陕西省榆林地区和商洛地区HPV感染及亚型分布对比研究*

原 荣，李 军，王一羽，南 星，燕林青，慕玉东(陕西省肿瘤医院，西安 710061)

宫颈癌是比较常见的妇女恶性肿瘤，高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)持续性感染与宫颈癌前病变被认为是主要致病因素[1]。目前已发现的HPV有100多种亚型，其中40多种与生殖道疾病有关[2]。本文对1 646例分别在商洛及榆林地区医院妇科就诊妇女HPV-DNA的检测结果进行了对比分析，以了解HPV感染的地域性分布并为宫颈癌防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2013年1月～2014年10月在榆林市第二人民医院妇科就诊的709例妇女和在商洛地区中心医院妇科就诊的937例妇女，采集她们的宫颈脱落细胞样本。

1.2 仪器与试剂 美国ABI公司7500型荧光定量PCR仪；上海力康科学技术有限公司HFsafe-1200TE型生物安全柜；青岛海尔有限医用低温科技有限公司DW-86L386型超低温冰箱。广州达安生物技术有限公司人乳头瘤病毒分型检测试剂盒(荧光定量PCR法)，可以一次性检测高危型别18种和低危型别5种。所需试剂四基联苯胺、柠檬酸钠、十二烷基硫酸钠等均为国产分析纯。显色液用时按所需比例加超纯水新鲜配制。

1.3 方法

1.3.1 宫颈脱落细胞采集：利用专用宫颈刷置于宫颈口顺时针旋转5周，慢慢取出放入专用样本搜集管内，拧紧管盖，保持样本管直立，做好样本标识，实验室保存在-20℃冰箱待测。

1.3.2 DNA分离提取：取有宫颈细胞的保存液离心，弃上清，加细胞裂解液提取DNA，整个操作过程严格按照DNA提取试剂盒操作步骤完成。

1.3.3 PCR扩增PCR反应条件：50℃15 min，95℃10 min，35次循环(94℃30 s，42℃90 s，72℃30 s)，72℃延伸5 min。扩增完后进行杂交和染色，各步骤严格按照试剂盒说明书扩增程序进行。……