氨酪酸氯化钠注射液中的α—吡咯烷酮HPLC测定

申安++程伟

[摘要] 目的 建立氨酪酸氯化钠注射液中α-吡咯烷酮含量的HPLC测定方法。 方法 按如下方法设定色谱条件。色谱柱：CAPCELL PAK C18柱；流动相：磷酸二氢钾溶液-甲醇（90∶10） ；磷酸二氢钾溶液的配制：将10.0g磷酸二氢钾、1.1g己烷磺酸钠加水溶解并稀释至1000mL，然后用磷酸调节溶液pH值到2.1；流速：1.0mL/min；检测波长：210nm；进样量：10μL；柱温：30℃。 结果 α-吡咯烷酮的含量在0.4～4.9μg/mL 范围内时，线性关系好，r= 0.9997，平均回收率达99.97%（ RSD =0.48%，n=10）。 结论 HPLC法用于氨酪酸氯化钠注射液中的α-吡咯烷酮含量测定，操作简单、便捷，结果准确。

[关键词] 氨酪酸；注射液；α-吡咯烷酮；HPLC

[中图分类号] R927.1 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2015）16-48-03

Determination of α-pyrrolidone in aminobutyric acid sodium chloride injection by HPLC

SHEN An1 CHENG Wei2

1.Jiaozuo Institute for Food and Drug Control， Jiaozuo 454150， China； 2.Public Security Bureau of Sanemenxia City He'nan Province， Sanemenxia 472000， China

[Abstract] Objective To establish a HPLC method for the content of α-pyrolidone in aminobu-tyric acid sodium chloride injection. Methods Set chromatographic conditions as follows. Chromatographic column： CAPCELL PAK C18 column； Mobile phase： potassium dihydrogen phosphate solution - methanol （90∶10）； the preparation of the potassium dihydrogen phosphate solution： potassium dihydrogen phosphate 10.0 g and 10.0 g hexane sulfonic acid sodium is dissolved with water and diluted to 1000 mL， then adjustment the pH of the solution with phosphoric acid to 2.1； Flow rate： 1.0 mL/min； Detection wavelength ： 210 nm ； Sample quantity： 10 μL； Column temperature： 30℃. Results The content of α-pyrolidon within the scope of 0.4 to 4.9 μg/L， good linear relation， r=0.9997， the average recovery is 99.97% （RSD=0.48%， n=10）. Conclusion The HPLC method should be used in the determination of α-pyrolidone's content in aminobu-tyric acid sodium chloride injection， the operation is simple and convenient and the result is accurate.

[Key words] Aminobutyric acid； Injection； α-pyrrolidone； HPLC

氨酪酸是一种广泛应用于临床治疗的一种中枢兴奋药，可用于多种疾病的治疗，如脑血管疾病后遗症、头部外伤导致的记忆障碍、安眠药及一氧化碳中毒导致的昏迷等[1-4]。目前，主要有氨酪酸片和氨酪酸氯化钠注射液两种剂型，在临床治疗中，氨酪酸氯化钠注射液应用最为广泛[5-7]。对氨酪酸氯化钠注射液中的α-吡咯烷酮含量进行定量分析，可以控制药品质量，降低不良反应发生率。

1 仪器与化学试剂

1.1 仪器

岛津LC10A-TVP型高效液相色谱仪：由LC-10ATvp输液泵、SPD-10Avp（UV-VIS）检测器、SIL-10ADvp自动进样器、CTO-10ACvp柱温箱、CLASS-VP工作站及C-R7A/C-R8A数据处理机等组成。

1.2 化学试剂

氨酪酸氯化钠注射液（江苏天禾迪赛诺制药有限公司，H20060220）；α-吡咯烷酮（上海弘顺生物科技有限公司）；水（娃哈哈纯净水）；磷酸、磷酸二氢钾、己烷磺酸钠采用分析纯；甲醇采用色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：CAPCELL PAK C18柱；流动相：磷酸二氢钾溶液-甲醇（ 90∶10） （磷酸二氢钾溶液的配置：将10.0g磷酸二氢钾、1.1g己烷磺酸钠加水溶解并稀释至1000mL，然后用磷酸调节溶液pH值至2.1）； 流速：1.0mL/min；检测波长： 210 nm；进样量： 10μL；柱温： 30 ℃。

2.2 溶液制备endprint

空白对照溶液：移取5.0mL 0.9%氯化钠注射液至25mL容量瓶，蒸馏水稀释至刻度，定容，混匀。

对照品溶液：取适量的α-吡咯烷酮对照品，配置浓度为32.0μg/mL的溶液，梯度稀释至16.0、8.0、4.0、2.0、1.0μg/mL。

供试品溶液：移取5.0mL 氨酪酸氯化钠注射液至 25mL 的量瓶内，蒸馏水稀释至刻度，定容，混匀。

2.3 记录色谱图

在设定的色谱条件下，将空白对照溶液、对照品溶液、供试品溶液分别进样，记录对应的色谱图。如图1所示。

2.4 检测精密度试验

取0.4μg/mL的对照品溶液，连续进样 6 次，记录每次进样后的色谱图，按照主峰面积计算RSD，RSD=0.85%。

2.5 供试品溶液稳定性试验

在溶液配制后的第0，1，4，12，24小时进行供试品溶液中α-吡咯烷酮的含量测定，计算峰面积的RSD，RSD=0.34%，氨酪酸氯化钠溶液在24h内稳定。

2.6 线性关系试验

分别取浓度为1.0、2.0、4.0、、8.0、16.0、32.0μg/mL的α- 吡咯烷酮对照品溶液进样，记录相应色谱图。然后以α- 吡咯烷酮浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，作图，然后进行线性回归分析，r=0.9997，进一步对数据分析发现，当α-吡咯烷酮溶液的浓度在0.40～0.49μg/mL范围内时，线性关系好。

2.7 样品回收率试验

于25mL容量瓶配制α-吡咯烷酮含量确定的氨酪酸氯化钠溶液10份，5mL/份，分别加入20.112μg/mL的α- 吡咯烷酮溶液10mL，用0.9%氯化钠溶液稀释定容至刻度，然后分别进样，记录色谱图，计算样品回收率和RSD。平均回收率达99.97%。见表1。

2.8 确定样品检出限

取浓度为0.1μg/mL的α-吡咯烷酮进行不同倍数的稀释，按照色谱条件进行HPLC分析，确定α-吡咯烷酮的检出限，试验结果为0.5ng。

2.9 含量测定试验

取同批次的氨酪酸氯化钠溶液供试品5份，分别配制为供试品溶液，依次进样，计算α-吡咯烷酮含量，含量测定结果分别是0.140%、0.139%、0.143%、0.142%、0.141%，α-吡咯烷酮平均含量为0.141%，RSD=0.16%。

3 讨论

近年来，为减少药品不良反应，国家药典下发了相应的文件，要求加强氨酪酸氯化钠注射液中有关物质的检查。笔者通过查阅资料发现，氨酪酸氯化钠注射液中α-吡咯烷酮的含量测定标准并不统一，因此，结合相关资料，给出了用高效液相色谱法测定氨酪酸氯化钠注射液中α-吡咯烷酮含量的具体方法。

氨酪酸的合成通常采用吡咯烷酮在高温、碱性条件下水解开环的化学合成方法，不可避免的，氨酪酸原料药中会含有一定量的α-吡咯烷酮[8]。α-吡咯烷酮是一种毒性比较大的化学杂质，如果其在氨酪酸氯化钠注射液中的含量较高，必然会提高药品不良反应发生率，威胁患者的用药安全[9]。因此，必须建立氨酪酸氯化钠注射液中α-吡咯烷酮的含量测定方法。

高效液相色谱法（HPLC）作为色谱法的一种，是药物分析中的一种重要分析方法，有着明显优势[9-17]。（1）应用范围广，大多数有机化合物都可以采用HPLC进行检测分析；（2）分离效能高，具有很高的理论塔板数，分离效果好；（3）分析速度快，目前的高效液相色谱仪可以实现20min内对样品的分析，有的样品的分析时间不超过5min。（4）灵敏度高，HPLC的进样量可以是几μL，可以实现对微量物质的检测。（5）样品可回收，高校液相色谱仪在工作过程中，并不会破坏检测物质结构，因此，样品可以回收。本次研究中将色谱条件中的检测波长设定为210nm，主要原因是，在该波长下α-吡咯烷酮才有吸收，而且，空白对照溶液在此波长下没有紫外吸收，不会干扰试验进行；另外，流动相选择磷酸二氢钾溶液-甲醇（90∶10），可以确保理想的分离度。

研究结果表明，利用HPLC对氨酪酸氯化钠注射液中α-吡咯烷酮的含量进行测定，具有很好的分离度，峰面积与α-吡咯烷酮之间的线性关系以及样品回收率均获得比较满意的试验结果。

综上所述，HPLC法用于氨酪酸氯化钠注射液中的α-吡咯烷酮含量测定，操作简单、便捷，结果准确可靠，值得在氨酪酸氯化钠注射液有关物质检查的药物分析中使用该方法。

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（收稿日期：2015-06-24）endprint