外周血染色体制备方法的探讨

庄建龙，王元白，庄倩梅

（泉州市妇幼保健院·儿童医院产前诊断中心，福建泉州362000）

染色体核型分析对人类遗传病的研究和诊断有着非常重要的意义［1］，而其中染色体G 显带长度是诊断染色体结构异常的关键［2］。秋水仙素使处于增殖周期中的分裂细胞停止在中期。秋水仙素的加入量和加入时间成为获得中期有丝分裂细胞的关键［3］。通过改变秋水仙素处理时间及用量等几个关键步骤，成功地改良了外周血染色体的质量，不仅在染色体长度、分散度及带型上得到了很大程度的改善，而且也大大地缩短了制备时间，节省了人力资源。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选取2014年1月至2014年7月于本院进行了产前诊断中染色体检查的1 170例患者。

1.2 仪器与试剂 细胞培养箱为美国SHEL LAB产品，淋巴细胞培养液6mL为青岛莱佛生物工程研究所产品，秋水仙素100μg／μL，胰酶为美国Gibco公司产品，0.075mol／L 氯化钾低渗液，新鲜配制的固定液（甲醇∶冰醋酸＝3∶1），pH7.4和pH6.8磷酸盐缓冲液，吉姆萨染液购自青岛莱佛生物工程研究所。

1.3 方法

1.3.1 接种 用肝素湿润注射器无菌操作抽取2 mL 静脉血，取外周血淋巴细胞培养液溶解，碘伏消毒培养瓶盖后，在酒精灯火焰旁加入0.5mL血标本（与本室常规制备一致）。

1.3.2 培养 将接种后标本置37 ℃培养箱中培养68～72h（与本室常规制备一致）。

1.3.3 收获 收获前15 min加入100μg／μL 秋水仙素50 μL，将培养的细胞移入10 mL 刻度离心管中，2 000r／min离心10min（本室常规操作为收获细胞前1h加入100μg／μL秋水仙素17μL，2 000r／min离心10min。

1.3.4 低渗 离心l0min弃上清液后加入8mL 0.075mol／L的KCl低渗液，吹打均匀后置于……