HPLC法同时测定柴银口服液中5种成分的含量

朱日然

(山东中医药大学附属医院，山东 济南 250011)

柴银口服液由北柴胡、金银花、黄芩、葛根、荆芥、青蒿、连翘、桔梗、苦杏仁、薄荷、鱼腥草等11味药组成，具有清热解毒，利咽止咳的功效，主要用于上呼吸道感染外感风热证，是风热感冒常用药品之一。本文建立了采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定柴银口服液中绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷5种有效成分的含量，控制制剂质量及工艺的稳定性［1～4］。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪;Mettler Toledo MS电子天平;Zorbaxsb－C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm);Millipore超纯水仪。

1.2 试药 绿原酸(批号:110753－200413)，苦杏仁苷(批号:110820－200403)，葛根素(批号:110752－200511)，黄芩苷 (批号:110715－200514)，连翘苷(批号:110821－200508)均来源于中国食品药品检定研究院;甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。柴银口服液(市售，批号:00512127、10103011、11063018)。

1.3 溶液的制备

1.3.1 标准溶液的制备 分别精密称取绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷对照品，加甲醇制成每1mL 分别含 0.388、0.736、0.210、0.424、0.868mg的混合溶液，作为对照品溶液。

1.3.2 供试品溶液的制备 精密量取样品溶液10mL，置50mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

1.3.3 阴性对照溶液的制备 分别按处方比例称取金银花、苦杏仁、葛根、黄芩、连翘，按工艺方法制备阴性样品，按“1.3.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2 方法与结果［5～7］

2.1 色谱条件 Zorbaxsb－C18色谱柱 (4.6mm×250mm，5μm);流动相 A为乙腈，流动相 B为0.1%磷酸溶液，流动相梯度洗脱程序见表1;流速:1mL·min－1;检测波长:210 nm;柱温:35℃;进样量 10μL。

表1 梯度洗脱条件

2.2 专属性考察 在“2.1”项下色谱条件，取对照品、样品及阴性样品适量进行检测，样品与对照品色谱图相同保留时间处有色谱峰，而阴性样品无相应峰，说明阴性无干扰，结果见图1。

图1 HPLC色谱图

2.3 线性关系考察 分别精密吸取上述对照品溶液 1、5、10、15、20、25μL，注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行测定，以各对照品进样量(μg)为X轴，峰面积值为Y轴计算回归方程、相关系数和线性范围，结果见表2。

表2 线性范围及相关系数

2.4 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL，按上述色谱条件连续进样6次，记录各色谱图的峰面积，结果绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷峰面积 RSD(n=6)分别为 1.31%、1.51%、1.73%、0.72%、1.16%，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、4、8、12、16、24 h 按“2.1”项下色谱条件进行测定，以峰面积计算绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷RSD(n=6)分别为0.46%、0.51%、1.17%、0.41%、1.61%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.6 重复性试验 取批号为10103011的样品，按“1.3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件测定，进行6次平行试验，结果绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷的平均含量分别为0.150、0.233、0.2532、1.858、0.0772mg·mL－1，RSD(n=6)分别为 1.72%、0.89%、0.83%、1.34%、1.22%，表明该方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验 取已测定的样品 (批号:10103011)6份，每份2.5mL，分别置50mL容量瓶中，每份精密加入混合对照品溶液1mL，按“1.3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率，结果平均回收率分别为绿原酸96.80%(RSD=0.29%)、苦杏仁苷103.50%(RSD=1.29%)、葛根素 103.60%(RSD=1.12%)、黄芩苷 102.90%(RSD=0.88%)、连翘苷 100.90%(RSD=0.90%)，表明该方法加样回收率良好。

2.8 样品测定 取3批样品，每批2份，按“1.3.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果见表3。

3 讨论

3.1 流动相的选择 分别对乙腈－水、乙腈－0.5%冰醋酸溶液、乙腈－0.1%磷酸溶液进行考察，发现乙腈－0.1%磷酸溶液的洗脱体系能够对5种有效成分呈现出良好的分离度，在测定波长处无干扰［8～11］。

表3 样品测定结果

3.2 波长选择 取上述5种对照品溶液，在200～400 nm范围内进行扫描，结果绿原酸在218 nm波长处有最大吸收，苦杏仁苷在207 nm波长处有最大吸收，葛根素在250 nm波长处有最大吸收，黄芩苷在214 nm波长处有最大吸收，连翘苷在229 nm波长处有最大吸收，结果显示绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷等5个成分在210 nm波长处均有较好的紫外吸收，故本试验选择此波长进行测定。

3.3 对柴银口服液的质量考察，一般均为单味药材质量考察，本研究建立的HPLC方法同时测定金银花、苦杏仁、葛根、黄芩、连翘等5味药材的有效成分，样品处理简单，方法准确、可行，能有效对该制剂质量进行控制［12～15］。

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