补体C 5 a抑制剂对大鼠油酸型急性肺损伤治疗的实验研究

刘杨　薛华

补体C 5 a抑制剂对大鼠油酸型急性肺损伤治疗的实验研究

刘杨薛华

目的 研究补体C 5 a抑制剂在肺损伤治疗方面的作用。方法将Wistar大鼠分为对照组、致伤组和治疗组。治疗组经股静脉注射油酸后10 min，雾化吸入补体C 5 a抑制剂后对主要的观察指标进行分析。结果 对照组的支气管肺泡灌洗液均无炎症、水肿发生；其他三组均有不同程度炎症、水肿，其中致伤组最为严重。致伤组、治疗组肺系数数值对比，致伤组最大，治疗组次之。结论 补体C 5 a抑制剂可以保护由油酸导致的急性肺损伤。

补体C 5 a抑制剂；急性肺损伤；支气管肺泡灌洗液

急性肺损伤（AIL）临床上表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫，其发展至严重阶段被称为急性呼吸窘迫综合征（ARDS）[1]。本研究采取大鼠股静脉注射油酸，复制急性肺损伤动物模型，实验中以体征表现和病理形态为主要观察指标，结合统计学分析，探索补体C 5抑制剂对大鼠油酸型AIL的治疗作用，为临床各种病因导致急性肺损伤的防治开拓新的方向[2]。

1　材料和方法

1.1材料

健康的清洁级wistar大鼠48只，体重240 g左右，雌雄不限，由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。

1.2实验方法

将实验动物48只随机分为对照组、致伤组、治疗组，每组16只，各组Wistar大鼠于建模前禁食12 h，自由饮水。对照组用等量生理盐水代替油酸注射入动物体内。致伤组从股静脉注射油酸0.06 ml/kg到大鼠体内，复制ALI模型。治疗组：股静脉注射油酸0.06 ml/kg，10 min后，实验动物雾化吸入补体C 5 a抑制剂。10 min后，对照组不操作，其他两组分别雾化吸入2.0 ml/kg生理盐水、油酸0.06 ml/kg注入、雾化吸入补体C 5 a抑制剂2.0 mg/ kg，观察动物一般状态，呼吸频率和幅度。2 h后分别提取每组大鼠的支气管肺泡灌洗液，计数支气管肺泡灌洗液中的炎症细胞数量。深度麻醉动物，断头处死，剖胸取肺脏，滤纸吸干肺脏表面，称肺湿重，记录数值；再切取左肺下叶组织一块，用4%多聚甲醛固定，以备光镜观察。

1.3统计学方法

2　结果

2.1各组大鼠一般情况

对照组实验前后无紫绀出现，呼吸频率无异常变化。致伤组大鼠股静脉注射油酸后均出现躁动，呼吸频率加快、口唇紫绀。实验结束时致伤组大鼠上述症状无改善。治疗组相对致伤组情况有所改善。

2.2各组肺系数的变化

实验结束大鼠肺系数：对照组平均为（0.005±0.002），致伤组平均为（0.010±0.005），治疗组平均为（0.009± 0.004）。致伤组相对于对照组增高，P＜0.05，差异具有统计学意义；治疗组相对于致伤组降低，P＜0.05，差异具有统计学意义。

2.3组织学改变

对照组双肺表面无出血点，无明显水肿，肺组织HE染色镜下肺泡结构清晰，无渗出。致伤组大鼠肺体积增大，肺组织受损，肺泡和肺间质水肿，水肿液中可见红细胞，弥漫性炎性细胞浸润，肺脏切面有淡红色泡沫状液体溢出[3]。治疗组大鼠肺组织充血、水肿较致伤组大鼠轻，表面散在有点状暗红色出血点，组织切片显示肺泡壁轻度增厚，肺充血及肺间质水肿减轻，部分肺泡有少量渗出液。治疗组炎细胞浸润比致伤组少。

2.4肺泡灌洗液内炎细胞计数

大鼠注射油酸后，支气管肺泡灌洗液内的各种炎症细胞数量均上升，P＜0.05，差异具有统计学意义。雾化吸入补体C 5 a抑制剂后，治疗组大鼠支气管肺泡灌洗液中的各种炎症细胞数量均下降，P＜0.05，差异具有统计学意义。见表1。

表1 大鼠支气管肺泡灌洗液内的各种炎症细胞数量

3　讨论

本实验采用静脉注射油酸造成大鼠急性肺损伤模型，来探讨补体C 5 a抑制剂急性肺损伤的防治作用及可行性机制[4]。

3.1补体C 5 a在急性炎症中的作用

使用补体抑制剂，阻断补体通过3种途径激活就有可能促进恢复机体全身和（或）器官局部促炎抗炎机制平衡[5]。C 5 a抑制剂阻止C 5 a分裂为引起炎症的补体物质可以预防C 5 a导致的炎症反应对机体的损伤，同时又阻止C 5 a分裂后同样具有趋化作用的膜攻击复合物的产生，减轻对组织的损害[6]。

3.2各组实验后标本光学显微镜下炎性细胞浸润情况及意义

光镜检查：致伤组可见肺组织受损，肺泡完整性遭到破坏，表现为间隔增厚、断裂，弥漫性炎性细胞浸润肺组织，肺泡和肺间质水肿，肺泡内可见大量红细胞。治疗组可见双肺出血，间质、肺泡水肿，并有以中性粒细胞为主的炎细胞浸润，部分肺泡不张，但病理学改变较致伤组程度轻（Fig.6～11）；提示补体C 5 a抗体对肺损伤有治疗效果。

3.3补体C 5 a抑制剂在急性肺损伤的作用

相关试验结果表明，应用补体C 5 a抑制剂后，大鼠的支气管肺泡灌洗液中的炎症细胞总数、巨噬细胞数、中性粒细胞数和淋巴细胞数均有改善[7]。表明补体C 5 a抑制剂可以保护油酸造成的急性肺损伤[8]。本次研究结果显示，当给实验动物注射油酸后，在注射油酸前后，分别雾化吸入补体C 5 a抑制剂，体征表现改善。此外，光学显微镜下，治疗组细胞虽然仍然有炎性细胞浸润，但数量较致伤组有减少，P＜0.05，差异具有统计学意义。并且间质、肺泡水肿程度较致伤组轻，提示补体C 5 a抑制剂有控制肺组织炎症发展的作用。对病理标本进行检查，也可发现相对于致伤组而言，治疗组肺叶梗死灶减少。而肺系数对比，治疗组较致伤组降低，P＜0.05，差异具有统计学意义。该结果也提示补体C 5 a抑制剂有防治肺水肿的作用。

综上所述，补体C 5 a抑制剂可改善急性肺损伤促炎抗炎失衡，对急性肺损伤有良好的保护作用，为急性肺损伤的临床防治工作提供了有效的理论依据和新的治疗靶向。

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Experimental Study of C 5 a Alexin Inhibitor on Treatment Rat With Acute Lung Injury

LIU Yang XUE Hua, Elderly Respiratory Medicine, Heilongjiang Provincial Hospital, Harbin 150036, China

Objective To investigate the role of complement C 5 a inhibitors in the treatment of lung injury. Methods Wistar rats were divided into the control group, the injury group and the treatment group. The treatment group intravenous injection oleinic acid by femoral vein 10 minutes, analyzed the mainly observation index after atomization inhalation complement C 5 a inhibitors. Results The control group had no bronchoalveolar lavage fluid inflammation and edema, the other three groups have different levels of inflammation and edema, particularly in the injury group of the most serious. Compared the lung coefficient values of injury treatment group and the treatment group, the injury group largest, followed by treatment group. Conclusion Complement C 5 a inhibitors can protect lung injury caused by the oleic acid.

Complement C 5 a inhibitor, Acute lung injury, Bronchoalveolar lavage fluid

R3

A

1674-9308（2015）31-0031-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.31.021

150036哈尔滨，黑龙江省医院老年呼吸内科

所得数据应用SPSS20.0软件进行统计，计量资料用（均数±标准差）表示，采用t检验，P＜0.05，差异具有统计学意义。