XE-2100全自动血细胞分析仪不同检测方法对低值血小板标本的检测准确度比较

胡刘平，杜玉珍，余伟模，常贯成，吴旺喜

·临床医学··短篇论著·

XE-2100全自动血细胞分析仪不同检测方法对低值血小板标本的检测准确度比较

胡刘平，杜玉珍，余伟模，常贯成，吴旺喜

血小板；全血细胞分析仪；检测方法

XE-2100全自动血细胞分析仪在对低值血小板标本检测时,当其血小板相关参数可测出且相应的血小板直方图曲线基本规则时,对血小板计数结果准确。而当血小板相关参数测不出且相应的血小板直方图曲线不规则呈现时,应选用流式细胞激光法进行复查。尤其当遇到血小板直方图曲线呈显著不规则抬高或左移,而血涂片镜检又有较多巨大、微小的标本时都应进行手工显微镜法计数,尽量为临床提供一个准确可靠的血小板计数结果。

目前全自动血液分析仪计数多采用电阻抗法,然而由于电阻抗法存在干扰因素较多,致使其结果的准确性也受到一定程度的干扰,按本科室复检规则要求当血小板(PLT)＜90 ×109/L时需进行手工显微镜法计数复检。然而,笔者在日常工作中发现在低值血小板标本中其血小板相关参数与其计数准确性方面有一定关系。本文主要探讨电阻抗法和流式细胞激光法2种技术与手工显微镜法计数法对低值血小板标本统计的准确性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 300例低值血小板样本取自本院住院及门诊患者,受检者抽血2 ml置EDTAK2真空抗凝管,混匀,室温放置,所有标本检测均在标本采集后4 h内完成。其中PLT参数不可测100例为A组、PLT参数可疑100例为B组、PLT参数可测出100例为C组。

1.2 仪器与试剂 XE-2100全自动血细胞分析仪(日本东亚公司)。Olympus CX21双目显微镜(日本Olympus公司)。XE-2100原装进口试剂及专门配用的全血质控物(日本东亚公司)。静脉血用乙二胺四乙酸二钾(EDTAK2)真空抗凝管(BD公司)。血小板稀释液按《全国临床检验操作规程》第3版［1］的要求配制。瑞吉染色液(珠海贝索生物技术有限公司)。实验前用XE-2100专门配用的质控物校准仪器,并且每日都用XE-2100配套的进口质控品(3个溶度)作室内质控,各参数检测值必须在控,才能进行日常标本检测。

1.3 实验方法 每份标本同时采用XE-2100全自动血细胞分析仪的电阻抗法和流式细胞激光法进行检测。按《全国临床检验操作规程》第3版的要求,每份标本由2名检验师使用草酸铵稀释液对其稀释并进行手工显微镜法计数,如两者结果相差小于10%,则取其平均值,如大于10%,则重新取样充池计数［2-4］。

1.4 统计学处理 采用SPSS 19.0软件统计,实验数据以均数±标准差(±s)表示,应用两样本配对t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

A组3例巨大血小板标本未记录,B组1例EDTA依赖性聚集标本未记录。XE-2100全自动血细胞分析仪电阻抗法、流式细胞激光法与手工显微镜计数法血小板数比较及相关性分析结果见表1、表2。

表1 XE-2100全自动血细胞分析仪电阻抗法、流式细胞激光法与手工显微镜计数法检测血小板数的比较(×109/L，±s)

表1 XE-2100全自动血细胞分析仪电阻抗法、流式细胞激光法与手工显微镜计数法检测血小板数的比较(×109/L，±s)

注:与手工计数法比较aP＜0.01；A为血小板不可测组,B为可疑组,C为可测组

组别 例数 手工计数法 电阻抗法 流式细胞激光法A组 97 47.69±30.81 47.35±30.73 45.65±30.94aB组 99 63.51±19.98 58.94±18.55a64.05±19.74 C组 100 63.09±22.68 62.68±22.46a63.44±23.15a

表2 XE-2100全自动血细胞分析仪电阻抗法、流式细胞激光法与手工显微镜计数法的相关性分析

3 讨论

PLT是多功能细胞,在生理性凝血和纤溶过程中起着重要的作用,它也是研究患者凝血功能障碍众多血液检测项目之中最为重要的指标之一。在临床上,PLT减低是引起出血的常见原因。当患者PLT＜20×109/L,可有较严重的出血,当PLT＜5×109/L时常严重出血,可危及患者生命［4］,所以其计数的准确性具有重要的临床意义。

随着血液分析仪的推广和普及,血液分析仪越来越广泛地应用于临床血常规分析中。目前临床实验室用于PLT检测的主流全血细胞分析仪是以电阻抗法为主。而本实验室的XE-2100全血细胞分析仪同时拥有电阻抗法和光学法两种检测PLT的方法。PLT-I在其血小板直方图正常的情况下,通常是可以得到准确且重复性好的结果,但此方法易受到干扰因素的影响,尤其在低血小板标本且直方图异常的情况下更为显著。而光学法采用半导体激光和流式细胞仪技术(FCM),对电阻抗法易受到的常见干扰因素可以起到很好的抗干扰作用,从而得到准确的血小板计数结果。手工显微镜计数法虽然为PLT计数的参考方法,但其缺陷就是重复性差。有文献报道,手工显微镜计数法在不同的操作者之间的变异系数可达10%～25%［5］。所以本文研究的手工计数结果是由本室临检组经验丰富的技术人员计数2次取其均值。

为了给临床提供一个准确的PLT计数结果,根据复检规则当PLT＜90×109/L时需要推片复检,而当PLT＜30×109/ L时还需向临床报告危急值。然而笔者在日常工作中却发现,PLT直方图发现曲线右侧上翘但整条曲线可不规则,特别是右侧曲线出现锯齿状。由于曲线尾部上翘以至于血小板直方图出现PU＞20%或PU＞40%,从而造成了仪器无法识别。这提示,在此情况下当仪器检测低值血小板标本时, PLT计数的准确性可能受到多种因素的影响。一些体积较大和巨大血小板、畸形血小板、血小板聚集、血小板卫星现象［6］导致电阻抗法都未能正常计数,造成血小板假性减少。血涂片及手工法计数也证实了这一点。而光学法却能克服这些电阻抗法计数血小板的干扰因素。另外,当PLT直方图发现曲线右侧上翘但整条曲线也可不规则,曲线右侧与X轴接近但并不重合,在这种情况下,经血涂片染色镜检易见到部分脱颗粒的血小板,微小血小板及血小板大小不一性较显著。所以此情况可能导致电阻抗法血小板计数的结果更接近手工计数结果。当其相应的血小板直方图曲线基本光滑且右侧曲线均与X轴重合,尾部无上翘现象,其PLT手工计数都明显高于相应的电阻抗法及光学法。分析其原因,可能是由于电阻抗法及光学法都未把那些巨大血小板准确计数,与张伟红等［7］报道相符。

总之,PLT的准确计数对临床疾病尤其是血液性疾病的诊治极为重要,它也是血常规检查中的一个常规指标。然而PLT的准确计数实非易事,虽然XE-2100全自动血细胞分析仪计数血小板具有较高的准确性和重复性,并且其计数的准确性随着样本中PLT数量增多而增高,但是在低血小板标本计数中其准确性是随着样本中PLT数量减少而减低的［8-9］。因此在日常低血小板标本检测中尤其是伴随着PLT直方图异常时,需用光学法或手工方法进行复查,然而手工方法复查在大型三甲医院日常工作中是很难实施的,用流式细胞术成本太高也难以在日常工作中实施。实践工作中发现在低值血小板样本中,当仪器出现异常报警信息及PLT相关参数无结果时,其电阻抗法的结果不可靠,此时为了保证PLT检验结果的准确性和可靠性,宜结合血涂片镜检选用流式细胞激光法复查,结合血小板直方图及血涂片镜检综合判断分析,血涂片镜检可直接观察PLT的分布和体积大小,同时也可观察到是否有小红细胞、红细胞碎片、大/巨大血小板和血小板聚集对PLT计数的干扰［10］。本次实验标本量较小,而用于PLT检测的电阻法与激光法各自优越性的适用范围还需要更多的实验和数据加以论证。综上分析可见XE-2100全自动血细胞分析仪PLT相关参数结合其直方图在判断低值PLT标本计数准确性方面具有一定的参考价值。

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10.3969/j.issn.1009-0754.2015.06.029

2015-03-20)

(本文编辑:张阵阵)

201306 上海,上海交通大学附属第六人民医院东院检验科

杜玉珍,电子信箱:duyuzhen2005@163.com