小干扰RNA对人卵巢癌细胞株CXCR4基因表达和侵袭力的影响

燕 锋* 孙国栋 燕 霞 韩文华 刘晓东 崔星亮 刘贵京 王小英 杨 涛 张 静

（1 邯郸市中心血站，河北 邯郸 056002；2 河北工程大学，河北 邯郸 056002；3 邯郸市中医院，河北 邯郸 056002）

根据近几年研究可知，CXCR4在卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌中具有高度表达，并与肿瘤散播、转移具有密切联系[1]。因此，干扰癌细胞的CXCR4有助于繁殖肿瘤转移。本文主要通过RNA干扰技术，用CXCR4-siRNA对人卵巢细胞株进行转染，分析siRNA对人卵巢癌细胞株CXCR4基因表达和侵袭力的影响。研究报道如下。

1 资料与方法

1.1 材料和试剂：南京凯基公司提供卵巢癌细胞株SW626，兔抗人CXCR4抗体购于Santa Cruz公司，PCR试剂盒、脂质体Lipofectamine2000、Trizol试剂盒均购于大连宝生物公司，Biocoat Matrigel侵袭能力检测仪购于美国Becton Dickinson公司[2]。同时，在5%CO2、37 ℃条件下，由DMEM高糖培养液培养SW626细胞，试验用细胞均在对数生长期状态。

1.2 方法：利用阳离子脂质体转染法，按照不同比例的脂质体、质粒转染SW626细胞，在48 h后利用显微镜对转染效果进行观察。同时，取对数生长期细胞，在胰酶消化后计数细胞，在50 mL培养瓶中，以每瓶5×105细胞接种，在CO2条件下培养24 h，确保细胞融合率达到85%左右。然后，在根据转染说明要求进行转染操作，并放入5%CO2、37 ℃中培养，每隔6 h对培养液进行更换，并根据试验要求加入其他试剂。转染48 h后，收集细胞，将细胞裂解液加入其中，提取细胞总蛋白，测试浓度，经过SDS-PAGE凝胶、转膜、CXCR4抗体反应等，冲洗胶片，测试蛋白质表达水平，利用RT-PCR方法测试CXCR4 mRNA[3]。最后，利用Biocoat Matrigel侵染能力检测仪对细胞浸染能力进行分析，将测试结果与空白对照组、阴性对照组比较。

1.3 统计学处理：在处理本次的研究结果的过程中，统计数据处理利用统计学软件SPSS12.0进行，用百分数表示计数资料，并用χ2检验，用（±s）表示正太分布的计量资料，且用t检验，经过数据处理，当P＜0.05时，表示数据有统计学意义。

2 结 果

在siRNA对卵巢癌CXCR4 mRNA表达影响方面，转染72 h后，CXCR4 mRNA水平明显下调，明显低空白对照组与阴性对照组（P＜0.05）；同时，分析Westerm印迹法检测结果，CXCR-siRNA组的蛋白表达率明显低于空白对照组与阴性对照组（P＜0.05）；而在侵袭力影响方面，CXCR-siRNA组穿膜细胞数明显少于空白对照组与阴性对照组（P＜0.05）。见表1。

表1 三组CXCR4基因表达及侵袭力情况（±s）

表1 三组CXCR4基因表达及侵袭力情况（±s）

组别 CXCR4 mRNA水平 CXCR4蛋白表达率 穿膜细胞数CXCR-siRNA组 4.56±0.71 16.31±0.18 15.03±2.46空白对照组 13.48±1.59 48.63±1.07 26.01±3.65阴性对照组 11.34±0.64 47.02±0.76 29.18±4.31

3 讨 论

趋化因子受体及其配体在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用，对趋化因子受体的信号传导进行有效拮抗、抑制可控制趋化因子系统功能，进而对恶性肿瘤转移、复发进行有效防止[4]。作为细胞趋化因子受体之一，CXCR4在组织中表达广泛，在卵巢、乳腺等恶性肿瘤生长、转移中发挥作用。同时，由于CXCR4被其配体结合激活后，可聚合细胞肌动蛋白丝，形成定向迁移侵袭，在肿瘤中异常表达。

在本次研究中， 利用小干扰RNA干扰人卵巢癌细胞株CXCR4，分析siRNA作用下，CXCR4 siRNA的mRNA产量，结果，CXCR-siRNA组的CXCR4 mRNA水平、蛋白表达率、穿膜细胞数均明显低于空白对照组和阴性对照组，而空白对照组与阴性对照组之间无明显差异。由此可知，小干扰RNAZ可有效抑制人卵巢癌细胞株CXCR4基因表达及侵袭力。在RNA依赖性RNA聚合酶作用下，siRNA大量扩增，转运出细胞，并以其高效性、可遗传性、高特异性特点产生强强烈的干扰效应，抑制CXCR4基因[5]。

综上所述，RNA干扰CXCR4基因后，有效抑制卵巢细胞增增，减缓肿瘤生长，说明卵巢癌基因治疗的靶基因可能为CXCR4基因，为卵巢癌治疗提供新的方法，值得在以后临床研究中试验、推广。

[1]汤容,于国新,袁瑞,等.shRNA抑制人卵巢癌SW626细胞CXCR4基因的研究[J].生物技术通报,2010,26(4):165-168.

[2]刘瑜,袁瑞.CXCR4-siRNA重组腺病毒载体沉默人卵巢癌细胞株CXCR4基因表达的研究[J].重庆医科大学学报,2011,36(10):1168-1171.

[3]王红英,王景苗,靳卫国,等.siRNA靶向沉默CXCR4基因对人卵巢癌SW626细胞增殖、迁移及侵袭的影响[J].现代妇产科进展,2012,21(11):848-856.

[4]燕霞,燕锋,张静,等.siRNA沉默卵巢癌CXCR4基因对卵巢癌腹腔转移的影响[J].河北医药,2013,(24):3701-3703.

[5]汤容.siRNA抑制人卵巢癌SW626细胞CXCR4基因的研究[D].重庆:重庆医科大学,2010.