血小板型去白细胞滤器在浓缩血小板去白细胞中的应用*

胡文辉，阮丽仙，程海涛，危艳顺

（1.鄂州市中心血站，湖北鄂州 436000；2.鄂州市妇幼保健院，湖北鄂州 436000；3.鄂州二医院，湖北鄂州 436000；4.鄂州市鄂钢医院，湖北鄂州 436000）

血小板型去白细胞滤器在浓缩血小板去白细胞中的应用*

胡文辉1，阮丽仙2△，程海涛3，危艳顺4

（1.鄂州市中心血站，湖北鄂州 436000；2.鄂州市妇幼保健院，湖北鄂州 436000；3.鄂州二医院，湖北鄂州 436000；4.鄂州市鄂钢医院，湖北鄂州 436000）

目的评价血小板型去白细胞滤器在浓缩血小板中的应用效果。方法采用富血小板血浆法制备浓缩血小板，将35袋制备好的同型浓缩血小板利用血小板型去白细胞滤器过滤。记录过滤前后血小板常规指标变化情况，用流式细胞仪对血小板活化指标PAC-1及CD62p进行检测，利用生化分析仪对血小板低渗休克进行测定，利用血小板聚集仪测定血小板聚集功能。结果利用血小板型去白细胞滤器进行过滤后，白细胞去除率为（98.28±0.97）%，血小板回收率为（86.37±2.84）%；过滤后白细胞计数、血小板、红细胞均较过滤器减少（P＜0.05），过滤前后血小板容量、平均血小板体积和p H差异均无统计学意义（P＞0.05）；过滤前后血小板活化标志物PAC-1和CD62p表达、血小板低渗休克和血小板聚集功能差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论血小板型去白细胞滤器能够有效滤除浓缩血小板中的白细胞，不会改变血小板常规指标，且对血小板活化、聚集功能和抗低渗休克能力均无明显影响。

血小板； 去白细胞滤器； 白细胞； 血小板低渗休克； 血小板聚集

输注浓缩血小板已成为临床上预防出血和血小板功能障碍患者治疗的重要手段。然而，在使用过程中易发生非溶血性输血发热反应、免疫抑制、血小板输注无效等不良反应［1］。有研究指出，输注去白细胞成分血可有效降低非溶血性输血发热反应的发生，以及减少输血相关免疫、感染等相关不良反应的发生［2］。血小板型去白细胞滤器是临床上常用的一种去除白细胞的器械，能够有效滤除浓缩血小板中的白细胞［3］。本研究将血小板型去白细胞滤器应用于浓缩血小板中白细胞的滤除，通过检测滤除前后相关血液指标的变化，旨在探讨血小板型去白细胞滤器在提高浓缩血小板输注效果中的价值。

1 材料与方法

1.1 浓缩血小板的来源 选取2013年2月至2014年3月间符合要求的健康献血者，对其采集400 mL全血，于室温条件下运输和保存，并在6 h内完成制备。采用富血小板血浆法制备浓缩血小板，于（23±1）℃范围内，1 328×g离心5 min，利用分浆器将上层血浆分离。同样温度下，在2 533×g离心15 min，获取浓缩血小板55～75 mL，并静置60 min，随后进行每分钟60次的水平振荡解聚。

1.2 仪器与试剂 血小板型去白细胞滤器购自南京塞尔金生物公司，KX-21N型多项目全自动血球计数仪器购自日本希森美康公司，日立7600全自动生化分析仪购自日本日立公司，Cyrofuge 6000i大容量离心机购自德国heraeus公司，590系列血小板聚集分析仪购自美国Chrono Log公司，Nageotte白细胞计数板和加厚盖玻片购自美国BD公司，FE20型p H仪购自瑞士梅特勒-托利多公司，倒置相差显微镜购自日本Olympus公司，UV-2800AH型紫外可见分光光度计购自上海优浦科学仪器，FACSCanto流式细胞仪。CD62p-PE及其同型对照鼠IgG1、PAC-1-FITC及其同型对照鼠IgG1、CD42b-APC抗体购自美国BD公司。试剂还包括Turk白细胞稀释液和1%多聚甲醛溶液。

1.3 方法

1.3.1 浓缩血小板的过滤 将35袋制备好的同型浓缩血小板利用无菌接管机汇集成5袋治疗量标本后，连接血小板型去白细胞滤器，利用重力作用对血小板进行过滤，并进行收集。记录过滤时间及血小板容量，利用全自动血球计数仪器对过滤前后的标本进行血细胞计数，用Nageotte白细胞计数板对滤后白细胞进行计数。

1.3.2 流式细胞仪对血小板活化指标PAC-1及CD62p的检测 利用贫血小板血浆将浓缩血小板制成250×109的富血小板血浆，每份标本取3支流式细胞管，加入血浆标本10μL，分别将相应的抗体和对照加入不同流式细胞管，轻轻晃动摇匀，于避光室温下孵育20 min，预冷后，加入1%多聚甲醛并混匀，避光4℃条件下保存。于60 min内完成样品准备并置于FACSCanto流式细胞仪上检测。利用CD42b APC/SSC双参数设门，用Cell Quest软件获取20 000个血小板进行分析，血小板PAC-1及CD62p水平以其血小板阳性百分率表示。

1.3.3 利用生化分析仪对血小板低渗休克进行测定 实验模式为实时吸光度（A）值监测，测定温度为37℃，波长为610 nm，样品与试剂比例为2∶1，监测时间15 min，延迟时间5 s。以贫血小板血浆与磷酸盐缓冲液（PBS）按2∶1的比例混合后调零，富血小板血浆与PBS混合样品15 min时的A值为对照A值（A对照），富血小板血浆与蒸馏水混合样品15 min时的A值为样品A值（A样品），并按下列公式计算：血小板低渗休克（%）=（A样品-样品最小A值）/（A对照-样品最小A值）× 100%。

1.3.4 利用血小板聚集仪测定血小板聚集功能 利用贫血小板血浆将血小板聚集仪调零点，将500μL富血小板血浆置于测试杯中，放入一涂硅的小磁棒，37℃保温5 min，加入10μL终浓度为20μmol/L的二磷酸腺苷，反应7～10 min至曲线平稳，以富血小板血浆的聚集率和透光度为0，贫血小板血浆所测得的聚集率和透光度为100%，分析血小板最大聚集率情况。

1.4 统计学分析 数据录入和管理采用EpiData3.0软件，利用SPSS21.0统计分析软件进行统计学处理，计量资料采用±s表示，过滤前后相关指标比较采用配对t检验，P＜0.05差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 过滤前后血小板常规指标的比较 利用血小板型去白细胞滤器进行过滤后，白细胞去除率为（98.28±0.97）%，血小板回收率为（86.37±2.84）%，血小板过滤前后常规指标变化见表1。过滤后白细胞计数、血小板、红细胞均较过滤前减少，差异均有统计学意义（P＜0.05），过滤前后血小板容量、平均血小板体积和p H值比较差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 过滤前后血小板常规指标变化情况比较（±s）

组别 白细胞（×106/L） 血小板（×109/L） 血小板容量（m L） 红细胞（×1012/L） 平均血小板体积（f L） p H 279.4±78.8 263.1±43.4 246.8±29.5 0.006±0.002 12.29±0.90 7.13±0.16过滤后 4.4±1.1 231.9±35.5 239.7±30.1 0.003±0.001 12.06±0.71 7.09±0.12 t 14.071 2.203 0.898 5.580 0.084 1.010 P过滤前0.000 0.017 0.187 0.000 0.467 0.159

2.2 过滤前后血小板活化标志物PAC-1和CD62p表达变化 利用流式细胞仪对血小板活化指标PAC-1及CD62p进行检测，见图1（见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”）。过滤前后血小板活化标志物PAC-1和CD62p表达水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 过滤前后血小板活化标志物PAC-1和CD62p表达变化情况（%，±s）

组别 PAC-1 CD62p 4.3±1.9 3.5±1.6过滤后 4.5±2.1 3.7±1.8 t 0.847 1.642 P过滤前0.201 0.054

2.3 血小板过滤前后低渗休克及聚集功能变化情况 过滤前后，血小板低渗休克和血小板聚集功能比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 血小板过滤前后低渗休克及聚集功能变化情况（%，±s）

77.3±9.1 60.2±14.8过滤后 72.6±7.8 59.3±13.5 t 0.808 0.251 P组别 血小板低渗休克 血小板聚集功能过滤前0.212 0.402

3 讨 论

健康者的血容量相对恒定，如果一次失血超过全血量的15%时，机体的代偿机制将不足以维持血压的正常水平，可引起机体活动障碍，此时就需要输血。通过大量研究证实，输注浓缩血小板可用于治疗因血小板减少或功能障碍导致的出血性疾病，浓缩血小板已在国外广泛应用［4-5］。亦有研究指出，输入含有白细胞成分血小板时，会引起非溶血性发热反应、血小板输注无效、输血相关性免疫抑制等一系列不良反应［6-7］。其中，非溶血性输血发热是最为常见的输血反应，主要是由含白细胞的血小板或全血输注后与受血者体内的血细胞发生同种免疫产生抗体所致［8］。临床资料显示，一个治疗量的全血中白细胞含量小于0.5×109/L时，可有效预防非溶血性发热反应的发生，并且去除白细胞能够有效降低患者的炎性并发症的发生［9］。本研究利用血小板型去白细胞滤器对浓缩血小板中的白细胞进行滤除，并对滤除前后的相关指标进行了检测，获得了理想效果。

本研究将白细胞滤器应用于浓缩血小板中，其中，白细胞滤器滤除率的高低是衡量白细胞过滤器质量的重要指标，本次研究结果显示，血小板型去白细胞滤器可有效滤除白细胞，同时可获得较高的血小板回收率。过滤后白细胞计数、血小板、红细胞均减少，过滤前后血小板容量、平均血小板体积和p H差异均无统计学意义（P＞0.05），说明白细胞滤器可有效滤除浓缩血小板中白细胞，对其他血液常规指标影响较小，可以达到国家标准要求。去白细胞滤器临床疗效的另外一个重要指标是临床中非溶血性输血反应发生率的降低程度，而白细胞的滤除则可有效降低非溶血性输血反应的发生［10］。本研究显示，过滤前后血小板活化标志物PAC-1和CD62p表达差异均无统计学意义（P＞0.05），过滤前后，血小板低渗休克和血小板聚集功能差异均无统计学意义（P＞0.05），说明使用白细胞滤器在滤除白细胞的同时，不会对血小板活化功能，以及抗低渗性休克能力和血小板聚集功能产生影响，与Cho等［11］研究结论相同。

综上所述，血小板型去白细胞滤器能够有效滤除浓缩血小板中的白细胞，滤后血小板的回收率符合相关标准，不会改变血小板常规指标，而且去白细胞滤器过滤浓缩血小板对血小板活化、聚集功能和抗低渗休克能力均无明显影响，具有较高的安全性。

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Application of leukoreduction filter in removal of leukocytes in platelet concentrate*

Hu Wenhui1，Ruan Lixian2△，Cheng Haitao3，Wei Yanshun4

（1.Blood Center of Ezhou City，Ezhou，Hubei 436000，China；2.Women and Children's Hospital of Ezhou City，Ezhou，Hubei 436000，China；3.Ezhou Second Hospital，Ezhou，Hubei 436000，China；4.Ezhou Manicipal Iron and Steel Co.Hospital，Ezhou，Hubei 436000，China）

ObjectiveTo investigate the application of leukoreduction filter in removal of leukocytes in platelet concentrate.MethodsPlatelet concentrate was prepared by using platelet-rich plasma method.35 bags of the same type of prepared platelet concentrate were filtered by using leukoreduction filter.The changes of conventional indicators of platelet before and after filter were measured and recorded.The activating platelets indicators PAC-1 and CD62p were detected by using flow cytometry.The platelet hypotonic shock was measured by biochemical analyzer.The platelet aggregation was measured by using platelet aggregation instrument.ResultsAfter platelet concentrate was filtered by using leukoreduction filter，leukocyte removal rate was（98.28± 0.97）%，platelet recovery rate was（86.37±2.84）%.After filtration，white blood cell count，platelets，red blood cells were reduced than before filtration（P＜0.05）.The differences of capacity of platelets，mean platelet volume and p H before and after filtration were not statistically significant（P＞0.05）.Before and after filtration，the expression of platelet activation markers PAC-1 and CD62p，platelet aggregation and platelet hypotonic shock were not statistically different（P＞0.05）.ConclusionPlatelet leukoreduction filter could effectively filter leukocytes in platelet concentrate.It would not change the conventional indicators，and not affect platelet activation，aggregation and anti-hypotonic shock capacity significantly.

platelet； leukoreduction filter； leukocytes； platelet hypotonic shock； platelet aggregation

10.3969/j.issn.1673-4130.2015.17.023

A

1673-4130（2015）17-2509-03

2015-01-08）

2013年鄂州市高新技术产业化项目（2013EC05）。 作者简介：胡文辉，男，副主任技师，主要从事采供血管理、血液病的诊断与治疗及相关研究。△

，E-mail：844514883@qq.com。