鱼源嗜水气单胞菌疫苗生产菌株与分离株的抗原性分析

任 燕，张德峰，孙承文，陶家发，李宁求，刘礼辉，石存斌，吴淑勤

(中国水产科学研究院珠江水产研究所广东省水产动物免疫技术重点实验室/农业部渔药创制重点实验室，广东 广州 510380)

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila，Ah)是一种重要的人兽鱼共患病原，目前国内已有商品化的鱼用Ah灭活疫苗。ERIC-PCR、RAPD等分型技术从基因水平的差异来反映生物个体之间的差异，已用于Ah的分子分型[1-2]；但分子分型图谱相似的菌株可能表型特征有较大的差别，胡萌等发现商品化Ah败血症灭活疫苗生产菌株J-1与NJ-35等4株致病性菌株的ERIC-PCR图谱相似，但外膜蛋白图谱差异较大[3]。本实验利用传统血清学方法，采用western blot和细菌凝集试验，分析了J-1和近年分离的致病性菌株YYK090901的抗原性差异，为Ah流行病学调查和储备疫苗候选菌株提供参考。

1 材料和方法

1.1 菌株和实验动物 Ah败血症灭活疫苗(新兽药证书号：2001新兽药证字第06号)的生产菌株J-1株，由南京农业大学分离鉴定；YYK090901等27株菌株由珠江水产研究所水产病害与免疫研究室分离保存(表1)。2月龄～3月龄(体质量为1.0 kg～1.5 kg)新西兰SPF大白兔，购自广东省医学实验动物中心。

1.2 主要试剂 TSB培养基购自广东环凯微生物科技有限公司；弗氏佐剂购自Sigma公司；HRP标记的羊抗兔IgG(IgG-HRP)购自Jackson公司。

1.3 兔抗全菌血清制备 培养24 h的菌液用0.3%甲醛灭活48 h～72 h，无菌检验合格后，将浓度为1.0×1010cfu/mL的全菌抗原与等量弗氏完全佐剂乳化，制备油包水抗原制剂。经颈背部皮下多点注射免疫SPF级大白兔，每只免疫剂量1.5 mL。两周后与弗氏不完全佐剂等量充分乳化，加强免疫，以后每隔一周加强免疫一次。……