猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型混合感染的诊治

韩银涛　刘剑锋　王建辉　曹爱巧　魏勇　赵辉

摘要：为了解江苏省某猪场的感染状况，本试验采用复合PCR技术，并结合流行病学调查和临床症状观察、病理剖检、病理切片等方法对发病的保育猪进行诊断，结果显示，PCR方法检测出猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒处有明显条带。结果表明该猪场存在猪伪狂犬病毒病与猪圆环病毒病的混合感染，采用经实验室诊断给出的综合防治方案治疗后，疫情得到控制。本次病例的诊治为养猪业可能发生的猪伪狂犬病、猪圆环病毒并的混合感染提供了有效的防治方法和借鉴经验。

关键词：猪伪狂犬病毒；猪圆环病毒；混合感染；诊治

猪伪狂犬病（porcine pseu-dorabies PR）是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的猪和其他动物共患的一种急性传染病，断奶前后的仔猪发病表现为呼吸困难、咳嗽、流鼻涕、有的呕吐、腹泻，部分病猪出现神经症状。发病率为20%～40%，死亡率为30%左右。由于猪伪狂犬活疫苗的广泛使用，在2011年以前，该病在猪群中已经得到较好的控制，发病率很低。然而从2011年开始，华北、华中、华东及东北等部分地区的猪场先后发生猪伪狂犬病流行。

这次的流行的猪伪狂犬病临床症状在仔猪中主要表现为高热、食欲废绝、呼吸困难、震颤及流涎等症状，后期神经症状更明显，死亡率哺乳仔猪可达95%，保育猪20%～30%。上述临床症状与2011年以前的猪伪狂犬病临床症状相似，但发病更急，发病率和死亡率更高，且常规免疫了猪伪狂犬疫苗的猪场也发病。包括哈尔滨兽医研究所，南京农业大学动物医学院等多家科研机构已经证实目前流行的猪伪狂犬病毒为新变异株，且Chaoye等采用高通量测序的方法及进化树分析表明目前中国新流行PRV毒株属于基因Ⅱ型，而其他PRV毒株（如欧美分离株）属于基因Ⅰ型，这一发现也解释了为什么常规免疫Bartha疫苗（Ⅰ型）的猪场仍然大规模暴发猪伪狂犬病的原因。在针对新型伪狂犬的疫苗上市之前，如何防控新型伪狂犬病显得尤为重要。2014年底，江苏一常规免疫了猪伪狂犬疫苗猪场暴发新型猪伪狂犬病，现将诊治情况报告如下：

1 发病情况及临床症状

发病猪群来源于江苏某猪场，1000头基础母猪，自2014年11月2015年1月期间，保育猪群出现了高烧（均在40℃以上）、流涎、共济失调、食欲废绝等临床症状，后期出现了角弓反张、侧卧划水、癫痫等表现，发病率65%左右，死亡率约73%，发病猪群在转往生长育肥舍后1月内的死亡率仍高达到4.5%。

2 剖检变化及显微变化

选取病死猪剖检，其主要剖检变化为：肝脏弥散性白色坏死点（图1AP84），脾脏少量红色梗死点，扁桃体有溃疡呈现（图1BP84），肺脏背部有少量针尖状出血点，脑部水肿。摘取病变组织脏器，中性福尔马林固定，制作石蜡切片，HE染色观察显微变化，主要病理变化有：扁桃体炎性细胞严重缺失（图2AP84）；脑部呈现包括卫星现象，噬神经元现象在内的典型非化脓性脑炎组织病变（图2BP84）；肝细胞变性，着色不均，窦状隙增宽，充血，炎性细胞浸润（图2CP84）；肺脏间质增宽（图2DP84）。

3 病原检测

选取发病猪的肺脏，大脑皮质层，腹股沟淋巴结混合匀浆，采用天净沙系列柱式动物DNAOUT提取试剂盒按说明书提取DNA以及柱式动物RNAOUT提取试剂盒按说明书提取RNA。所提取的DNA进行猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒及猪链球菌PCR检测。所提取RNA反转录后进行PRRSV和CSFV的PCR检测。采用25μL反应体系（10×PCR Buffer：2.5μL；MgCl₂：2μL；dNTP：2μL；上下游引物：各0.2μL；TaqDNA聚合酶：0.2μL；模板DNA：1μL；ddH20：16.9μL）按表1参数进行PCR扩增。扩增完后1%琼脂糖凝胶电泳观察结果。

检测结果：1%琼脂糖凝胶电泳观察结果显示只有猪伪狂犬野毒PRV gE在188处和猪圆环病毒2型PCV2在处有明显条带（见图4），猪蓝耳病病毒，猪瘟病毒，猪链球菌均为阴性。

4 控制措施及疗效

根据检测结果，判断为猪伪狂犬感染，制定以下治疗方案：①淘汰弱小发病猪；②疫苗免疫：Bartha-K61gE缺失苗：保育和生长猪紧急免疫，肌肉注射1头份/头，间隔1个月加强免疫一次，产房现有哺乳仔猪在21日龄断奶时肌肉注射免疫1头份（包括已达到21日龄但还未转群的仔猪，该猪场21日龄断奶，28日龄转保育）；③修改原有猪伪狂犬常规免疫程序为：经产母猪和公猪：每年普免4次，每3月1次；育肥猪：1～2日龄，滴鼻1头份/头，分两个鼻孔滴鼻，56日龄肌肉注射1头份/头，100～110日龄肌肉注射1头份/头；④预防继发感染：发病猪群拌料10%替米考星1kg/t+黄芪多糖1kg/t+磺胺间甲氧嘧啶钠1kg/t+电解多维1kg/t；⑤消毒：酚类消毒剂每周带猪消毒两次，转群或出栏后2%的氢氧化钠对猪舍墙面、地面、过道及饲养设备等进行彻底消毒，干燥。转归：紧急免疫一周后，保育猪和生长猪新发病猪数量显著下降，原发病猪死亡率显著降低，新转入保育的仔猪未见发病；1月后疫情全部控制。

5 讨论与小结

近年来，生猪疫病均以多病原混合感染或继发感染为主要流行形式，在复杂疫病背景下的准确快速诊断是控制生猪疫病的主要瓶颈。更深层次说，准确区分原发病原和继发病原，主要致病病原及次要病原是精确准断的前提。在本案例中，根据临床症状及剖检变化，锁定了包括链球菌，猪伪狂犬病毒，猪呼吸与繁殖综合征病毒，猪圆环病毒在内的几种病原，进一步通过病原检测确定感染病原为猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型感染。但上述两种病原哪种才是主要致病病原仍不能明确，这就需要借助病理学分析，组织学观察显示该病例有扁桃体坏死非化脓性脑炎，肝脏坏死，间质性肺等主要病变，符合猪伪狂犬病主要病理变化，与猪圆环病毒感染主要病理变化有一定的差异（圆环病毒2型的主要病理变化为淋巴组织及肺脏间质内淋巴细胞大量缺失，巨噬细胞浸润），所以确定该病例是以猪伪狂犬病毒为主要致病病源，圆环病毒2型为次要病原的混合感染，在防治措施的制定中，要以防治猪伪狂犬病为主。

本案例同样也是在常规免疫了猪伪狂犬疫苗的情况下出现的。通过剖检变化和组织学检测，与新型伪狂犬的病理变化相似，实验室检测结果为猪圆环病毒2型及株伪狂犬病毒为阳性。由于猪场常规免疫了勃林格的圆环疫苗，所以，笔者认为虽然PCR检测出了PCV2病原，但引起该疫情的主要因素仍然是猪伪狂犬病毒。

目前流行的猪伪狂犬毒株是由于抗原变异而致传统疫苗的保护率有所下降或毒力增强兼抗原变异，致使常规免疫猪伪狂犬活疫苗的猪场依然易发伪狂犬病。研究显示虽然使用现有疫苗不能完全保护流行毒株的感染，但是增加疫苗免疫次数（每年普免4次）与剂量（为3头份），仍然可以使猪只获得免疫保护，不出现伪狂犬病临床症状。解伟涛等也研究了不同免疫策略对猪伪狂犬病防控效果的差异，发现传统疫苗增加免疫剂量和免疫次数，仍然可以有效防控新流行的PRV野毒。在本案例中，已明确猪伪狂犬病毒为主要致病病原，所以针对猪伪狂犬制定的新免疫程序，达到了良好的免疫效果，很快控制了疫情，进一步证实了现有疫苗对新型猪伪狂犬病毒的免疫保护力。由于圆环病毒确定为次要病原，且猪场已经常规免疫了勃林格的圆环苗，所以未针对圆环病毒调整免疫方案，但由于上述两种病原均为免疫抑制性疾病，容易造成其他细菌的继发感染，故针对该阶段猪易感染的副猪嗜血杆菌，链球菌，放线杆菌，巴氏杆菌等制定了抗生素给药方案，达到了良好的预防效果。

总结：在猪伪狂犬病毒为主要致病病原的混合感染中，伪狂犬疫苗免疫尤为重要，然而疫苗免疫并不能清除病毒，猪一旦感染伪狂犬病病毒便终生带毒。所以，对猪场猪伪狂犬的监测同样重要。建议，每季度检测1次免疫抗体，每半年检测1次PRV gE抗体。采血检查的比例根据群体大小而定，一般大于300头基础母猪的猪场不少于10%，低于300头母猪的猪场绝对数量不低于30份。检测出抗体水平合格，gEELISA鉴别诊断为阴性的定为健康猪群；抗体水平不合格，gE-ELISA鉴别诊断为阴性的猪只，应立即补注疫苗；gE-EusA鉴别诊断为阳性者及隐性感染带毒者，一律淘汰处理，不能当做种猪饲养。

（编辑：狄慧）