复方红景天对2型糖尿病肾病大鼠尿微量白蛋白、血晚期氧化蛋白产物水平的影响

李玲华，袁少静，刘杰，王敏，骆岚，隋晨辉，朱济英(山东大学第二附属医院，济南500;山东中医药大学第二附属医院;蒙阴县中医院)

复方红景天对2型糖尿病肾病大鼠尿微量白蛋白、血晚期氧化蛋白产物水平的影响

李玲华1，袁少静2，刘杰3，王敏2，骆岚2，隋晨辉2，朱济英2
(1山东大学第二附属医院，济南250031;2山东中医药大学第二附属医院;3蒙阴县中医院)

摘要:目的观察复方红景天喂食2型糖尿病肾病大鼠尿微量白蛋白(mALB)和血晚期氧化蛋白产物(AOPPs)的变化，并探究其保护肾脏的作用机制。方法将SPF级8周龄雄性Wistar大鼠50只随机分为正常对照组5只和模型组45只。将成功制作的43只糖尿病肾病模型再随机分为模型对照组10只、小剂量红景天组11只、中剂量红景天组11只、大剂量红景天组11只。小、中、大剂量红景天组分别给予复方红景天3、6、12 g/(kg·d )，模型对照组给予等体积生理盐水，连续灌胃4周。治疗前后尾静脉取血检测FBG、FINS、HOMR-IR、TG、TC、AOPPs 及12 h尿mALB水平，并观察大鼠体质量(BW)的变化。结果治疗前，糖尿病肾病模型大鼠BW低于正常对照组，FPG、FINS、HOMR-IR、TG、TC、mALB、AOPPs水平均高于正常对照组(P＜0.05或＜0.01)。治疗4周后，小、中、大剂量红景天组BW均高于模型对照组，FPG、AOPPs、mALB水平低于模型对照组(P均＜0.01)，小、中、大剂量红景天组BW、AOPPs、mALB水平比较差异无统计学意义(P均＞0.05)。结论复方红景天可能通过降低T2DN大鼠尿mALB、血AOPPs水平，从而发挥肾脏保护作用。

关键词:糖尿病肾病;复方红景天;尿微量白蛋白;晚期氧化蛋白产物;大鼠

糖尿病肾病是糖尿病最常见、最主要的慢性并发症之一，也是导致终末期肾衰竭的主要原因之一。研究显示，我国糖尿病患者中2型糖尿病肾病患病率达34.7%［1］，病程10年以上的糖尿病患者有50%并发肾病，新增终末期肾病患者中糖尿病肾病所占的比例逐年升高［2］。2011年7月～2014年7月，我们应用中药复方红景天治疗糖尿病肾病大鼠，观察其对大鼠尿微量白蛋白(mALB)、血晚期氧化蛋白产物(AOPPs)水平的影响，并探讨其发挥肾脏保护作用的机制。

1　材料与方法

1.1材料SPF级8周龄雄性Wistar大鼠50只，体质量200～220 g，购自山东大学实验动物中心。链脲佐菌素(STZ)为美国Sigma公司生产; AOPPs 的ELISA试剂盒为美国Invitrogen生命技术公司产品，购自北京奇松生物科技有限公司;日立7600系列全自动生化分析仪。复方红景天组方主要为红景天、黄芪，购自山东省中医院药剂科，将药品制成散剂，水溶成为复方红景天药液。高糖高脂饮食由普通鼠饲料加蔗糖、炼猪油和蛋黄按比例加工制成，其比例为猪油18%、蔗糖20%、蛋黄3%、基础饲料59%。

1.2建立动物模型将50只大鼠随机分为正常对照组5只、模型组45只。正常对照组给予基础饲料喂养，模型组给予高糖高脂饮食喂养。8周后，禁食12 h，模型组空腹状态下给予STZ 30 mg/kg左侧腹腔快速注射，正常对照组注射等体积枸橼酸钠缓冲溶液。1周后，尾静脉取血检测空腹血糖(FPG)及空腹胰岛素(FINS)，计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR) (HOMA-IR=FPG×FINS/22.5) ;模型组FBG≥7.0 mmol/L，且HOMA-IR高于对照组为糖尿病造模成功。糖尿病造模成功后，继续饲养4周，检测尿mALB ≥30 mg/L即为糖尿病肾病模型。模型组45只大鼠中，43只糖尿病肾病造模成功。

1.3治疗方法将糖尿病肾病模型大鼠43只随机分为模型对照组10只、小剂量红景天组11只、中剂量红景天组11只、大剂量红景天组11只。小、中、大剂量红景天组分别给予复方红景天3、6、12 g/(kg ·d )灌胃，均为复方红景天散剂量;模型对照组给予等体积生理盐水灌胃，各组均治疗4周。

1.4尿mALB、血AOPPs及相关指标检测复方红景天治疗前各组大鼠禁食12 h，测体质量(BW)，尾静脉取血测定FPG及FINS、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和AOPPs，留取12 h尿液测定尿mALB。复方红景天治疗4周后，各组大鼠禁食12 h，再次测BW，尾静脉取血测FPG、FINS、TG、TC、AOPPs，收集12 h尿液测mALB。

1.5统计学方法采用SPSS18.0统计软件。计量资料用珋x±s表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1复方红景天治疗前正常对照组与糖尿病肾病模型组各指标比较糖尿病肾病模型大鼠BW低于正常对照组，FPG、FINS、HOMR-IR、TG、TC、mALB、AOPPs水平均高于正常对照组(P＜0.05或＜0.01)。见表1。

表1　治疗前正常对照组与糖尿病肾病模型组各指标比较(±s)

注:与正常对照组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

组别　n　BW(g)　FPG(mmol/L) FINS(mU/L)　HOMR-IR　TG (mmol/L) TC(mmol/L) mALB(mg/L) AOPPs(pmol/L)正常对照组　5　420.1±20.2　4.5±1.8　21.35±5.32　3.58±1.02　0.93±0.42　1.42±0.51　7.1±5.9　37.7±27.8模型组　43　320.6±33.7*　25.9±3.3＊＊28.70±6.29＊＊12.16±2.34＊＊3.16±1.29＊＊2.59±1.01＊＊101.9±17.8＊＊952.7±69.9＊＊

2.2复方红景天治疗后各组BW、FPG、尿mALB及血AOPPs水平比较复方红景天治疗4周后，糖尿病肾病模型大鼠最终存活35只(模型对照组9只、小剂量红景天组9只、中剂量红景天组9只、大剂量红景天组8只)。小、中、大剂量红景天组BW均高于模型对照组，FPG、AOPPs、mALB水平低于模型对照组(P均＜0.01)，小、中、大剂量红景天组BW、AOPPs、mALB水平比较差异无统计学意义(P均＞0.05)。见表2。

3　讨论

表2　复方红景天治疗4周后各组BW、FPG、尿mALB及血AOPPs水平比较(±s)

注:与模型对照组比较，*P＜0.01。

组别　n　BW(g)　FPG(mmol/L)　mALB(mg/L)　AOPPs(pmol/L)对照组460.3±55.5　4.5±1.8　7.1±5.9　37.7±27.8模型对照组　9　320.6±33.7　25.9±3.3　101.9±17.8　952.7±69.9小剂量红景天组　9　475.5±79.5*　18.1±7.0*　33.2±12.4*　60.5±12.2*中剂量红景天组　9　476.6±47.0*　19.5±7.4*　29.9±12.8*　73.4±15.0*大剂量红景天组　8　441.4±43.0*　20.0±2.8*　40.9±11.7*　46.9±13.5 5 *

糖尿病肾病缘于消渴，属“消渴病”范畴，根据其临床表现的不同，可类属于古代中医的“虚劳”“水肿”“消渴”“癃闭”“关格”等。糖尿病肾病多与先天禀赋不足、素体阴虚，加之后天失养、饮食失节、劳欲过度、情志失调等因素有关。本病多在阴津亏虚、燥火热盛的基础上逐步发展而成，其病位主要在肾脏，涉及心、肝、脾、肺等脏腑，病机多为阴虚血热、脾肾亏虚、瘀血阻滞。西医认为糖尿病肾病是以肾小球动脉硬化为主要病变的疾病，早期表现为尿mALB增加［3］。尿mALB是糖尿病肾病早期诊疗的敏感指标［4，5］，是目前临床应用比较广泛的筛查糖尿病肾病的指标。有研究认为，氧化应激与糖尿病微血管病变有关［6］，糖尿病肾病患者体内自由基清除系统明显受损，机体产生大量氧自由基。AOPPs具有很强的促氧化及促炎症作用，是蛋白质被氧化的特异性标志之一。

红景天为景天科红景天属植物，性甘、苦、平，有益气活血、通脉平喘的功效，可用于气虚血瘀、胸痹心痛、中风偏瘫和倦怠气喘等。有研究认为，红景天可降低实验性糖尿病大鼠的血糖，并具有剂量依赖性;同时红景天提取液可明显抑制大鼠肾小球基底膜增厚，对实验性糖尿病大鼠肾脏结构病变具有保护作用［7］。赵文等［8］研究认为，蔷薇红景天对糖尿病模型小鼠的胰腺具有保护作用。另有研究显示，圣地红景天可明显降低大鼠尿蛋白排泄率及肾小球高滤过，延缓肾衰竭，对肾脏足细胞有保护作用［9］。

本研究应用SLZ制作糖尿病肾病大鼠造模，使糖尿病肾病大鼠胰岛细胞受损，其血液中FPG、FINS、TG、TC、AOPPs及尿mALB水平升高，BW明显下降。给予复方红景天治疗后，大鼠胰岛功能得到不同程度的恢复，与模型对照组比较，复方红景天治疗组血液中FPG、FINS、TG、TC、AOPPs及尿mALB水平均降低，BW升高。提示复方红景天可降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白，具有抗氧化及改善胰岛细胞功能的作用［10，11］，佐证了复方红景天对糖尿病肾病具有很好的临床疗效。本研究中小、中、大剂量红景天组BW、血AOPPs、尿mALB水平尽管存在差异，但差异无统计学意义，此可能与样本量较小及测量误差有关。因此，未来有必要加大样本量进一步研究不同剂量复方红景天对糖尿病肾病大鼠血AOPPs、尿mALB水平的影响。

综上所述，复方红景可降低糖尿病肾病大鼠血AOPPs、尿mALB水平，从而发挥肾脏保护作用。此为中医药治疗糖尿病肾病提供了新的理论和实践依据。

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［9］李彩萍，张艳，黄骁燕.圣地红景天对糖尿病大鼠尿微白蛋白排泄率及肾脏TGF-β1表达的影响［J］.中国中西医结合肾病杂志，2008，9(10) : 871-874.

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Effects of compound rhodiola sachalinensis on microalbuminuria and advanced oxidation protein products of rats with type 2 diabetic nephropathy

LI Ling-huan1，YUAN Shao-jing，LIU Jie，WANG Min，LUO Lan，SUI Chen-hui，ZHU Ji-ying
(1 The Second Affiliated Hospital of Shandong University，Jinan 250031，China)

Abstract:ObjectiveTo observe the changes of microalbuminuria (mALB) and advanced oxidation protein products (AOPPs ) of rats with type 2 diabetic nephropathy (T2DN) by feeding compound rhodiola sachalinensis (Fufang Hongjintian) and to investigate its mechanism of protecting the kidney.Methods Fifty male 8-week-old Wistar rats were randomly divided into the normal control group (A group，n=5) and model group (n=45).During the 45 rats，43 rat models with DN were successfully made.Then，they were randomly divided into the model control group (group B，n=10)，low dose compound rhodiola sachalinensis group (group C)，medium-dose compound rhodiola sachalinensis group (group D，n=11)，and high-dose compound rhodiola sachalinensis group (group E，n=11).Rats in the groups C，D and E were treated by 3，6 and 12 g/(kg·d) compound rhodiola sachalinensis and rats in the group B was treated by intragastric administration of the same amount of normal saline for 4 weeks.The FBG，FINS，HOMR-IR，TG，TC，AOPPs and 12-hour mALB level in the caudal vein of rats were detected before and after treatment and the body weight (BW) was also observed.Results Before treatment，the BW of group B was significantly lower than that of group A，but FPG，FINS，HOMR-IR，TG，TC，mALB and AOPPs level was higher than that of group A (P＜0.05 or P＜0.01).After treatment of 4 weeks，the BW of groups C，D and E was higher than that of group B，but FPG，AOPPs and mALB was lower than that of the group B (all P＜0.01).No statistical difference was found in FPG，AOPPs and mALB among groups C，D and E (all P＞0.05).Conclusion Compound rhodiola sachalinensis (Fufang Hongjingtian) has the protective effect on kidney of T2DN rats by reducing the levels of mALB and AOPPs.

Key words:diabetic nephropathy; compound rhodiola sachalinensis (Fufang Hongjingtian) ; urinary microalbumin; advanced oxidation protein products; rats

(收稿日期:2014-02-12)

基金项目:山东省中医药科技发展计划项目(2011-109)。

文章编号:1002-266X(2015)21-0023-03

文献标志码:A

中图分类号:R587.1; R-322

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.21.008