哈萨克药欧亚绣线菊的质量标准研究

昂沙尔·塔力道 拉扎提·吐尔逊拜 木拉提·克扎衣别克

(伊犁哈萨克自治州哈医药研究所，新疆 伊宁 835000)

欧亚绣线菊来源为蔷薇科绣线菊属欧亚绣线菊(Spiraea media Schmidt)的干燥枝，蔷薇科植物绣线菊属约有100 余种，分布在北半球温带至亚热带山区，我国有70 余种，分布于陕西、山东、江苏、安徽、浙江、江西、湖北、四川、贵州、云南、内蒙古、新疆等省区。在我国绣线菊作为一种药用植物，很早就有记载，绣线菊作为民间药在哈萨克医中应用历史悠久，范围广泛;具有止痒，收敛，抗真菌感染等功效;用于牛皮癣，手足癣，子宫劲糜烂，高血糖引起的口干、咽干，肝炎传染期等症［1］。但本品过去一直未建立相应的药材质量标准，致使该药草一直处于无标准控制状态，严重影响了哈萨克医临床用药的安全性有效性。为了进一步开发欧亚绣线菊资源，使其质量可控，确保临床用药和工业生产的安全有效，本研究对欧亚绣线菊质量控制的主要技术进行研究，建立相应的质量控制方法，为制订该药材质量标准提供了实验依据。

1 材料与仪器

1.1 药材: 蔷薇科欧亚绣线菊Spiraea media Schmidt。分别采自于新疆昭苏、察布察尔、霍城等地，经新疆农业大学草业与环境科学学院植物教研室吾买尔夏提·塔汗教授鉴定，原植物及药材标本现保存于伊犁哈萨克自治州哈医药研究所标本室。

1.2 试剂: 95%乙醇、石油醚、福林酚试剂由国药集团化学试剂有限公司提供;没食子酸标准品、胡萝卜苷标准品由成都曼斯特生物科技有限公司提供;硅胶60 荧光薄层层析铝箔板由德国默克公司提供;纯水(自制)。

1.3 仪器: UV-1750 紫外分光光度计(日本津岛公司);PL4002 电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);ZF -107 型紫外分析仪(上海文锦仪器有限公司);DZF -6020型真空干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂);WJRO-20 型超纯水机(杭州万洁水处理设备有限公司);数显式电热恒温水浴锅(常州诺基仪器有限公司)。

2 方法与结果

2.1 预试验溶液的制备

2.1.1 水提取液

2.1.1.1 冷水浸液: 称取样品粗粉5.0 g，置于100mL 的三角烧瓶中，加纯水50 ～60 mL 室温浸泡过夜。过滤出约20 mL 滤液供检查氨基酸，多肽，蛋白质用。

2.1.1.2 热水提取液: 将上述剩余的冷水浸泡液连同滤渣于水浴上60 ℃左右热浸0.5h，趁热过滤，滤液供检查糖，多糖，有机酸，皂甙，甙类，酚类，鞣质等成分用。

2.1.2 乙醇提取液: 另称取样品粗粉10.0 g，置于250 mL圆底烧瓶中，加95%乙醇100 mL，于水浴上加热回流1h，稍冷后加入纯水使其含醇量为70%，冷至室温，过滤，滤液转移至分液漏斗中;用100 mL 石油醚(60 ～90 ℃)分两次萃取，每次用石油醚50 mL，以除去叶绿素等，分出下层乙醇提取液，浓缩至40 ～50 mL，加95%乙醇50 mL 溶解后过滤，滤液供检查黄酮，蒽醌，香豆素，萜类，甾体化合物，内酯化合物，强心苷，有机酸，酚类，鞣质等成分用。

2.1.3 酸性乙醇提取液: 称取样品粗粉2.0 g，加0.5%硫酸的乙酸溶液10 mL，于水浴上加热回流10 min，过滤，滤液供检查生物碱用。取上述酸性乙醇提取液先用稀氨水调至中性，再于水浴上蒸干，残渣加5%硫酸5 mL 溶解后，过滤，滤液供以下实验用。

2.1.4 石油醚提取液: 称取样品粗粉1.0 g，加入石油醚(60 ～90 ℃)10 mL，滤液供检查挥发油，油脂，萜类，甾体化合物等成分用。

2.2 各类成分的检查

分别取上述预试液1 mL 于试管中，参照文献［2、3、4］，配制相应试剂加入盛有供试液的试管中进行预实验，观察反应现象，判断绣线菊中化学成分的存在情况。

2.3 化学成分系统预实验结果

经检验欧亚绣线菊枝可能含有糖、皂苷、有机酸、酚类、鞣质、甾体或三萜类、挥发油、内酯、香豆素类、强心苷等成分。

2.4 专项薄层色谱鉴别

2.4.1 绣线菊化学成分的提取分离: 称取20.0 g 绣线菊枝粗粉，200 mL 95%乙醇放入平底烧瓶中，索氏提取法提取，待提取结束，冷却静置过滤，浓缩回收乙醇，得浸膏。浸膏中加入10 mL 纯水于水浴锅上65 ℃加热，再加入10%NaOH 溶液发生皂化反应至无气泡产生，过滤，得固体产物。

2.4.2 对照品与供试品的制备: 取绣线菊提取物溶于1 mL 甲醇中，超声处理10 min，制成供试品溶液;取胡萝卜苷标准品1.91 mg，溶解于1 mL 甲醇中，超声处理10 min，制成对照品溶液。

2.4.3 薄层色谱实验: 以三氯甲烷-甲醇-水(13: 7: 2下层)为展开剂，在氧化铝板上点样10μL，进行展开，展开完干燥，喷洒10% 硫酸溶液，于烘箱中105 ℃下加热5 min，在同一位置上显相同颜色的斑点，均为紫色，并在365 nm 紫外下同一位置上显蓝紫色荧光。结果见图1，图2。

图2 日光下的色谱图

2.5 总酚含量测定

2.5.1 对照品溶液的配制: 精密称取5 mg 没食子酸对照品，置50 mL 容量瓶用纯水溶解并稀释至刻度。精密量取该溶液15 mL，用纯水定容至50 mL，即得对照品溶液。(没食子酸质量浓度为30 μg·mL-1)。

2.5.2 样品溶液的制备: 称取1.5 g 绣线菊粗粉加入100 mL 95%乙醇置于锥形瓶中，称定质量，加热回流2 h，放冷再次称定质量，并用乙醇补足减失的质量，过滤取滤液。

2.5.3 检测波长的确定: 精密吸取没食子酸对照品溶液2.0 mL 和供试品溶液0.5 mL，分别置于10 mL 容量瓶中，加入纯水至5.0 mL，加入0.5 mL Folin-Ciocalteu 试剂，摇匀6 min 后加入20%碳酸钠溶液1.5 mL，用纯水定容至10 mL，室温下反应2 h(避光)。以试剂溶液为空白，于500 ～900 nm 波长处进行扫描，结果见图3。

试验结果表明，没食子酸对照品溶液在745 nm 波长处有最大吸收，供试品溶液在此波长也有最大吸收，故检测波长为745 nm。没食子酸浓度在1.5 ～10.5 mg·mL-1范围内线性关系良好。得回归方程: A =0.0945C +0.0436，相关系数r=0.9995。

2.5.4 标准曲线的绘制: 精密量取上述对照品溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 mL 于10 mL 容量瓶中，加入纯水至5.0 mL，加入0.5 mL Folin -Ciocalteu 试剂，摇匀6 min 后加入20%碳酸钠溶液1.5 mL，用纯水定容至10 mL，室温下反应2 h(避光)。以第一个溶液为空白，在745 nm波长处处测定对照品溶液的吸光度，以对照品的含量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2.5.5 精密度试验: 精密量取同一批已知浓度的供试品溶液6 份，每份0.5 mL，分别按“标准曲线的绘制”项方法下显色，以试剂溶液为空白对照，进行含量测定，重复3 次。结果显示，此方法精密度为1.69%，小于5%，说明此方法稳定性良好。

2.5.6 加样回收率的试验: 精密量取同一批已知浓度的供试品溶液10 份，每份0.5 mL，分两组，一组各加入没食子酸对照品溶液0.5 mL，另一组各加入1.0 mL，分别按“标准曲线的绘制”项方法下显色，以试剂溶液为空白对照，进行含量测定，重复3 次，并计算回收率。结果表明，此方法加样回收率为97.9% ～102.3%，符合测定要求。

2.5.7 欧亚绣线菊醇提液中总酚含量测定及重现性试验: 精密量取供试品溶液各5 份，每组0.5 mL，按“标准曲线的绘制”项方法下显色，以试剂溶液为空白对照，进行含量测定，重复3 次，按以下公式计算供试品中总分类化合物含量。

供试品中总酚含量/mg·g-1= (C × 2 × 10 × 100/1000)/m

其中C 为10mL 供试品溶液中总分浓度/mg·mL-1，m 为供试品取样量/g。代入回归方程后所得结果，见表1。

表1 欧亚绣线菊中总酚含量

3 结论

近年来，民族用药在逐渐成为人们关注的热点。欧亚绣线菊作为哈萨克民间常用药之一，在治疗各种顽固性皮肤病时有着独特的疗效。文献报道绣线菊属植物中含有黄酮、生物碱、皂苷、鞣质、酚酸、香豆素、木脂素等成分，如苏联、日本学者首次从粉花绣线菊中发现C -20 二萜生物碱［5］，之后我国学者又相继报道了从国产的变种光叶绣线菊［6］及毛萼绣线菊［7］中发现一系列新的二萜生物碱;谢海辉等从蒙古绣线菊中分离出β-谷甾醇，白桦脂醇，白桦脂酸，白桦脂酸3，5 -二羟基肉桂酸酯和胡萝卜苷等成分［8］。国外文献中报道绣线菊属植物中木脂素、黄酮类、黄酮醇类、香豆素、酚酸等总酚类成分较多［9，10，11］，如绣线菊属植物金丝桃叶绣线菊中分离出儿茶素、表儿茶素、儿茶素-7-鼠李糖苷、儿茶素-7 -阿糖胞苷、木犀草素-5 -β -D-吡喃葡萄糖苷等成分［12，13］;柳叶绣线菊中分离出肉桂酸，对羟基肉桂酸，对甲氧基肉桂酸，1 -O-香豆酰-β-D-吡喃葡萄糖苷、1 -O -咖啡酰-β -D -吡喃葡萄糖苷、金丝桃苷、槲皮素-3 -(6”-O -α -L -吡喃阿拉伯糖)-β-D-半乳糖苷等［14］;台湾绣线菊中分离出spiraforminA，B，C，D 等四种新木脂素［15］。但目前欧亚绣线菊的成分研究尚属空白，为更好地开发和发挥欧亚绣线菊在哈萨克医治疗疾病中的应用。本研究按照中药质量标准化研究的要求，对不同地产的欧亚绣线菊进行了质量标准研究。通过查阅古代医学著作和现代有关欧亚绣线菊的研究文献，结合绣线菊属植物的药用功效以及所含各种化学成分的药理作用与功效的相关性等，确定了所要考察的指标性成分，制定研究方案。参考《中国药典》2010 版一部以及相关的研究文献，确定欧亚绣线菊中指标性成分考察的实验方法。丰富了欧亚绣线菊化学成分的研究资料，也为今后开发利用绣线菊属植物提供了一个检测方法。

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