急性肾损伤患者外周血亲环素A、血管紧张素Ⅱ水平变化及血液透析对二者的影响

孟瑚，周晓萍，徐剑，罗惠民，袁红伶，熊丽焱(云南省第一人民医院，昆明650032)

急性肾损伤患者外周血亲环素A、血管紧张素Ⅱ水平变化及血液透析对二者的影响

孟瑚，周晓萍，徐剑，罗惠民，袁红伶，熊丽焱
(云南省第一人民医院，昆明650032)

摘要:目的观察急性肾损伤(AKI)患者外周血亲环素A(CyPA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平的变化，并探讨血液透析对二者的影响。方法选择AKI患者40例(观察组)，随机分为透析组23例和未透析组17例;患者均予厄贝沙坦150 mg/d治疗4周，治疗前及治疗4周后分别抽取外周血测定CyPA、AngⅡ水平。另选取本院性别、年龄与观察组相匹配的体检正常者40例为对照组，比较观察组与对照组以及透析组与未透析组外周血CyPA、AngⅡ水平，并分析CyPA与AngⅡ水平变化的关系。结果治疗前观察组外周血CyPA、AngⅡ水平高于对照组(P均＜0.01)，观察组治疗后与治疗前比较CyPA、AngⅡ水平降低(P均＜0.01)。AKI患者外周血CyPA与AngⅡ水平变化呈正相关(r=0.600，P＜0.05)。透析组与未透析组比较，CyPA、AngⅡ水平差异无统计学意义(P均＞0.05)。结论CyPA作为一种炎症细胞介质，可能协同AngⅡ加重AKI患者肾小管上皮细胞损伤及细胞凋亡。血液透析对AKI患者外周血CyPA与AngⅡ水平无影响。

关键词:急性肾损伤;外周血亲环素A;血管紧张素Ⅱ

急性肾损伤是临床常见的危重急症之一，患者肾内血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平明显升高，肾小球滤过率下降［1］。亲环素A(CyPA)是一种具有多种生物学功能的蛋白，肾脏中特别是邻近肾小管上皮细胞部位相对水平较高［2］。体外研究表明，AngⅡ可以促进CyPA的分泌，CyPA可增加IL-6、IL-1、TNF-α等炎症因子的分泌，这些因子可使内皮受损，导致白细胞黏附炎症反应加重肾组织损伤［3］。但在急性肾损伤患者中CyPA与AngⅡ的关联性尚无研究证实。本研究检测正常人、急性肾损伤患者外周血中CyPA及AngⅡ水平，并探讨血液透析对二者的影响。

1　资料与方法

1.1临床资料选择2011年10月～2014年4月本院收治急性肾损伤患者40例(观察组)，男29例、女11例，年龄(48.15±17.58)岁，静脉血BUN (26.38±9.80) mmol/L、Cr(671.55±86.52)μmol/L; 40例患者中，行透析治疗23例和未行透析治疗17例。排除标准:存在呼吸道、消化道、泌尿生殖系感染者，有活动性免疫系统疾病、恶性肿瘤、心功能不全未控制者，3个月内使用过免疫抑制剂者，高钾血症、双侧肾动脉狭窄有厄贝沙坦使用禁忌者。另选取本院体检中心查体正常者40例(对照组)，男23例、女17例，年龄(44.00±13.96)岁，静脉血BUN(4.34±1.94) mmol/L、Cr(76.10±16.42) μmol/L。对照组与观察组比较，性别、年龄差异无统计学意义。

1.2外周血CyPA、AngⅡ水平检测观察组入院后即抽取外周血测定CyPA、AngⅡ水平;住院期间均口服厄贝沙坦150 mg/d治疗4周，然后再次抽取外周血测定CyPA、AngⅡ水平。对照组健康体检时抽取外周血测定CyPA、AngⅡ水平。①CyPA水平检测:采用酶联免疫吸附法将CyPA抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中CyPA与连接于固相载体上的抗体结合。然后加入生物素化的CyPA抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入显色底物TMB。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下最终转化成黄色，颜色的深浅和样品中的CyPA水平呈正相关。用酶标仪于450 nm波长处测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。以标准品的浓度为纵坐标，OD值为横坐标，绘出标准曲线，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。②AngⅡ水平检测:采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。用抗人AngⅡ抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的AngⅡ与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人AngⅡR2-Ab抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人AngⅡ抗体与结合在包被抗体上的人AngⅡ结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入TMB，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪于450 nm波长处测OD值，AngⅡ浓度与OD值呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中AngⅡ的浓度。

1.3统计学方法采用SPSS20.0统计软件。计量资料用珋x±s表示，组间比较及观察组治疗前后比较采用t检验; CyPA与AngⅡ水平变化的关系采用Pearson相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组AngⅡ、CyPA水平比较观察组治疗前与对照组比较，CyPA、AngⅡ水平有统计学差异(P均＜0.01) ;观察组治疗前后比较，CyPA、AngⅡ水平有统计学差异(P均＜0.01)。见表1。

表1　两组AngⅡ、CyPA水平比较(pg/mL，±s)

注:与对照组比较，*P＜0.01;与本组治疗前比较，△P＜0.01。

组别　n　AngⅡCyPA观察组40治疗前　244.14±30.27*　292.64±36.37*治疗后　126.78±26.83△　87.65±42.21△对照组40　60.56±20.47　104.57±21.89

2.2CyPA与AngⅡ水平相关分析Pearson相关分析显示，AKI患者外周血CyPA与AngⅡ水平变化呈正相关(r=0.600，P＜0.05)。

2.3血液透析对急性肾损伤患者外周血CyPA、AngⅡ水平的影响急性肾损伤接受透析和未行透析患者治疗前后CyPA、AngⅡ水平比较，无统计学差异(P均＞0.05)。见表2。

表2　透析与未透析患者外周血CyPA、AngⅡ水平比较(pg/mL，±s)

Ang ⅡCyPA组别　n治疗前　治疗后透析组　23　235.97±33.63 130.43±29.94 285.72±34.85 8治疗前　治疗后3.98±35.51未透析组　17　255.19±21.28 121.84±21.84 302.01±37.30 92.62±50.64

3　讨论

近年来研究认为，在急性肾损伤时肾脏内皮细胞和近端肾小管上皮细胞都产生细胞因子和炎症趋化因子，导致炎症细胞(包括中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、NK细胞等)进入肾间质，并分泌前炎症因子(如TNF-α、IL-2、IL-6、IL-8和MCP-1等化学趋化因子)参与炎症的发生，这些前炎症因子的产生启动了炎症级联反应，加重了肾损伤［3］。

本研究表明，急性肾损伤患者外周血AngⅡ水平较正常对照组明显升高，这与以往的研究结果一致。本研究发现，急性肾损伤患者CyPA水平较正常人也有显著升高，提示CyPA可能作为炎症介质，介导化学趋化因子分泌增加，促进了炎性细胞进入肾间质，造成肾损伤。其可能的作用机制是: AngⅡ激活细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)氧化酶，产生活性氧自由基(ROS) ; ROS激活Rho GTP酶，导致CyPA分泌增加［3］。CyPA刺激单核-巨噬细胞的化学因子表达，诱导炎症细胞分泌IL-1、IL-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1和TNF-α导致肾损伤。CyPA通过激活MMPs调节胶原蛋白水解活性，促进炎症细胞迁移［4，5］。此外，CyPA还可与AngⅡ协同作用促进ROS的产生，促进AngⅡ诱发血管平滑肌细胞增殖［6］。除炎症外，肾小管上皮细胞凋亡也是急性肾损伤的重要病理生理机制之一。有研究报道，CyPA的释放是细胞坏死的标志，有可能参与细胞的凋亡［7］。

本研究中，使用厄贝沙坦治疗后，AngⅡ及CyPA水平明显下降。其可能的机制是:血管紧张素转换酶抑制剂具有抗氧化特性，可抑制NADPH氧化酶活性［8］，从而抑制CyPA分泌。此外通过阻断AT1受体抑制肾小球系膜细胞收缩，减少ROS［9］，减少白细胞增殖，抑制黏附因子上调［10］，从而起到抗炎作用。

急性肾损伤血液透析和未行血液透析患者相比，不管是治疗前和治疗后CyPA与AngⅡ水平无统计学差异，提示CyPA和AngⅡ水平未受血液透析影响。文献报道，连续性血液滤过治疗能降低MODS患者的炎症介质水平;但也有研究证实吸附是连续性血液滤过清除炎症介质的主要方式［11］，常规的血液透析难以有效清除体内的炎性因子。本研究中患者均采用普通血液透析，清除溶质的方式为弥散和对流，故推测这是血液透析对CyPA、AngⅡ水平无影响的原因之一。

通过本研究我们得出以下结论:外周血CyPA水平与急性肾损伤显著相关，CyPA可能是一种新的急性肾损伤的标志物; CyPA与AngⅡ可能协同促进了急发肾损伤患者的炎症反应，加重了肾小管及间质损伤;选择性地阻断AngⅡ及CyPA受体可能是急性肾损伤新的治疗途径。但本研究例数较少，以上结论尚需大样本长期观察研究加以证实。

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Changes in levels of CyPA and AngII in peripheral blood of patients with acute kidney injury and influence of hemodialysis on them

MENG Hu，ZHOU Xiao-pin，XU Jian，LUO Hui-ming，YUAN Hong-ling，XIONG Li-yan (The First People＇s Hospital of Yunnan Province，Kunming 650032，China)

Abstract:Objective To observe the changes in levels of cyclophilin A (CyPA) and AngiotensinⅡ(AngⅡ) in the peripheral blood of patients with acute kidney injury (AKI) and to investigate the influence of hemodialysis on them.Methods Forty patients with AKI (observation group) were randomly divided into the dialysis group (23 cases) and nondialysis group (17 cases).All patients received the treatment of irbesartan 150 mg/d for 4 weeks.The peripheral blood was obtained before and after treatment for 4 weeks to determine the levels of CyPA and AngⅡ.Another 40 gender-and age-matched healthy people were selected as the control group.We observed the levels of CyPA and AngⅡin the peripheral blood of the observation group and control group，dialysis group and non-dialysis group，and analyzed the relationships between changes in levels of CyPA and AngⅡ.Results Before treatment，the levels of CyPA and AngⅡin the peripheral blood of the observation group were higher than those of the control group (all P＜0.01).In the observation group，the levels of CyPA and AngⅡwere decreased after treatment as compared with those before treatment (all P＜0.01).In the peripheral blood of AKI patients，the levels of CyPA and AngⅡwere positively correlated (r=0.600，P＜0.05).No significant differences were found in the levels of CyPA and AngⅡbetween dialysis group and non-dialysis group.Conclusion

CyPA，as a kind of an inflammatory mediator，may，aggravate the renal tubular epithelial cell injury and apoptosis，and hemodialysis has no effect on CyPA and AngⅡin the peripheral blood of AKI-patients.

Key words:acute kidney injury; cyclophilin A; AngiotensinⅡ

(收稿日期:2015-01-01)

通信作者简介:周晓萍(1968-)，女，主任医师，硕士，主要从事各种原发及继发性肾脏疾病的临床及病理研究。E-mail: amilyzhou@ hotmail.com

作者简介:第一孟瑚(1975-)，女，主治医师，硕士，主要从事肾脏疾病的临床研究。E-mail: menghu1975@126.com

基金项目:云南省科技厅应用基础研究基金资助项目(2011FZ275)。

文章编号:1002-266X(2015)21-0010-03

文献标志码:A

中图分类号:R692

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.21.004