婴幼儿眼分泌物肺炎链球菌的分离情况及药敏结果分析

林 琳

婴幼儿眼分泌物肺炎链球菌的分离情况及药敏结果分析

林 琳①

目的：了解婴幼儿眼分泌物肺炎链球菌的分离情况及对常用抗菌药物的敏感性，为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法：对2008年1月-2014年1月本院眼科门诊就诊患儿的眼分泌物标本，经细菌学培养检出肺炎链球菌的药敏试验结果进行回顾性分析。结果：838例患结膜炎的婴幼儿眼分泌物中，分离肺炎链球菌45株，阳性率为5.4％。氧氟沙星和利福平敏感率最高分别为77.8％和75.6％，红霉素耐药率最高为66.7％。结论：肺炎链球菌是眼部感染的主要致病菌之一，根据药敏试验结果，喹诺酮类滴眼液可作为治疗肺炎链球菌眼部感染的首选药物。

眼分泌物； 肺炎链球菌； 药敏试验

肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae，S.p）属链球菌属，为革兰阳性的兼性厌氧球菌，在正常人的口腔及鼻咽部经常存在，一般不致病，只形成带菌状态，只有在免疫力下降时才致病，尤其在呼吸道病毒感染后或婴幼儿，年老体弱者易发生肺部感染。常寄生于儿童的上呼吸道，是儿童社区获得性感染的首位致病菌[1-2]，肺炎链球菌是严重威胁儿童健康的常见病原菌之一。肺炎链球菌引起的感染性疾病主要有脑膜炎、肺炎、败血症、中耳炎等[3-5]，而肺炎链球菌引起眼结膜感染的报道很少，本文从838例婴幼儿眼结膜分泌物中分离出45例肺炎链球菌，总结如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 标本均采自2008-2014年来本院眼科就诊的10 d～1岁眼结膜感染患儿的眼部分泌物。

1.2 仪器及试剂 VITEK2 COMPACT全自动细菌鉴定仪鉴定（法国生物梅里埃公司）；M-H琼脂购自杭州天和微生物试剂有限公司；青霉素E-test条为瑞典AB-biodisk公司产品；OPTOCHIN纸片、庆大霉素（10 μg/片）、环丙沙星（5 μg/片）、氨苄西林（10 μg/片）、红霉素（15 μg/片）、氧氟沙星（5 μg/片）、利福平（5 μg/片）、妥布霉素（10 μg/片）、苯唑西林（1 μg/片）、加替沙星（10 μg/片）、氯霉素（30 μg/片），购于北京天坛药物生物技术开发公司。

1.3 标本采集及处理 用无菌生理盐水清洁眼部皮肤，然后以无菌纱布或无菌棉球拭干，再用无菌棉拭子沾取或刮取眼缘结膜囊和角膜病灶分泌物，立即划线四区接种于血平板、巧克力平板和营养肉汤，置35 ℃培养24 h（巧克力平板置5％ CO2培养），进行病原菌培养和药敏试验分析。

1.4 细菌鉴定 肺炎链球菌菌体呈矛头状，多成双排列，宽端相对，尖端相背，有较厚荚膜，革兰阳性球菌。培养特性和生化反应：营养要求及在血平板上菌落特征基本同甲型链球菌，培养时间稍久菌落中央下陷呈脐窝状。在血清肉汤中培养稍久亦因细菌自溶而使混浊的培养液渐变澄清。自溶酶可被胆汁或胆盐等物质活化，加速细菌溶解，故可用胆汁溶菌试验与草绿色链球菌相区别；肺炎链球菌能分解菊糖这点也可作为与草绿色链球菌相区别的依据。奥普托欣（Optochin）试验：用以与其他草绿色链球菌相鉴别，用接种环将单个待鉴定菌落均匀涂于血平板上，用含量为5 μg的optochin纸片贴于接种区中央，35 ℃需氧培养过夜，抑菌圈＞18 mm的为阳性，肺炎链球菌为阳性。所有操作依照《全国检验操作规程》（第3版）[6]，培养48 h无菌生长或只有少量稀疏的正常寄生菌落生长者报告阴性。

1.5 药敏试验 采用K-B纸片法，选取含5％绵羊血的琼脂平板上18～20 h培养物，用M-H 肉汤或0.9％ NaCl溶液直接调制成相当于0.5号麦氏浊度菌悬液，制备好的接种菌液必须在15 min内使用。用灭菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上旋转挤压几次，去掉过多的菌液。用拭子在含5％绵羊血的MH平板琼脂表面均匀涂抹接种3次，每次将平板旋转60°，最后沿平皿周边绕两圈，保证均匀涂布满整个培养基表面。孵育条件为5％ CO2，（35±2）℃，孵育20～24 h。对苯唑西林的抑菌环直径≥20 mm，为肺炎链球菌对青霉素敏感，抑菌环直径≤19 mm的肺炎链球菌不能报告青霉素耐药，应进行确认试验，本文采用青霉素的E-test试验。质控菌株采用肺炎链球菌ATCC49619，结果判定按2014版CLSI标准进行[7]。

1.6 E-test试验 即抗生素浓度梯度法，0.5号麦氏浊度菌悬液制备和5％绵羊血的MH平板琼脂表面涂抹菌悬液同K-B纸片扩散法，取青霉素的E-test试验药敏片，正面朝上贴到含5％绵羊血的MH平皿培养基表面，为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。5％ CO2，（35±2）℃，孵育20～24 h。当青霉素的MIC值≤2 μg/mL时，报告青霉素敏感，青霉素的MIC值为4 μg/mL时，报告青霉素中介，青霉素的MIC值为≥8 μg/mL时，报告青霉素敏感。同时采用肺炎链球菌ATCC49619进行质控。

2 结果

838例患结膜炎的婴幼儿眼分泌物中，分离肺炎链球菌45株，阳性率为5.4％。对45株肺炎链球菌进行了11种抗菌药物（青霉素、氨苄西林、庆大霉素、妥布霉素、红霉素、利福平、氯霉素、加替沙星、环丙沙星和氧氟沙星）的药敏试验，其中氧氟沙星、利福平、环丙沙星和氯霉素的敏感率分别为77.8％、75.6％、73.3％和71.1％以上，而红霉素敏感率只有24.4％，庆大霉素的敏感率也只有28.9％。详细情况见表1。

表1 45株肺炎链球菌的药敏结果

3 讨论

正常人的眼部是无菌的[8]。眼睛有分泌物是眼睛轻度感染性疾病，可能由于分娩过程中接触阴道含有细菌的分泌物，接生操作者污染的手或者出生后所接触的用品不清洁，引起婴儿的结膜发炎，使得婴儿眼屎过多、黏稠。也可能由于有的孩子鼻泪管被上皮细胞残渣堵塞或鼻泪管黏膜闭塞，使得泪液和泪道内的分泌物积留在泪囊而引起泪囊炎，这样的患儿在泪囊处有一囊性肿物，表面略发青，如果轻轻压迫眼睛内侧的泪囊部，可有黏液性或黏液性分泌物溢出，肿物消失。肺炎链球菌感染可致多种疾病，包括肺炎链球菌肺炎、败血症、脓胸、白血病及化脓性脑膜炎，甚至可影响患者的神经系统的发育。肺炎链球菌在成人眼部感染在是仅次于葡萄球菌的主要革兰阳性球菌[9]，也是婴幼儿感染的主要致病菌之一，可以引起中耳炎，甚至更严重的侵袭性感染[10]，但婴儿眼分泌物感染肺炎链球菌的报道不多见，本文从838例患眼结膜炎的婴儿眼分泌物中分离出45株肺炎链球菌，可见肺炎链球菌可以引起婴儿的眼部感染，在临床诊治中不容忽视。

随着抗生素频繁的不合理使用，肺炎链球菌的耐药性也有所改变，其耐药性的变迁已经成为抗感染治疗面临的一大难题。近年来，肺炎链球菌对青霉素的耐药情况日趋严重，给临床治疗带来困难，其耐药机制主要是青霉素结合蛋白（PBP）基因的改变，从而改变细胞壁上高分子质量青霉素结合蛋白结构，降低了对内酰胺酶的亲和力而产生耐药[11]。目前肺炎链球菌的耐药性已经成为全球化的问题，耐药率呈逐年增高的趋势[12]。

眼部肺炎链球菌感染，可以发生在眼睑、眼表和眼内等不同部位，引起睑缘炎、结膜炎、角膜炎和眼内炎等疾病。睑缘炎、结膜炎等会造成严重不适。角膜炎可以导致角膜浑浊，产生严重的视力下降。眼内炎可以破坏眼球，如不及时控制，会导致失明。治疗眼部感染的目标是控制感染，保护眼组织及其功能。值得注意的是从眼部感染患儿分离的肺炎链球菌的青霉素不敏感株（PNSP）为26株，占57.8％，低于金国强等[13-14]的报道，可能与来自不同感染部位及不同地区肺炎的菌株的耐药性存在差异有关。对大环内酯类药物的耐药率达到66.7％，低于李玲萍等[15]的报道，推测本医院大环内酯类药物使用的相对合理，未导致肺炎链球菌耐药性升高为主要原因，可见红霉素在药敏试验结果为敏感的情况下可以用于肺炎链球菌引起的婴幼儿的眼部感染的治疗。对庆大霉素的耐药率也达到60％。从实验结果可以看出氯霉素的敏感率是71.1％，而且氯霉素滴眼液具有广谱抗菌活性，是治疗眼表浅层感染的可供选择的药物，滴用本品后耐受性良好。但是滴用氯霉素滴眼液后存在不易发现的再生障碍性贫血的风险，因此在临床中应当慎用。其他具有广谱抗菌活性的抗菌药包括氟喹诺酮类药物，如诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星，氨基糖苷类药物，如妥布霉素、庆大霉素、新霉素等对肺炎链球菌引起的感染治疗有效。氟喹诺酮类药对婴幼儿的安全性尚未确定，可能会对软骨发育有影响，因此对18岁以下儿童不推荐使用。

综上所述，目前婴幼儿肺炎链球菌引起的眼部感染不容忽视。随着不同地区肺炎链球菌耐药性的不断改变，有效抗菌药物的合理应用对于肺炎链球菌的感染治疗至关重要。同时伴随多重耐药株的出现，如何选择正确的抗菌药物这一问题亟待解决。因此，加强对不同地区儿童肺炎链球菌耐药性的监测，减少该地区抗菌药物的不合理使用，降低肺炎链球菌所致医院感染的比例，对儿童肺炎链球菌感染预后甚至临床诊疗都具有重要的意义[15]。

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Analysis of the Results of Separation and Antimicrobial Susceptibility Tests of Infant Eye Secretions of Streptococcus Pneumoniae

LIN Lin.//Medical Innovation of China，2015，12（09）：106-108

Objective：To understand the separation condition of infant eye secretions of streptococcus pneumoniae and their antimicrobial susceptibility tests， and provide evidence for clinical rational use of antimicrobial agents. Method： Children eye secretion specimens were cultured and antimicrobial susceptibility test results of detection of streptococcus pneumoniae were retrospectively analyzed from January 2008 to January 2014 in our hospital outpatient department of ophthalmology. Result： In the 838 secretion specimens of child patients of conjunctivitis， 45 pathogens were carried out streptococcus pneumoniae， with a positive rate of 5.4％. The sensitivity rates of Ofloxacin and Rifampin were higher， 77.8％ and 75.6％ respectively， while the drug resistance rate of Erythromycin was the highest，66.7％. Conclusion：Streptococcus pneumoniae is one of the main pathogenic bacteria of ocular infections， according to the result of drug sensitivity test， fluoroquinolones eye drops can be used as the drug of choice for the treatment of pneumococcalinfections of the eye.

Eye secretions； Streptococcus pneumoniae； Antimicrobial susceptibility test

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.09.035

2014-09-10） （本文编辑：蔡元元）

①沈阳市儿童医院 辽宁 沈阳 110032

林琳

First-author’s address： The Children’s Hospital of Shenyang，Shenyang 110032，China