尿液HCMV DNA检测在儿童HCMV感染中的临床应用*

张 华，詹 颉，赵 海，苏宝凤，苍金荣，宫艳艳，刘培培，杨瑞雪

(陕西省人民医院检验科，西安 710068)

人巨细胞病毒(HCMV)属疱疹病毒科，其感染人体后使感染细胞肿大并产生巨大的核内嗜酸性包涵体故称为巨细胞病毒。人群对CMV普遍易感，但大多数免疫正常个体出现无症状感染，而新生儿和婴幼儿因抵抗力较弱，感染后可出现明显症状。现对我院2014年1月～2015年12月收集的1 492例尿液标本HCMV DNA结果进行回顾性分析研究，报告如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料 收集2014年1月～2015年12月本院儿科及新生儿科住院的疑似人巨细胞病毒感染的患儿尿液标本1 492例，年龄0～12岁，其中新生儿(0～3月)78例，婴幼儿(3月～3岁)981例，学龄前儿童(3～6岁)249例，学龄期儿童(6～12岁)184例；收集的标本保存于4℃冰箱，48h内完成检测。

1.2 仪器与试剂 PCR扩增仪采用美国通用公司ABI 7500全自动实时荧光定量PCR扩增仪，按要求对仪器定期校验和维护；HCMV DNA检测试剂盒由上海复星长征医学科学有限公司提供，有生产许可证及严格的防污染技术。实验全过程遵守临床基因扩增检验实验室工作规范，实验操作人员要求持证上岗，严格按照标准操作程序进行操作。

1.3 检测原理 本品选取人巨细胞病毒株高度保守的非编码区为扩增的靶区域，设计特异性引物及荧光探针，利用实时荧光定量PCR技术，检测尿液样本中人巨细胞病毒DNA。

1.4 检测方法 尿液混合均匀取1 000 μl，13 000 r/min离心5 min，弃去上清液，沉淀中加入1 000μl生理盐水重新悬浮，13 000 r/min离心5 min，弃上清液，沉淀中加入50 μl裂解液，混匀后100℃加热10 min，13 000 r/min离心2 min，取4 μl上清液作为模板加入PCR反应液上机扩增。……