度是0.72 U/L。

厂家在试剂说明书中提供的线性范围，是在一定测量区间,可提供测量结果与标本中测量物的量值直接呈比例的能力[8]。线性范围验证是指患者标本不经任何预处理，在此范围内，报道结果显示标本中确实含有被测物。根据EP6-A文件验证NAG的线性范围为1.50～196.00 U/L，略低于厂家提供的200.00 U/L。原因可能为标本选择的浓度范围不够宽，加之临床实验室条件和厂家检测条件存在差异，导致试验得出的分析测量范围与厂家略有不同。

在临床检测中常常会遇到一些高值标本，其浓度或活性超过了仪器的分析测量范围，仪器一般会提示标本超出线性范围，这时一般按要求将标本稀释到仪器的测量范围内进行重新测定。为了保证稀释后结果的准确可靠，就需要确定检测项目的最大稀释度[9]。本研究稀释度验证试验结果表明，NAG的最大稀释度为1∶10，回收率为91.95%，符合90%～110%的可接受范围，因此可以确立临床可报告范围为0.72～1 960.00 U/L。

生物参考区间是指某项检查结果在健康人群中的分布范围，是解释检验结果分析检验信息的一个基本尺度和依据。每个新的测试项目开展前或其分析方法学改变甚至患者人群改变时，都需进行参考区间验证试验[10]。使用AU2700全自动生化分析仪检测20份来自健康个体的新鲜尿液NAG，仅有2个结果超出参考区间0.30～12.00 U/L，符合检测值在引用参考区间的参考个体数与总的参考个体数的比率r≥90%的可接受标准，因此可以使用现行的参考区间。

综上所述，通过奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测NAG的性能验证试验，证实该检测系统的精密度、功能灵敏度、线性范围等分析性能与厂家提供的声明基本一致，符合质量目标的要求，能满足临床的要求。

[1]中国合格评定国家认可委员会.ISO15189医学实验室质量和能力认可准则[S].北京:中国合格评定国家认可委员会,2008.

[2]韩平治，丁进芳，兰州.尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶连续监测法试剂盒性能评估[J].检验医学，2000,15(3):240-241.

[3]CLSI.EP5-A2 Evaluation of precision performance of quantitative methods;approved guideline[S].2nd,ed.Wayne,PA:CLSI,2004.

[4]CLSI.EP6-A Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:A statistical approach;approved guideline[S].2nd,ed.Wayne,PA:CLSI,2004.

[5]CLSI.C28-A2 How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory;approved guideline[S].2nd,ed.Wayne,PA:CLSI,2000.

[6]李婷婷,宁芬,陆雅春.日立7600全自动生化分析仪检测系统性能验证[J].安徽医学，2013,34(11):1679-1682.

[7]张亚松,谢秋燕.HITACHI7170、7600以及ROCHE Cobas C501全自动生化分析仪分析灵敏度的评价[J].国际检验医学杂志,2011,32(9):993-995.

[8]赵建忠.生化分析仪精密度、准确性以及线性范围性能验证[J].国际检验医学杂志,2011,32(10):1111-1112.

[9]陈斌鸿,罗恒,李炜煊,等.奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪检测尿素氮临床可报告范围的建立与评价[J].实验与检验医学,2011,29(2):117-120.

[10]冯洋,徐上放,鲁静.OLYMPUS AU640型全自动生化分析仪性能验证[J].实验与检验医学,2014,32(2):229-232.

Performance verification of NAG detected by automatic biochemical analyzer

GAONing,XUNan,ZHOUTing,ZHANGNi,HEQian△

(DepartmentofClinicalLaboratory,theSecondAffiliatedHospitalofXi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi710004,China)

Objective To verify the analytical performance of NAG detected by Olympus AU2700 automatic biochemical analyzer.Methods The precision,functional sensitivity,linearity,clinical reportable range,reference interval were validated,according to Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI) documents(EP5-A2,EP6-A and C28-A2).Results The total coefficients of variation of high and low NAG concentration samples were 6.05% and 9.50% respectively,functional sensitivity was 0.72 U/L,linearity was 1.5-196.0 U/L,clinical reportable range was 0.72-1 960.00 U/L,and reference interval was 0.3-12.0 U/L.Conclusion The analytical performance of NAG detected by Olympus AU2700 automatic biochemical analyzer is consistent with the statement offered by manufacturer,it is usable for clinical testing.

biochemical analyzer;precision;functional sensitivity;linear range;clinical reportable range;reference interval

高宁，女，硕士，副主任技师，主要从事生化检验与质量控制研究。△

，E-mail:qianh0511@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.23.017

A

1672-9455(2015)23-3492-02

2015-03-31

2015-06-02)