生物安全柜的应用技术

叶二妹

(池州职业技术学院 生物技术系，安徽 池州 247000)

生物安全柜的应用技术

叶二妹

(池州职业技术学院 生物技术系，安徽 池州 247000)

生物安全柜是处理危险性微生物时所用的箱形负压空气净化安全设备，是为避免暴露操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物对人、样品和环境造成危害而设计的生物安全防护装置。但拥有生物安全柜不等于就拥有了“安全”，只有掌控和拿捏好它的应用技术，具备驾驭它的能力，才能有效地发挥其生物安全性能，减少生物危害因子的逃逸，最大限度地保障操作人员、实验对象和实验环境的安全。

生物安全柜；安全性能；应用技术；生物安全

1 生物安全柜的安全选购

生物安全柜有效工作的前提是选购相关技术性能符合行业标准且能满足实验室防护级别需要的安全柜。2002年，卫生部颁布了《WS 233-2002微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》[4]，规范了各级微生物和生物医学实验室的生物安全防护，明确指出不同安全防护级别的实验室要安装相应级别的生物安全柜。使用者在选购之前，应根据实验室开展研究工作的性质，在进行实验室病原微生物、放射性核素和挥发性有毒化学试剂的危害评估基础上，选择适当的安全柜，最大限度地减少危害因子给人、环境和样品带来的危害。

1.1 生物安全柜的分类和应用

根据结构设计、入口气流网速、排气方式、循环方式以及保护对象和程度的不同，生物安全柜通常可分为三个级别，即I级、II级(A1、A2、B1和B2)和III级，可以满足不同的生物研究和实验要求[5]。

1)I级BSC。适合操作中等以下的传染性材料，可保护工作人员和环境而不保护样品。因不能对实验样品和新产品进行保护，目前已很少使用。

3)III级BSC。它是为生物安全防护等级为四级的实验室而设计的，柜体完全气密，工作人员通过连接在柜体的手套进行操作，试验品通过双门的传递箱进出安全柜，以确保不受污染，适用于高风险的生物实验。

1.2 生物安全水平

1)BSL -1。适用非常熟悉的病原，不会经常引发健康成人发病，对实验人员和环境潜在危险小或不会产生气溶胶的微生物试验品或产品，可在开放的实验台面开展工作，一般不使用生物安全柜。

2)BSL-2。适用对人和环境有中度潜在危险的病原。对于一些可能涉及或产生有害物质的操作过程都应该在安全柜内进行，最好使用二级的安全柜。二级生物安全水平的试验品或产品可以通过液体传播，所以操作人员对于污染的锐器要特别注意，在选购安全柜时，注意确保没有突出的锐角，可选用Ⅰ、Ⅱ级生物安全柜。

3)BSL-3。应用于临床、诊断、教学和研究等有关内源性和外源性病原。在该级别中所有与传染源操作有关的步骤都应在安全柜内进行，最好选用Ⅱ级或Ⅱ级以上生物安全柜。

4)BSL-4。应用于可通过气溶胶而致实验室感染或未知传染风险，且对生命有高度危险的有关病原或外源性病原，应选用Ⅲ级生物安全柜。操作新型不明微生物时，必须在四级生物安全防护实验室中进行，待有充分证据后再决定此种微生物或毒素应在哪一级别的实验室中处理。

总之，应根据使用单位所从事工作的性质和防护要求进行综合考虑，选购恰当级别和型号的生物安全柜。各种安全柜所能提供的保护和应用如表1所示[7]。

表1 各种生物安全柜的防护水平和应用

2 生物安全柜的安全安装

生物安全柜在安装和验证时应该按照有关标准执行，必须由具有资质的专业人员来进行。用户在安装前应主动与制造商或服务单位进行有效沟通，要求安排有资质的专业人员，配备必要的专用仪器，科学合理地安装、验证生物安全柜。由于进入安全柜低速率的定向气流极易受到干扰，因此，安装室内的送、排风必须满足物理防护参数要求。生物安全柜应尽量安放在远离门口、风口和窗户，远离人员、物品流动以及可能会扰乱气流的地方，远离其他可能干扰的仪器，避免破坏安全柜的气流而影响其物理防护功能；应尽量安放在有利于形成气流由“清洁”区域流向“污染”区域的单向气流流型的地方。安全柜后方与两个侧面应各留出30 cm的空隙，便于清洁和维护；在安全柜的上面应留有30～35 cm的空间，以便准确测量排风过滤器的气流和更换过滤器。安装后，应按照YY-0569《生物安全柜》[8]的要求对其运行性能以及完整性进行检测认证，出具具有法律效力的检测报告，以确认相关参数在正常的范围之内，符合国家的性能标准，方能投入使用。

3 生物安全柜的安全使用

选购了安全柜不等于买了安全保险。生物安全柜如果使用不当，其防护作用将会大大受到影响，绝不能单纯地利用它替代管理制度和操作规范。很多安全事故是疏于管理或实验人员违反操作规程或操作不当所致。在安全柜投入使用后，作为使用单位的管理层，必须建立科学的管理制度和操作规程，并严格执行，加强监督；作为操作者，必须具备良好的操作技术规范和良好的行为习惯，科学规范地使用之。

3.1 安全培训

所有的操作者必须经过正规严格的培训，熟练掌握各种感染物质和其他危险物质的操作准则和技术要点，具备规范化、标准化地使用安全柜的能力，通过考核，成绩合格才能上岗。

3.2 安全评估

在开展相关工作之前应对相关操作进行危险评估，根据评估的结果，制定全面细致的操作规程，对于关键的、危险的步骤设计出可行的防护措施并对这些细节了然于胸。

3.3 安全检查

为确保安全柜应用的有效性、安全性和可靠性，安全柜应采用单独供电，以免发生意外导致安全柜失效；每次使用前要检查其使用状态，对重点部位和薄弱环节进行重点排查，以便及时发现和消除安全隐患。

3.4 安全操作

1) 操作者应做好个人防护工作，在生物安全1～2级实验室中工作的人员应穿外套式工作服；在3～4级实验室工作的人员应穿手术衣式工作服，手术衣的手套应能包住腕关节，必要时应戴面罩和眼罩。

2) 操作前应将本次操作的全部物品移入安全柜，避免双臂频繁穿过气幕破坏气流；柜内物品摆放应做到清洁区、半污染区与污染区基本分开，方便操作过程中取用物品，且三区之间无交叉，物品应尽量靠后放置，但不得挡住气道口，以免干扰气流正常流动。柜内不放与本次实验无关的物品。

3) 打开风机5～10 min，待柜内空气净化、气流稳定后方可操作。将双臂缓缓伸入柜内，静止一会儿，待柜内气流稳定后按照从清洁区到污染区的顺序轻柔、舒缓地操作，避免影响气流和交叉污染。操作时不可打开玻璃视窗，面部应处在工作窗口之上，尽量减少背后人员走动和快速开关房门，严禁使用明火，以免干扰柜内气流稳定，且明火也容易损坏HEPA滤器。

4) 操作时为防液滴溅出，可在台面铺上用消毒剂浸泡过的毛巾或纱布，但不能覆盖住安全柜格栅。处理溢出物时，不可将头伸入安全柜内，面部不可直接对着前操作口，而应处于前视面板的后方。如果溢出量少，可直接用消毒剂浸湿纸巾擦拭；如溢出量大或容器破碎时，要求广泛消毒，则先将柜内的所有物品表面进行消毒，再移出安全柜按操作规程消毒，选择消毒剂时需考虑其对安全柜的腐蚀性，使用消毒液的作用时间应维持在20～30 min。如果溢出物流入安全柜内部，则需要对其进行熏蒸。

5) 当出现报警或系统失效时应停止使用，查明原因确保安全后再使用。当安全柜或实验室出现持续正压时，室内人员应立即停止操作并戴上防护面具，采取措施恢复负压。如不能及时恢复和保持负压，应停止实验，及早按规程退出，并采取相应处理措施和通知相关人员。

3.5 清洁和消毒

4 生物安全柜的安全检测和维护

2004年国家颁布的《GB 19489-2004实验室生物安全通用要求》指出，生物安全柜对保护实验室工作人员是必不可少的，安装或更换后要进行现场生物和物理的检测，并且每年进行验证。鉴于它危险的使用环境，使用单位在安装、移动、检修以及更换过滤器以后必须由专业技术人员按照规定对其整体性能进行认证，检测至少包括柜体防泄漏、高效过滤器完整性、下降气流流速、流入气流流速、气流模式，人员、产品与交叉污染保护[9]。可选择生产厂家或专业维护公司提供定期或不定期的维保，每台安全柜应每年至少进行一次测试和认证，确保安全使用。

5 结束语

近年来，随着生物技术的不断发展和生物安全柜的广泛应用，其使用的安全性和可靠性已引起社会各界的关注和重视。市场上的生物安全柜种类繁多，质量参差不齐，互有优势和局限。作为使用者需了解各种生物安全柜的安全性能，选购设计合理、质量合格的安全柜，并对其进行科学规范的安装、检测、使用和维护。生物安全柜对提高实验室生物安全及社会公共卫生安全有着十分重要的意义。

[1]陆永绥.临床检验管理与技术规程[M].杭州：浙江大学出版社，2004：3-31.

[2]李金松.生物安全柜应用指南[M].北京：化学工业出版社，2004：11.

[3]车凤翔，李劲松，王秋娣，等.实验室生物安全通用要求(GB 19489-2004)[S].北京：中国标准出版社，2004.

[4]中华人民共和国卫生部.微生物和生物医学实验室生物安全通用准则(WS 233-2002)[S].北京：中国标准出版社，2002.

[5]蒋健敏，陈民利.实用医学实验动物学[M].杭州：浙江人民出版社，2009：148.

[6]World Health Organization.Laboratory biosafety manua1[M].3rd. Geneva：World Health Organization，2004.

[7]中华人民共和国农业部.兽医实验室生物安全管理规范[S].北京：中国标准出版社，2003.

[8]国家食品药品监督管理局.YY 0569-2005生物安全柜[S].北京：中国标准出版社，2005.

[9]温占波，赵建军.生物安全柜的使用选择和生物防护性能检测及评价[J].医疗卫生装备，2008，29(4)：14-16.

Scientific Application of Biological Safety Cabinets

YE Ermei

(Department of Biotechnology, Chizhou Vocational and Technical College, Chizhou 247000, China)

Biological safety cabinet is used in the handling of hazardous microorganisms box-safety negative pressure air-purifying equipment, which is to avoid exposure to infectious aerosols that may arise during the operation and splashing out on people, samples and environmental hazards and biological safety protection device design. But it does have the biological safety cabinet does not mean you have a “safe”, so we have to control and handle its application, with the ability to wield it, in order to effectively perform their biological security, reduce biological hazards factors escapes maximum guarantee the safety of operators, experiments and experimental environment.

biological safety cabinet; security; technology; bio-safety

2014-05-06；修改日期: 2014-12-17

安徽省教育厅2013年教学质量工程基金资助项目(2013sjjd045)。

叶二妹(1968-)，女，学士，实验师，主要从事畜牧兽医实验教学与研究工作。

R446；Q-337

B

10.3969/j.issn.1672-4550.2015.02.066