胚胎角膜干细胞移植治疗翼状胬肉的远期临床观察

郑培新221124江苏省徐州市铜山区大许中心卫生院眼科

胚胎角膜干细胞移植治疗翼状胬肉的远期临床观察

郑培新
221124江苏省徐州市铜山区大许中心卫生院眼科

目的：探讨胚胎角膜干细胞移植治疗翼状胬肉的远期临床效果。方法：收治翼状胬肉患者100例(108眼)，随机分成观察组和对照组各50例(54眼)，对照组在显微镜下常规切除翼状胬肉头部，形成6mm×8mm大小的巩膜裸露区。将结膜间断固定于浅层巩膜，暴露宽度3～4mm，术毕包扎，48 h后给予氧氟沙星眼液滴眼，第5天改用典必舒滴眼液滴眼，术后10 d拆线。观察组在对照组的基础上，在结膜间断固定于浅层巩膜时，将上述准备好的移植材料，平铺于暴露巩膜的创面上，缝合，剪除多余羊膜组织。术后治疗与对照组相同。结果：观察组50例(54眼)均未见上皮排斥线，术后3 d术区角膜上皮愈合，拆线后羊膜水肿消失，愈合率100.0％，经过1～36个月的随访，复发1例，复发率1.9％，对照组50例(54眼)，45眼5～7 d术区角膜上皮愈合，愈合率83.3％(45/54)，经过1～36个月的随访，复发20眼，复发率37％(20/54)。结论：胚胎角膜干细胞移植治疗翼状胬肉的复发率低，远期疗效好。

胚胎角膜干细胞移植；翼状胬肉；远期疗效

翼状胬肉是最为古老的眼病[1]。传统的翼状胬肉切除术术后复发率较高，随着研究的不断深入，胚胎角膜干细胞移植可以明显降低复发率[2]。2012年11 月-2015年11月收治翼状胬肉患者100例(108眼)，进行总结和分析，现报告如下。

资料与方法

2012年11月-2015年11月收治翼状胬肉患者100例(108眼)，胬肉组织侵入角膜缘＞3.5mm，均无外伤、化学烧伤等病史，随机分成观察组和对照组各50例(54 眼)，其中观察组男24例，女26例，年龄33～78岁，平均(57.8±8.9)岁，其中左眼20眼，右眼34眼。对照组男23例，女27例，年龄32～79岁，平均(57.8±9.0)岁，其中左眼21眼，右眼33眼。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义。

方法：①人胚胎角膜干细胞来源：首先选择无梅毒、乙肝、丙肝、艾滋病等血液传染病的剖宫产产妇的钝性剥离羊膜和绒毛膜，用100μg/mL的链霉素和100 U/mL的青霉素的混合液洗涤3遍[3]，剪成25 mm×25 mm大小，加入等量DMEM与纯甘油，-80℃贮存。使用前，在室温下融化羊膜，在PBS中水化30 min[4]，再用0.25％胰蛋白酶+0.02％ EDTA消化1 h，然后用细胞刮刀刮除其上皮，再用PBS洗3遍，将上皮基底面向上平铺于固定羊膜的培养板中备用。②组织材料的获取和细胞培养：获取：选择自然流产的13周胚胎的新鲜角膜缘上皮，剪碎、消化、中止消化、离心后，在DMEM与F12培养基中加入适当浓度的促细胞生长成分，严格控制培养条件，进行体外培养和扩增角膜缘干细胞。将第3代细胞种植在已将羊膜上皮基底膜向上平铺于培养皿中的羊膜上，继续培养12～14 d后，进行BrdU标记细胞染色及免疫荧光染色，检测p63、connexin43、keratin3、keratin12的表达情况。检测结果显示第三代培养细胞保存羊膜表面后仍可大量扩增、会聚、克隆生长而不分化，显示干细胞的特性。鉴定后，将其作为移植材料。③方法：对照组在显微镜下常规切除翼状胬肉头部，形成6mm×8mm大小的巩膜裸露区。将结膜间断固定于浅层巩膜，暴露宽3～4mm，术毕包扎，48 h后给予氧氟沙星眼液滴眼，第5天改用典必舒滴眼液滴眼，术后10 d拆线。观察组在对照组的基础上，在结膜间断固定于浅层巩膜时，将上述准备好的移植材料平铺于暴露巩膜创面上，缝合，剪除多余羊膜组织。术毕治疗与对照组相同。

疗效评定标准：以术后12～24个月复诊结果为疗效评判依据。①痊愈：结膜平整，无充血，角膜上皮愈合良好，表面光滑且基本透明，角膜及球结膜无新生血管和结膜下组织增生。②复发：结膜充血明显，局部增殖肥厚，纤维血管增生组织侵入角膜缘内超过1mm。

结果

两组患者治疗效果及复发情况比较：观察组50例患者(54眼)均未见上皮排斥线，术后3 d术区角膜上皮愈合，拆线后羊膜水肿消失，愈合率100.0％，经过1～36个月的随访，复发1眼，复发率1.9％，对照组50例患者(54眼)有45眼5～7 d术区角膜上皮愈合，愈合率83.3％ (45/54)，经过1～36个月的随访，复发20眼，复发率37.0％(20/54)，见表1。

讨论

翼状胬肉是最为古老的眼病，也是眼科常见病和多发病，其发病机制目前尚不明了。这种疾病不但会导致眼刺激征及外观缺陷，而且还可以不同程度地影响视力，传统的翼状胬肉切除术术后复发率较高，术中应彻底切除病变组织和一定范围内的正常结膜及结膜下组织，创面充分止血，减少羊膜下积血而引起植片溶解，脱落，导致复发。羊膜应平铺，紧贴植床，间断缝合，固定于浅层巩膜上，大小合适，使结膜能遮盖羊膜1～2mm，它不仅有利于羊膜载体上的胚胎角膜干细胞贴附和生长，还有利于正常表型的眼表上皮细胞增生。

表1 两组患者治疗效果及复发情况比较[n(％)]

本组资料采用胚胎角膜干细胞移植术进行治疗，胚胎角膜干细胞来源于自然或药物流产的胚胎眼球，羊膜是人体最厚的一层基底膜，利用羊膜可促进培养的角膜干细胞增生并抑制其分化，将这样制作的胚胎角膜干细胞移植到患者眼部，术后不会发生免疫排斥反应，Donald等研究发现羊膜本身又具有抗纤维化、抗新生血管、抗感染及抗粘连作用[5]，是培养胚胎角膜干细胞的最佳培养基，Al-Fayez等研究发现胚胎角膜干细胞移植治疗翼状胬肉明显降低了复发率[6]。

本组资料结果显示：观察组50例患者(54眼)均未见上皮排斥线，术后3 d术区角膜上皮愈合，拆线后羊膜水肿消失，愈合率100.0％，经过1～36个月的随访，复发1例，复发率1.9％，对照组50例患者(54眼)有45眼5～7 d术区角膜上皮愈合，愈合率83.3％(45/54)，经过1～36个月的随访，复发20眼，复发率370％(20/54)。由此可见，胚胎角膜干细胞移植治疗翼状胬肉复发率低，远期疗效好，值得推广。

[1] Shimazaki J,Aia M,Goto E,etal.Transplantation of human limbal epi thelium cultivated on amniotic membrane for the treatment of severe ocular surface disorders[J].Ophthalmology,2012,109(7)：1285-1290.

[2] Tananuvat N,Martin T.the results of amniotic membrane transplantation for primary pterygium compared with conjunctival autograft [J].Cornea,2014,23(5)：458-463.

[3] 李炜,司马晶,李林,等.角膜缘干细胞移植与羊膜移植治疗翼状胬肉疗效之比较[J].当代医学,2012,18(21)：37-39.

[4] 刘卫东.自体角膜缘干细胞移植联合丝裂霉素C治疗翼状胬肉临床分析[J].河南科技大学学报(医学版),2008,26(4)：283-384.

[5] Donald THT,Arthur SML,Hak SG.Abnormal expression of the p53 tumor suppressor gene in the conjunctiva of patientwith pterygium [J].Am JOphthalmol,2007,123(3)：404-405.

[6] Al-Fayez MF.Limbal versus conjunctival autograft transplantation for advanced and recurrent pterygium[J].Ophthalmology,2012, 109(9)：1752-1755.

Long term clinicalobservation ofembryonic cornealstem cell transp lantation in the treatmentof pterygium

Zheng Peixin
Ophthalmology Department,Daxu CenterHospitalofTongshan District,Xuzhou City,Jiangsu Province 221124

Objective：To explore the long term clinicalobservation ofembryonic cornealstem cell transplantation in the treatment ofpterygium.Methods：100 patients(108 eyes)with pterygium were selected,theywere random ly divided into the observation group and the control group with 50 cases(54 eyes),the control group was treated with conventional excision of pterygium under microscope,scleral exposed areawith 6mm×8mm was formed.Conjunctivawas fixed in shallow layer scleral discontinuity,the width ofexposurewas3 to 4mm,after surgery,thewound wasbandaged,48 hours later,the patientwasgiven levofloxacin eye drops, on the fifth day,the eye dropswere changed to Dianbishu eye drops,at10 days after operation,thewound can take out stitches.In the observation group,on the basis of the controlgroup,the preparedmaterialwas placed on thewound when conjunctivawas fixed in shallow layer scleral discontinuity,and then suture thewound,excessamniotic tissuewas cutoff.After surgery,the treatmentwas same as that of the control group.Results：In the observation group of 50 cases(54 eyes),theywas no epithelial rejection line,at3 days after surgery,cornealepithelium was healed,after suture removal,amnioticmembrane edemawas disappeared,the healing rate was 100％,after1 to 36monthsof follow-up,1 casewas recurred,the recurrence ratewas 1.9％,in the controlgroup of50 cases(54 eyes),at5 to 7 days later,the cornealepithelium of 45 eyeswas healed,the healing ratewas 83.3％(45/54),after 1 to 36months of follow-up,20 eyeswere recurrented,and the recurrence ratewas37％(20/54).Conclusion：The recurrence rate ofembryonic corneal stem cell transplantation in the treatmentofpterygium was low,and the long-term effectwasgood.

Embryonic cornealstem cell transplantation；Pterygium；Long term clinicalobservation

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.36.35