血液学初筛表型阴性的孕妇地中海贫血基因检测结果分析

李爱敏，唐曙明，陈海霞，刘彩艳

(深圳市人民医院，广东 深圳518020)

地中海贫血(thalassemia，简称地贫)是一种临床常见的遗传性溶血性疾病，是由于调控珠蛋白合成的基因缺失或突变引起α链和β链合成数量不平衡而造成的[1]。在我国南方地区发病广泛。广东省人群中α及β地贫总的基因携带率高达11.07%，其中α地贫的基因携带率为8.53%，β地贫的基因携带率为2.54%[2]。血液学表型分析法是国内外地贫筛查和诊断指南推荐的方法，国际地贫筛查标准为MCH<27pg和MCV<78fl，其缺陷是存在部分轻型β地贫，静止型α地贫的漏检[3，4]。国内对于MCV、MCH筛查阳性的地贫基因型分布报道很多，对于MCV、MCH筛查阴性的地贫基因携带者基因型分布报道不多。本研究为提高地贫筛查的灵敏度，取MCV82fl或MCH27pg作为截断点，通过对2013年1月至2015年4月在我院产检的地贫基因携带者的基因检测结果进行回顾性分析，探讨MCV、MCH筛查阴性时主要漏检的地贫基因类型，为优化地贫诊断流程提供参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2013年1月至2015年4月在深圳市人民医院龙华分院产检自愿进行α、β地贫基因检测的孕妇2681名，年龄19～45岁。参照2012年我国卫生部行业标准(WS/T405-2012)《血细胞分析参考区间》提供的MCV和MCH参考区间值[5]，选取 MCV<82fl、MCH<27pg作为截断值,则 MCV≥82fl、MCH≥27pg为地贫初筛表型阴性。

1.2 仪器与试剂 hema9600 PCR扩增仪 (珠海黑马公司)，Combi-H12 分子杂交仪(韩国)，LH 780 全自动血细胞分析(美国贝克曼公司)；α-地中海贫血基因诊断试剂盒(gap-PCR法)检测α-地贫基因3种缺失(--SEA、-α3.7、-α4.2)和 β 地中海贫基因检测试剂盒(膜反向杂交法)，检测17种位点突变CD41-42(-TTCT)，CD17(A →T)，CD43(G→T)，CD71-72(+A)，IVS-2-654(C→T)，-28(A→G)，-29(A→G)，CD26(G→A),CAP+40-+43(-AAAC),CD14-15(+G),CD27/28(+C),-32(C→A),-30(T→C),CD31(-C),Int(ATG→AGG),IVS-I-1(G→T)和 IVS-I-5(G→C)),均为深圳益生堂生物企业有限公司产品。

1.3 检测方法 采集患者静脉血2～3ml，EDTA-K2抗凝。当天用全自动血液分析仪检测红细胞参数；剩余标本于2～8℃冰箱保存集中进行基因检测，用全血基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，经PCR扩增后进行3种缺失型α-地贫基因和17种β地贫基因突变检测。具体步骤严格按试剂说明书操作。

2 结果

2681例孕妇中，地贫初筛阳性的孕妇894例，地贫初筛阴性的孕妇1787例。共检出地贫基因携带者366例，其中检出α-地贫235例，β地贫115例，α合并β复合型地贫16例。在1787例地贫初筛表型阴性的孕妇中，检出地贫基因携带者52例，占总检出地贫的14.21%(52/366)，其中αα/-α3.746 例、-α4.2/αα3例、β 地贫 (均为 CAP 杂合子)2例、α复合β地贫(基因型-α3.7/CD26)1例，分别占检出的88.46%、5.77%、3.85%、1.92%。见表1。

表1 地贫初筛表型阴性地贫基因携带情况

3 讨论

地中海贫血临床上分布最广和最严重的主要是α链珠蛋白地贫及β链珠蛋白地贫。正常人含有4个正常α珠蛋白基因(αα/αα)及2个正常的β珠蛋白基因(β/β)。根据α地贫基因缺失的数量，临床上分为 α 地中海贫血静止型(－α/αα)、标准型(－－/αα)、HbH 病(－－/－α)及 Bart胎儿水肿(－－/－－)。 β 地贫分为单杂合子地贫(β0/＋/β)及双重杂合子或纯合子地贫(β0/＋/β0/＋)及 αβ 复合型地贫[6]。

本研究数据显示，在初筛阴性 (MCV≥82fl、MCH≥27pg)的孕妇人群中，主要检出的是αα/-α3.7和 -α4.2/αα，提示在 MCV≥82fl、MCH≥27pg 的孕妇中，仍有可能是静止型α地贫基因的携带者。α珠蛋白基因缺陷的数目是引起α-地贫不同血液学表型的直接原因。--SEA/αα是两个α基因异常，故MCH、MCV改变较为明显，因此该基因出现在MCV≥82fl、MCH≥27pg的人群中的报道较为罕见。一般来说，α2基因的转录活性略高于α1基因,-α4.2/αα 是 α2 基因完全缺失，αα/-α3.7是 α2基因部分缺失，因此-α4.2/αα的血液学指标改变程度比 αα/-α3.7略为明显[7]，导致在 MCV≥82fl、MCH≥27pg的人群中 αα/-α3.7检出率要大于-α4.2/αα；同时，在我国南方五省αα/-α3.7的检出率高于-α4.2/αα[8-12]，也可能造成两者的构成比差异。这与本研究结果(αα/-α3.7占 88.46%，α4.2/αα 占 5.77%)一致。

在检出的115例β-地贫中，17种β突变基因共检测出9种突变类型，从高到低依次是IVS-2-654、CD41-42、、CD17、 -28、CD71-72、INS-1-1、CAP 、-29、βEM 。 本 研究中 ， 在 MCV≥82fl、MCH≥27pg的孕妇人群中仅检出CAP杂合子2例，在β-地贫基因中的比率为1.74%(2/115)。结果说明MCV≥82fl、MCH≥27pg时不能排除个别轻型β地贫基因型。本研究还发现1例静止型α地贫合并轻型β地贫基因者，可能是α地贫合并β地贫时，在β肽链合成减少的同时,α肽链亦合成减少,使二者不平衡的状态得以平衡。亦有蔡永林等[13]报道过--SEA/CD41-42复合型1例(MCV：84fl MCH：28.3pg)。由于本研究收集到的α复合β地贫型例数较少，是否在该人群中还有其他复合基因携带者，有待后续探讨。

本研究结果表明，在血液型表型阴性的孕妇人群中，漏检的主要是静止型α地贫、少部分轻型β地贫和α合并β地贫，由于他们的MCH、MCV区间与健康人群间有较大的重叠区，故很难通过血液表型筛查来发现。而漏检率最高的是静止型α地贫，其危害在于它与HbH病密切相关，HbH病虽非致死性疾病，但它严重影响患者的生存质量。强制婚检取消后，孕前或孕后检查就尤显重要。目前国内地贫筛查的方法主要有血常规、红细胞脆性试验、血红蛋白电泳等[14]，这些方法操作简单，价格较低，虽能筛出绝大多数典型的地贫基因携带者，但轻型地贫携带者易漏检。也不能区分血液学表型特征类似但基因型不同的个体。地贫携带者个体的确诊、地贫的遗传咨询和产前诊断均有赖于基于DNA分析的基因分型[15]。

因此，建议对于地贫高发区人群，夫妻双方均需做血液学初筛，若一方确定为α地贫，另一方无论MCV、MCH是否正常，都建议进行相应的地贫基因检测，为孕产妇考虑是否选择终止妊娠，减少HbH胎儿、甚至Bart胎儿水肿的出生提供了可靠的科学参考。对指导优生优育，提高人口素质有重要意义。

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