血清miRNA-186，miRNA-30c在肝细胞性癌中诊断价值的研究*

刘 冲，唐 浩，邓 霖，张 静，邓建平(黄石市爱康医院有限责任公司检验科，湖北黄石 435000)

肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界第五大常见肿瘤，在肿瘤相关死亡中排第三位，我国肝癌患者占世界范围内罹患肝癌患者总数的一半以上[1]，目前诊断肝癌主要是依靠影像学证据的基础上结合临床表现和实验室检查结果来诊断肝癌，以血清甲胎蛋白(AFP)和异常凝血酶原(DCP)为主的实验室诊断肝癌的指标存在着敏感度和特异度低的特点[2]。微核糖核酸(microRNA, miRNA)是一种内源性的非编码单链小RNA，在进化上高度保守，可以通过抑制或降解靶基因mRNA从而达到抑制靶基因的作用[3]。研究表明多种miRNA在肝癌的发生发展过程中起着重要的作用，对这类与肝癌相关的miRAN 检测在早期肝癌的诊断中有着重要的诊断学意义[4]。本研究选取在肝癌患者血清中表达的miRNA-186和miRNA-30c作为研究对象，对其表达进行检测，并与血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)的表达水平进行比较分析，以探讨它们在HCC诊断中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集黄石市爱康医院外科及肿瘤科2013年6月～2015 年2月的HCC住院患者血清55例，其中男性38例，女性17例，年龄36～77岁，平均年龄56.4±8.1岁；高分化10例，中分化20例，低分化25例；肿瘤直径≥5 cm者30例，<5 cm者25例。所有病例术后病理检查证实为HCC，诊断标准符合中华医学会2012版《肝癌规范化诊治指南》。收集慢性乙型肝炎(chronic hepatitisB，CHB)患者血清55例，均来自黄石市爱康医院感染科。所有患者的临床诊断符合中华医学会2010版《慢性乙型肝炎防治指南》标准。所有患者均签署知情同意书。另选55例健康人血清作为健康对照(normal control，NC)，且无重要器官疾病史，谷氨酸氨基转移酶均正常。本实验过程严格遵守赫尔辛基宣言的伦理要求。

1.2 试剂和仪器 血浆样本总RNA提取试剂盒(BLOODmisi试剂盒，Aidlab，中国)；Trizol LS(Invitrogen，美国)；反转录试剂盒(miRcute miRNA cDNA提取分离试剂盒，TIANGEN，中国)；定量PCR试剂盒(miRcute miRNA 荧光定量检测试剂盒，TIANGEN，中国)；Rotor-Gene Q 实时荧光定量PCR仪(QIAGEN，德国)；高速冷冻离心机Z300K(HERMLE，德国)。

1.3 方法 用Trizol法提取血液样本按一定比例加入Trizol提取总mRNA，按照miRNeasy mini kit试剂盒说明书步骤完成提取，获得的RNA溶解于200 μl RNase-free ddH2O中备用。……