胃癌相关甲基化分型与幽门螺杆菌感染的探讨*

朱卫华，刘继斌，林 兰(江苏省南通市肿瘤医院，江苏南通 226361)

胃癌(GC)是人类常见的恶性肿瘤之一，是全球癌症相关死亡的第二大原因[1]。胃癌预后差仍然是一个重要的临床挑战，它对放疗和化疗相对耐药因而治疗选择有限[2]。DNA甲基化(DNA methylation)是目前研究最为广泛、最重要的表观遗传修饰之一。肿瘤甲基化亚型，称为CpG岛甲基化表型(CIMP)，是指出现多基因的甲基化，目前认为是肿瘤新的预后标志[3，4]。胃黏膜幽门螺杆菌感染(H.pylori，HP)是胃癌的高风险因素，一些研究表明，幽门螺杆菌感染与基因启动子甲基化有关，且与肿瘤的发生发展有关[5，6]。我们重点关注了幽门螺杆菌感染与CpG岛甲基化表型(CIMP)在胃癌中的关系，分析了75例胃癌患者血清中相关基因CIMP状态(APC，WIF-1，RUNX-3，DLC-1，SFRP-1，DKK和E-cad)和幽门螺杆菌感染在胃癌预后中的价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2008～2010年期间南通市肿瘤医院手术切除的经病理明确诊断的胃癌和相应的非癌临近组织以及配对的血清样本75例，男性53例，女性22例，年龄31～76岁，平均年龄52.35±7.62岁。2周内未行抗肿瘤治疗采集血样。健康体检者40例血清作为对照，男性18例，女性22例，2组人员均晨起空腹抽取外周静脉血。组织标本离体10min内取材，液氮速冻5 min后放置-70℃保存。血清标本，3 000×g离心5～10 min，取上层血清，-80℃低温冰箱冻存或立即抽提取DNA。

1.2 试剂和仪器

1.2.1 主要试剂：PCR产物纯化试剂盒(购自上海生工)，MSP mix(TaKaRa热启动酶系统)，离心柱型临床组织基因组DNA提取试剂盒(购自上海闪晶生物公司)，离心柱型临床血液基因组DNA提取试剂盒(上海闪晶生物公司)；……