T－SPOT.TB法在肺结核分枝杆菌检测中的应用

T-SPOT.TB法在肺结核分枝杆菌检测中的应用

白国峰

(沈阳市第十人民医院，沈阳110044)

摘要：目的探讨结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)法在肺结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法回顾性分析临床确诊的75例肺结核患者的临床资料。入院时取患者静脉血，采用T-SPOT.TB法检测结核分枝杆菌，并行结核菌素皮肤试验(TST)。比较T-SPOT.TB法、TST法检测结核分枝杆菌的敏感性、特异性，比较两种方法检测结核分枝杆菌的阳性率。结果T-SPOT.TB法检测肺结核患者结核分枝杆菌的敏感性、特异性分别为84.3%(70/83)、72.9%(27/37)。TST法检测肺结核患者结核分枝杆菌的敏感性、特异性分别为79.8%(67/84)、77.8%(28/36)。采用T-SPOT.TB法、TST法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为93.3%(70/75)、86.7%(65/75)，T-SPOT.TB法检测的阳性率高于TST法(P<0.01)。结论 T-SPOT.TB法检测肺结核分枝杆菌的敏感性、特异性均较高，检出率高，是一种较可靠的肺结核分枝杆菌检测方法。

关键词：T-SPOT.TB法；结核，肺；结核分枝杆菌；酶联免疫斑点检测

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.42.030

中图分类号：R521文献标志码：B

收稿日期：(2015-04-27)

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病，快速准确地诊断结核分枝杆菌感染对于治疗结核病具有重要作用[1]。结核菌素皮肤试验(TST)是目前诊断结核分枝杆菌感染常用的方法，它是以机体对结核菌素纯化蛋白衍生物(PPD)迟发型超敏反应为基础进行皮试。PPD本身是一种蛋白混合物，因其同时可以与非致病性结核分枝杆菌及卡介苗结合，因此无法特异性检测致病性结核分枝杆菌[2,3]。临床上认为，TST对结核分枝杆菌的检测结论可靠性尚欠佳。结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)法是近年发明的一种新型诊断方法，以结核分枝杆菌基因RD1区域中编码的早期分泌抗原靶(ESAT-6)和培养滤液蛋白(CFP-10)的肽段库作为特异性抗原，采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检查进行检查，大大提高了检测敏感性[4～6]。2015年3月，我们回顾性分析了75例行T-SPOT.TB法检测结核分枝杆菌的肺结核患者临床资料，探讨T-SPOT.TB法在结核分枝杆菌检测中的临床应用价值。

1资料与方法

1.1临床资料回顾性分析2014年3月～2015年3月临床确诊的75例肺结核患者的临床资料，根据临床表现、痰抗酸杆菌涂片检查、结核分枝杆菌培养、胸部X线检查、抗结核治疗等确诊，其中男43例、女32例，年龄(33.4±11.9)岁，病程0.5～2.0年。本研究经过本院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2T-SPOT.TB检测方法按照T-SPOT.TB试剂盒操作规范进行。入院时，取患者的静脉血4 mL，采用Ficoll分离法分离外周血单个核细胞，用细胞培养基AIM-V重悬细胞，调整至2.5×106/mL。在已包被抗IFN-γ抗体的96孔板中，加入细胞培养基作为空白对照，以50 μL植物血凝素作为阳性对照，分别以结核分枝杆菌特异性ESAT-6和CFP-10肽段库(终浓度10 μg/mL)作为刺激原。孵化后用PBS洗涤4次，ELISPOT计数仪进行斑点阅读与统计。以ESAT-6或CFP-10任一检测孔达到以下标准判定为阳性：如果空白对照孔斑点数<5个，以检测孔斑点数减去空白对照孔斑点数≥6为阳性；如果空白对照孔斑点数≥6个，以检测孔斑点数>2倍的空白对照孔斑点数为阳性。

1.3TST检测方法入院时，于患者前臂皮内注射PPD 0.1 mL，72 h后由2位医生共同查验结果及卡痕。以硬结直径<5 mm为阴性，硬结直径≥10 mm为阳性。

1.4统计学方法 应用SPSS17.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1检测效能 T-SPOT.TB法对检测肺结核患者结核分枝杆菌的敏感性、特异性分别为85.3%(70/83)、72.9%(27/37)。TST法检测肺结核患者结核分枝杆菌的敏感性、特异性分别为79.8%(67/84)、77.8%(28/36)。T-SPOT.TB检测结核分枝杆菌的敏感性高于TST法(P<0.01)。

2.2阳性率75例肺结核患者采用T-SPOT.TB法、TST法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为93.3%(70/75)、86.7%(65/75)，T-SPOT.TB法检测的阳性率高于TST法(P<0.01)。

3讨论

结核分枝杆菌可侵及全身各个器官，最常见的致病部位为肺脏，占所有器官结核病的90%[7]。TST是目前诊断结核分枝杆菌感染的常用方法，但由于PPD是一种蛋白混合物，同时可以与非致病性结核分枝杆菌及卡介苗结合，因此无法特异性地检测致病性结核分枝杆菌[8]，使得TST检测结核分枝杆菌的结论可靠性欠佳。目前常用的结核分枝杆菌检测方法还有抗酸性染色法及分支杆菌培养法[9]，但抗酸性染色法的敏感性仅有50%～60%，而分枝杆菌培养法则需要2周以上才能得到培养结果。寻找检测速度快、敏感性及特异性高的结核分枝杆菌检测方法是影响结核病诊断与治疗的重要方面。

研究发现，卡介苗与结核分枝杆菌基因存在16个丢失区，分别为RD1～RD16，其中RD1中的9个基因编码区(Rv3871-Rv3879c)仅存在于致病性的结核分枝杆菌中，而卡介苗中该编码区出现缺失。该特异性编码区即被作为特异性检测致病性结核分枝杆菌的靶点[10～12]。此外，在人体初次感染结核分枝杆菌后，外周血中的T细胞会发生致敏转化，形成记忆性T淋巴细胞，当再次接触结核分枝杆菌时，记忆性T淋巴细胞能够迅速活化增殖，从而引起γ干扰素的释放。T-SPOT.TB法即是基于以上原理，以ESAT-6(Rv3875)和CFP-10 (Rv3874)肽段库作为刺激原，通过特异性与结核分枝杆菌结合，检测外周血中具有促进γ干扰素释放的T淋巴细胞，从而特异性地检测结核分枝杆菌[13～15]。T-SPOT.TB法采用ELISPOT检测，可在细胞分泌的细胞因子扩散前，捕获到细胞周围分泌的细胞因子，使检测更加灵敏，其灵敏性超过传统的ELISA实验。T-SPOT.TB检测适用于所有具有结核潜伏感染风险或怀疑结核病的人群，且不受年龄、性别、种族、治疗药物、免疫状况等的影响。本研究发现，T-SPOT.TB法对肺结核患者结核分枝杆菌检测的敏感性、特异性分别为85.3%、81.2%，高于TST法的检测效能，对结核分枝杆菌也具有更高的检测阳性率，提示T-SPOT.TB法检测肺结核分枝杆菌的敏感性和特异性均较高，检出率高，是一种较可靠的肺结核分枝杆菌检测方法。

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