脂氧素A4对颅脑损伤伴失血性休克大鼠脑组织的保护作用

李 萍，许会彬，王化芬，崔 庆，吴玲玲

颅脑损伤伴失血性休克（TBIS）是临床上常见的危重症之一，因其病情凶险、并发症多见，救治难度大，而过度炎症反应是引起机体二次损伤的重要原因［1，2］。因此，如何减轻炎症反应，抑制过度炎症反应，对改善患者预后具有重要的意义。脂氧素A4（LXA4）是一种内源性脂类介质，被称为是炎症反应的“刹车信号”，其通过抑制中性粒细胞的趋化、黏附和炎性介质的释放而发挥广泛的抗炎作用［3－6］。

本研究对TBIS大鼠进行术前LXA4干预，对大鼠脑组织S100β、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及脑含水量进行检测，旨在探讨LXA4对TBIS大鼠脑损伤的保护作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物分组 清洁级雄性Wistar大鼠45只（购自山东大学医学院实验动物中心），体重220～250 g。随机分成假手术组 （C组）、TBIS模型组和LXA4治疗组，每组15只。

LXA4治疗组于术前6 h及2 h尾静脉注射LXA4（脂氧素 A4， Lipoxin A4methyl ester， 美国Cayman公司生产，溶于10%乙醇溶液），给予量为0.1 mg/kg体重。C组及TBIS组尾静脉注射等量生理盐水及10%乙醇溶液。

1.2 动物模型制备 大鼠实验前禁食12 h，不禁水。采用自由落体复制颅脑外伤合并休克模型［1］。假手术组仅开颅窗后骨蜡封闭骨窗，不予于打击及放血。

1.3 标本留取及指标测定

1.3.1 S100β、 丙二醛 （MDA） 及超氧化物歧化酶（SOD）测定 取新鲜脑组织，用生理盐水制备10%组织匀浆液，离心后留取上清液，－80℃冰箱储存备测。S100β试剂盒购自长沙佳和生物科技有限责任公司，丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒购自南京建成生物工程研究所。测定步骤完全按照试剂盒说明书进行。

1.3.2 脑含水量测定 采用干湿重法。大鼠处死后断头，取脑组织，用天平称湿重（W），再置于80℃电热恒温干燥箱中烘烤48 h至恒重称干重（D）。脑含水量（%）＝（W－D）/W×100%。

1.4 统计学处理 采用 SPSS 12.0统计软件包进行分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 脑组织 S100β、MDA及 SOD水平变化 TBIS组与LXA4治疗组脑组织匀浆S100β及MDA的水平均高于 C 组 （P＜0.01），SOD 活性低于 C 组 （P＜0.01）。 与 TBIS 组比较，LXA4治疗组 S100β 及 MDA的水平均降低（P＜0.01），SOD 活性升高（P＜0.01）。见表1。

表1 脑组织 S100β、MDA 及 SOD 水平变化（±s，n＝15）

表1 脑组织 S100β、MDA 及 SOD 水平变化（±s，n＝15）

注：与 C 组比较，＊P＜0.01；与 TBIS 组比较，＃P＜0.01

组别 S100β（ng/L） MDA（nmol/mg pro） SOD（U/mg pro）C 组 141.5±22.3 3.27±0.65 29.38±6.71 TBIS 组 262.1±28.9＊ 6.61±1.53＊ 14.55±4.29＊LXA4治疗组 192.8±26.7＊＃ 4.22±0.81＊＃ 21.38±4.85＊＃

2.2 脑含水量比较 同C组比较，TBIS组与LXA4治疗组脑组织均有明显水肿，脑含水量明显增加（P＜0.01），LXA4与 TBIS 组比较，脑含水量明显降低（P＜0.05）。 见表 2。

表2 脑含水量比较（±s，n＝15）

表2 脑含水量比较（±s，n＝15）

注：与 C 组比较，＊P＜0.01；与 TBIS 组比较，＃P＜0.01

组别 脑含水量（%）C 组 58.91±9.04 TBIS 组 82.46±7.59＊LXA4治疗组 69.02±8.21＊＃

3 讨 论

对颅脑损伤合并失血性休克（TBIS）来说，过度炎症反应引起机体的二次损伤是加剧病情恶化的重要因素之一。因此抑制炎症因子的释放，防止过度炎症反应，缓解TBIS的病程进展是改善TBIS预后的重要措施之一。

脂氧素（LX）是一类花生四烯酸酯加氧酶代谢产物，属于二十烷家族中重要成员之一。LXA4是体内重要的内源性促炎症消退介质，其在促炎介质前列素E2和白三烯之后产生。一方面，LXA4通过抑制白细胞游走、拮抗白三烯、抑制黏附分子及趋化因子受体表达，从而抑制机体炎症反应及病情的进一步恶化。另一方面，LXA4通过促进巨噬细胞的吞噬作用，及时清除凋亡的中性粒细胞，促进炎症消退［3－6］。

S100β蛋白是神经系统的特异性蛋白，主要存在于中枢神经系统的星形细胞和少突神经胶质细胞。研究表明S100β在颅脑外伤、脑血管疾病及继发性脑损伤等疾病中均有较高表达，可反映血脑屏障的破坏情况，被称为脑的“C 反应蛋白”［7，8］。 本研究显示，TBIS组与LXA4治疗组脑组织匀浆S100β水平均高于C组。与TBIS组比较，LXA4治疗组S100β水平降低。本研究脑组织含水量结果显示，同C组比较，TBIS组与LXA4治疗组脑组织均有明显水肿，脑含水量明显增加，LXA与TBIS组比较，脑含水量明显降低。表明应用LXA4对TBIS干预能够减轻模型大鼠的脑损伤。

创伤后机体会发生氧应激损伤，由此引起多种炎症介质的释放，会进一步加剧休克的进程。丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）能较好反映机体内氧自由基水平和机体对氧自由基的清除能力。本研究结果显示，TBIS组与LXA4治疗组脑组织匀浆MDA的水平均高于C组，SOD活性均低于C组。说明在TBIS早期，脑组织内产生了大量氧自由基。而SOD水平的降低使得机体对氧自由基的清除能力下降，并可进一步造成机体的氧化与抗氧化平衡体系被打破，导致脑组织中氧自由基的蓄积，加剧脑组织的损伤。与TBIS组比较LXA4治疗组脑组织匀浆MDA活性降低，SOD活性升高。说明LXA4干预，能明显降低脑组织氧自由基的产生，有效增强机体的抗氧化水平。

总之，LXA4干预可有效降低TBIS大鼠脑组织的脂质过氧化水平，增强清除氧自由基的能力，减轻炎症反应，对TBIS所致脑组织损伤具有保护作用。

［1］许会彬，王 青，王化芬，等.大鼠颅脑损伤伴休克所致小肠过氧化损伤及ω－3多不饱和脂肪酸的保护作用［J］.中华实验外科杂志，2011，28（9）：1584.

［2］孙荣青，朱丽超，周新阁，等.重组人促红细胞生成素对颅脑损伤患者血清脑红蛋白、血红蛋白含量的影响［J］.郑州大学学报，2014，7（2）：257－260.

［3］吕万治，吕重庆，余夙慧，等.脂氧素A4对TNF－α诱导的内皮细胞炎症反应的影响［J］.温州医学院学报，2013，43（1）：1－4.

［4］赵琦峰，邵 兰，杜 杰，等.脂氧素A4不同给药时机对大鼠心肌缺血再灌注时缝隙连接蛋白43表达的影响［J］.中华麻醉学杂志，2013，33（10）：1266－1271.

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［8］赵朝华，吴树强，杨 杰，等.天麻素预处理对短暂性脑缺血大鼠脑组织 S100β 表达的影响［J］.中国老年学杂志，2014，20（8）：2156－2158.