ELISA法检测HIV抗体弱阳性外部对照血清的制备及评估

曹红亚 李姣

ELISA法检测HIV抗体弱阳性外部对照血清的制备及评估

曹红亚 李姣

目的 研究酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体弱阳性外部对照血清的制备方法及效果。方法 选取20例HIV患者, 另选取20例健康人员, 抽取所有受检者血液,分别制成HIV阳性混合血浆与HIV阴性混合血浆。使用HIV阴性血浆稀释HIV阳性的血浆, 并使用荷兰生物梅里埃试剂进行检验, 检验次数为12次。同时对比不同稀释度的 HIV 抗体弱阳性外部质控血浆的配制及 OD 值和HIV 弱阳性外部质控血浆12次的检测结果进行对比分析。结果 结合数据的对比分析后发现, 经过1年使用后的自制弱阳性的外部质控血浆较好, 因为其具有良好的稳定性, 其变异系数(CV)＜20%。结论 在实验室自制弱阳性的外部质控血浆, 这样更适合, 且操作简单方便, 还易于保存。ELISA法检测HIV抗体弱阳性外部对照血清的制备较好, 值得临床推广和应用。

酶联免疫吸附试验；人类免疫缺陷病毒抗体；对照血清；制备；评估

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2012年1月～2013年5月就医的20例HIV患者为研究对象。女8例, 男12例, 年龄23～68岁,平均年龄(37.5±9.5)岁。

1.2 方法 在实验前, 准备相应的血浆、试剂和仪器。需要准备的血浆有两种, 分别为HIV阳性的混合血浆, 另一种为HIV阴性混合血浆；需要准备的试剂为在保质期内的荷兰生物梅里埃抗体酶联免疫诊断试剂盒；需要准备的仪器有洗板机和酶标仪。

1.2.1 自制弱阳性外部对照血清 抽取20例健康人员的血液.20例健康人员的肝功能为正常、HCV为阴性, 并将HIV阴性血各2 ml混合, 同时进行灭菌。灭菌的时间为30 min,温度需达到56℃, 并离心15 min.3000 r/min, 然后收集上层清液进行备用。而后, 将20例HIV阳性血(100 μl/例)混合,同时进行灭菌。灭菌的时间为30 min, 温度需达到56℃, 并离心15 min.3000 r/min, 然后收集上层清液进行备用。最后,使用HIV阴性混合血与HIV阳性混合血进行稀释, 并使用荷兰生物梅里埃抗体酶联免疫诊断试剂进行检测, 检测次数为12次, 并观察OD、S/CO以及CUTOFF的值［1,2］。

1.2.2 质控图 反复实验稀释度为1∶1200的弱阳性外部对照血清, 在其稳定后将36 ml的阴性混合血浆与30 μl的HIV阳性混合血浆进行均匀的混合, 做成稀释度为1∶1200的弱阳性外部对照血清, 并进行保存。保存器皿使用尖底离心管, 每管保存剂量为70 μl, 保存温度为-20℃。最后, 由不同的操作人员在不同的时间进行检测, 并记录其CUTOFF值［3-6］。

1.3 观察指标 观察稀释度、OD、CUTOFF、A值、S/CO值以及CO值等。

2 结果

2.1 观察指标数值 稀释度、OD、CUTOFF等见表1, 表2。

表1 不同稀释度的 HIV 抗体弱阳性外部质控血浆的配制及OD值

表2 HIV弱阳性外部质控血浆12次的检测结果

2.2 稳定性 对于已经保存在-20℃内1年的外部对照血清使用一样厂家, 但是不同批次的荷兰生物梅里埃抗体酶联免疫诊断试剂, 进行常规检验3～4次/月.1年共44次, CV为11.01%, 但是CV值仅有少于20%的在规定范围内。

3 讨论

在实验室内自制HIV抗体弱阳性的外部对照血清的好处是不仅成本低, 而且还能够降低由于运输、环境以及仪器等问题带来的误差［7-9］。从HIV弱阳性外部质控血浆12次的检测结果可知, 均值为2.96, 标准差为0.42。从上述研究表明, 自制的HIV抗体弱阳性的外部对照血清在1年后的CV＜20%, 能够长期使用。其优势是重复性好、稳定性强。在进行实验过程中, 试剂盒的临界值应是A值的2～3倍。在实验过程中, 若是有一些微小的变化对于其结果没有过大的影响, 例如抗体的滴度过高就没有监控的作用；如果滴度过低,就会造成不易保存的现象［10］。对于已经保存在-20℃内1年的外部对照血清使用一样厂家, 但是不同批次的荷兰生物梅里埃抗体酶联免疫诊断试剂进行检验结果为稳定。实验室可以选择一些国家较为认可的试剂进行长期的实验, 这样就可以减少经常配置质控品的问题［11］。在实验室中, 必不可少的就是质控品的配置, 因此质控图也是必须制作的。实施质量控制, 是为了保障检验的准确性［12］。

综上所述, 在实验室中配置适合本实验室的弱阳性的外部对照血清的方式较为可行, 这样的方法不仅简单方便, 而且能够降低成本。同时, 其在HIV的质量评价和质量控制中也应用良多。

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10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.36.023

2015-06-24］

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