超高效液相色谱UPLC在药物分析上的应用

张亚洲　于丽颖

摘 要：超高效液相色谱（UPLC）近年来发展迅速，由于其灵敏度高、高分离度以及耗时少等优点而被广泛应用。本文对高效液相色谱的工作原理及其在药物分析上的应用进行综述。

关键词：超高效液相色谱；药物分析；应用

DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2015.23.031

0 引言

目前，液相色谱已经成为用于分析的主要方法之一。高效液相色谱在生物化学、食品科学、环境检测、药物分析等领域得到了广泛的应用。其主要原因是HPLC具有分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、适用范围广、样品处理简单等特点。2004年3月，由Waters公司率先推出了第一台商品化的超高效液相色谱系统（Ultra Performance liquid chromatography，UPLC）。它不但继承了传统HPLC的所有优点，而且在速度和分离程度以及灵敏度这些方面都有了显著的提高。因此，UPLC在药物分析等领域获得了极大的应用。本文对UPLC的主要原理以及它在药物分析领域的应用做了阐述。

1 UPLC的原理

UPLC和HPLC都以范德米特（Van Deemeter）方程为理论基础。HETP=AdP+B/v+CdP2V，其中HETP表示理论塔板高度；A表示涡流扩散系数；dP表示填充料粒径；B表示分子径向扩散系数；C表示传质因子；v表示流动相线速度。根据这个方程可以看出颗粒度越小柱效越高；颗粒度不同，最适流速也不相同；更小的颗粒度使最高柱效点向更高流速（线速度）方向移动，而且有更宽的线速度范围。因此，减小颗粒度不但能够提高柱效，而且还能提高分析速度。

UPLC与HPLC相比解决了色谱填料耐压和小颗粒填料的填装问题。采取小于2微米的色谱填料，大大的提高了色谱柱的性能，并且极大的缩短了开发方法所需的时间，使其与HPLC色普柱有了质的飞跃。超高效液相色谱与传统的高效液相色谱相比具有很多有点。

（1）分析速度快，Nguyen等[2]分别用1.7um的色谱柱的UPLC和5um的色谱柱的普通高效液相色谱法分析尼泊金酯累同系物，在分离度保持不变的情况下分析速度提高了8倍。

（2）分离度好，Jhnson在利用UPLCoa-TOF/MS研究人尿液中对乙酰氨基酚代谢物时，发现其平均峰底宽度缩短了1.5s，并且分离代谢产物的数量也有所增加。

（3）检测灵敏度高，Yu等分析血浆中混合药物的灵敏度增加了5-10倍。

2 UPLC在中药分析上的应用

中药中含有多种化学成分，这些成分的化学结构比较复杂。采用超高效液相色谱法对中药中的化学成分进行分析检测，可以快速、灵敏的检测出多种化学成分，所以，UPLC在中药化学成分分析和质量控制中得到了良好的应用并且有很好的发展前景。

2.1 超高效液相色谱法测定黄酮类化合物

黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物，是植物体内重要的物质，分布广泛，具有抗氧化、抗癌、免疫调节等功能。陈帅等在对陈皮中三种黄酮成分含量测定时，采用Waters Acquity UPLC系统，Water BEH C18色谱柱；以乙腈-水为流动相，0.5ml.min-1的流量，检测波长为326nm。结果线性范围内的橙皮苷、川陈皮素及橘红素的峰面积与相对应质量浓度呈良好的线性关系，采用此方法快速、简便、准确、可用于陈皮药材质量的监控。孙冬梅等采用UPLC-Q-TOF-MS法对银杏磷脂软胶囊中黄酮类化合物进行筛选，鉴定出12种黄酮类化合物，该方法可以作为测定银杏磷脂胶囊总黄酮的手段。

2.2 超高效液相色谱在柴胡中的应用

柴胡是传统的重要，具有解表退热、升举阳气、保肝、抗病毒、调节免疫等功效。其化学成分复杂，含有皂苷、有机酸、黄酮、挥发油、生物碱、香豆素以及多炔类等成分。方媛等人采用UPLC测定不同产地和不同基原的柴胡根种多炔类化合物的含量，结果发现了4种多炔类化合物，分别鉴定为 （2Z，8Z，10E）-2，8，10-十五烷三烯-4，6-二炔-1-醇、（2Z，8E，10E）-2，8，10-十五烷三烯-4，6-二炔-1-醇、（2Z，8Z，10E）-2，8，10-十七烷三烯-4，6-二炔-1-醇和柴胡炔醇。蔡华等人采用UPLC-MS联用技术分离鉴定了柴胡中化合物的成分，并建立了柴胡的化学成分特征指纹图谱，这为柴胡的品质鉴定提供了理论基础。

2.3 超高效液相色谱在其他药物中的应用

李月婷等人，利用高效液相色谱发同时测定了复方荭草冻干粉针中没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、异荭草素、荭草素、槲皮素-3-O-（2”-O-α-鼠李糖）-β-葡萄糖醛酸、牡荆素、异牡荆素、木犀草苷、野黄芩苷和槲皮苷11种指标成分含量的方法。应用该方法回收效率高、准确、重复性好的特点。安军永应用UPLC-MS建立了参芪益气固体片中6中有效成分。采用UPLC-MS方法与传统的方法想比较，可以高分离度、降低药品生产成本。高攀峰等采用UPLC建立并测定甘肃产蒙古黄芪中药材中黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷的含量的方法。采用该方法具有简便可靠的优点。

3 展望

UPLC的各项优点决定了其在诸多行业的广泛应用，尤其在应用于药物分离及分析上效果更加显著，如在中药材质量分析中的应用、中药制剂药物分析中的应用及在化学制剂药物分析的应用。除了应用与常规的检测中外，UPLC还可与质谱联用，将两者的优点有机的结合到一起，快速而高效地完成较复杂成分的分离及鉴定。未来，相信U PLC会成为医学领域发展的助推剂。

参考文献：

[1]陈帅，罗森，袁崇均等.超高效液相色谱法快速测定陈皮中三中黄酮类成分含量[J].四川中医，2015，33（07）：104-106.

[2]孙冬梅，董玉娟，胥爱丽等.UPLC-Q-TOF-MS法快速筛查银杏磷脂软胶囊种12种黄酮类化合物[J].中成药，2015，37（02）：320-324.

[3]吕晓慧，孙宗喜，苏瑞强等.柴胡及其活性药理研究进展[J].中国中医药信息杂志，2012，19（12）：105-107.endprint