同型半胱氨酸试剂携带污染对腺苷脱胺酶检测的干扰及对策

牛新海，高小焕，殷菁华，束 炜，张 欢

（江苏省镇江市丹徒区人民医院检验科，江苏镇江212028）

全自动生化分析仪中同型半胱氨酸与腺苷脱胺酶组合测 定时，如果分析顺序先同型半胱氨酸后腺苷脱胺酶，由于同型半胱氨酸试剂2中含有腺苷脱胺酶酶，会污染全自动生化分析仪的试剂探针。试剂探针清洗不彻底时，污染的腺苷脱胺酶试剂会使腺苷脱胺酶试剂在使用后余下的试剂处于缓慢的酶促反应过程，缓慢降解腺苷脱胺酶试剂，进而影响腺苷脱胺酶试剂稳定，影响腺苷脱胺酶的检验测定结果。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 贝克曼AU680全自动生化分析仪。同型半胱氨酸检测试剂为上海长征公司产品；腺苷脱胺酶试剂为宁波美康公司产品。同型半胱氨酸检测试剂为酶循环法双试剂；腺苷脱胺酶检测使用的是酶比色法双试剂。同型半胱氨酸检测试剂成分包括试剂1：Tris缓冲液，试剂2：Tris缓冲液，腺苷同型半胱氨酸水解酶、腺苷同型半胱氨酸转甲基酶、腺苷脱胺酶。腺苷脱胺酶检验需要检验的成分是腺苷脱胺酶，与同型半胱氨酸试剂成分相同，理论上存在试剂交叉污染的可能。

1.2 方法 携带污染试验证明同型半胱氨酸会对腺苷脱胺酶检测结果产生影响。命名水平R1 新试剂为A，R2 新试剂为B，并做质控（水平结果为27.6和27，靶值27.7）样本，试剂正常使用。（1）证明同型半胱氨酸对腺苷脱胺酶水平检测的影响将在第2天和第3天产生明显影响。试验前期准备：足量A1、B1试剂，已知浓度的大量混合血清S［已分装重复检测，同型半胱氨 酸 检 测 结 果 为（15.50±0.19）μmol／L，水 平 结 果 为（15.60±0.21）μmol／L（检测6次所得均值）］。试验操作方案1：检测同型半胱氨酸＋水平次数至10次，记录结果数据，将试剂A1、B1留存试剂仓中，于第2天、第3天用相同的分装混合血清测定腺苷脱胺酶。（2）证明采取纠偏措施有效试验。操作方案2：在进行相同的对照检验前，设置仪器相关参数，①在添加水平的R2试剂之前，不论什么项目，都用清水清洗试剂针2次，以消除试剂针携带造成的交叉污染；②将水平试剂位置和检测顺序与同型半胱氨酸隔离开来（试剂位相隔9个位置，检测项目间隔4个项目，替换上新的A2、B2试剂。

2 结 果

对照组第1天测定腺苷脱胺酶均值为（15.61±0.23）U／L，先测同型半胱氨酸后测腺苷脱胺酶，测定腺苷脱胺酶的水平为（17.8±0.31）U／L，以上述试剂进行10次测定腺苷脱胺酶；第2天测定腺苷脱胺酶水平为（106.9±2.8）U／L。第3天测定：测定出其中的腺苷脱胺酶测定水平为（1 033.0±3.7）U／L。将单独测定腺苷脱胺酶的对照结果与按照以上组合顺序测定的结果做配对t检验，差异有统计学意义（P＜0.01）。

采取纠偏措施后，更换新试剂，对照组第1天测定腺苷脱胺酶水平为（15.6±0.22）U／L；先测同型半胱氨酸后测腺苷脱胺酶的分析顺序测定腺苷脱胺酶水平均为（15.6±0.21）U／L，以上述同型半胱氨酸试剂作为样品进行20次测定，第2天测定腺苷脱胺酶水平为（15.6±0.23）U／L。第3天测定：测定出其中的腺苷脱胺酶测定水平均值为（15.5±0.23）U／L。将单独测定腺苷脱胺酶的对照结果与按照以上组合顺序测定的结果做配对t检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨 论

先同型半胱氨酸后腺苷脱胺酶的分析顺序测定腺苷脱胺酶。试剂针清洗不干净易造成试剂间的交叉污染，证明同型半胱氨酸和水平同时检测时会对水平试剂产生污染，且影响随着时间增大。生化分析仪检测顺序必须避免先测定同型半胱氨酸后再测定腺苷脱胺酶；在添加水平的R2试剂之前，不论什么项目，都用清水清洗试剂针2次，以消除试剂针携带造成的交叉污染。据试剂配方显示，同型半胱氨酸试剂中含有大量的腺苷脱胺酶成分。腺苷脱胺酶需要检验的成分是腺苷脱胺酶，理论上同型半胱氨酸与腺苷脱胺酶存在试剂交叉污染的可能。

同型半胱氨酸试剂污染腺苷脱胺酶试剂2，相当于在腺苷脱胺酶试剂中加入了腺苷脱胺酶，以致产生酶促反应过程，缓慢降解腺苷脱胺酶试剂，进而影响腺苷脱胺酶试剂稳定，导致水平的检验测定结果明显偏高的错误。错开设置同型半胱氨酸、腺苷脱胺酶检验顺序，只能相对避免试剂污染，由于每天工作量的关系，如果试剂针清洗不彻底，仍有同型半胱氨酸中腺苷脱胺酶酶分子污染水平试剂的可能。如果仪器分析顺序先测同型半胱氨酸后测腺苷脱胺酶，那么试剂针清洗不干净易造成试剂间的交叉污染。正如上面的实验显示，同型半胱氨酸试剂会使腺苷脱胺酶的检测结果显著升高，污染后腺苷脱胺酶试剂在第2天测定正常样本腺苷脱胺酶水平会出现错误结果高达106.9U／L，第3天进行测定正常血清腺苷脱胺酶水平会出现错误结果高达1 033U／L。

AU680全自动生化分析仪的工作方式是先测试一个标本的所有试验项目，再测试下一个标本。一个标本在所有项目未完成之前，样品针只吸注同一个标本，而试剂针在不同试剂之间吸注；另外试剂针比样品针吸注量大几十倍，冲洗后残留污染也就更多，所以样品针不容易污染，而试剂针最容易受到污染。

设置同型半胱氨酸与腺苷脱胺酶检验顺序时，中间间隔5～6个其他项目，在添加水平的试剂之前，不论什么项目，都用清水清洗试剂针2次。通过比对检验，发现该特殊清洗可有效避免同型半胱氨酸与水平试剂之间的直接接触。

仪器维护：按照AU680操作SOP要求，按时、定期进行仪器维护保养坚持日保养、周保养、月保养；定期对仪器进行校准；全自动生化分析仪标本和试剂用量较少，有少量残存即会影响测试结果，每天应用无水乙醇擦洗加样针及搅拌棒，保证比色杯清洗后不留残液，避免比色杯的交叉污染［1］。

通过同型半胱氨酸试剂携带污染对腺苷脱胺酶检测实验，科室组织品管圈进行相关学习讨论，分别提出双缩脲试剂对血清铜测定的携带污染［2］，葡萄糖试剂携带污染影响尿酸检测［3］，以及其他临床检验中发现的一些试剂交叉污染现象。

全自动生化分析仪的自净率都是有限的［4］，检测试剂排序不当就会出现不可逆转的结果误差［5］，容易给临床造成无效数据，影响临床诊疗。通过实验验证，遇可能发生试剂交叉污染的项目时，重点要设置项目检验顺序和试剂针的清洗。

［1］郭旭.初探全自动生化分析仪交叉污染的原因及解决对策［J］.医疗装备，2011，24（5）：83.

［2］汪宇婴，冯春颜.双缩脲试剂对血清铜测定的携带污染探讨［J］.中国误诊学杂志，2009，9（9）：2084－2085.

［3］张艳超.试剂交叉污染对尿酸测定结果的影响［J］.河南大学学报：医学版，2009，28（4）：300－301.

［4］郭杰，蔡忠，张连祥，等.全自动生化分析仪的精密度和交叉污染率评价［J］.检验医学，2004，19（2）：140－142.

［5］韩来新，张团结，刘玉霞，等.总胆固醇试剂对总胆汁酸测定有携带污染［J］.现代检验医学杂志，2004，19（1）：51－51