S100—A8在乳腺癌表达的病理学研究

孙小年　胡丹妮　卢雪琳　王江涛　李晶

摘要：目的：分析S100-A8在乳腺癌表达及与乳腺癌临床病理和生存状况的关系。方法：用免疫组织化学方法检测S100-A8蛋白在乳腺良性疾病（n=15）及乳腺癌无淋巴结转移组（n=83）及109例有腋窝淋巴结转移乳腺癌和配对淋巴结转移灶中的表达，进行Kaplan-Meier生存分析和Cox回归分析。结果：S100-A8蛋白在乳腺癌原发灶和淋巴结转移灶之间存在差异表达，原发癌组织和配对的转移性淋巴结之间差异有统计学意义。Kaplan-Meier生存分析和Cox回归模型提示组织学分级和淋巴结状态是乳腺癌的危险因素。结论：S100-A8蛋白与乳腺癌淋巴结转移相关，并与ER表达水平和组织学类型有关。

关键词：乳腺癌；S100-A8；淋巴结转移；免疫组化方法

中图分类号：R737.9 文献标志码：A 文章编号：1008-2409（2016）05-0036-04

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤和女性癌症死亡的第二大原因。乳腺癌在西方國家发病率和病死率高，而其发病率在发展中国家呈上升趋势。S100家族蛋白是脊椎动物特有的分子量为10～20 kDa的小酸性蛋白质，可以与钙离子以同型二聚体或低聚物形式结合。许多研究已经描述了这些蛋白质与炎症和癌症的关系。至少有16个编码S100家族成员的基因，包括S100-A8基因，聚集在人类染色体lq21，在肿瘤的发生发展中这个区域经常出现染色体重排，并与肿瘤细胞的增殖和转移相关。笔者对S100-A8在乳腺癌中的表达及临床病理学意义进行了初步研究。现报告如下。

1资料与方法

1.1病例资料

选择1996年5月至2008年5月在湖南省肿瘤医院就诊207例女性乳腺疾病患者的石蜡组织样本。其中15例诊断为乳腺良性疾病包括乳腺纤维囊性改变、不典型增生和纤维腺瘤，83例诊断为无区域淋巴结转移乳腺癌，109例有腋窝淋巴结转移乳腺癌和配对淋巴结转移灶。所有乳腺癌患者均经湖南省肿瘤医院病理确诊，术前均未接受放疗或化疗。原发性肿瘤患者的平均年龄为45岁（30～73岁），平均总生存时间约为80.07个月。组织标本用10%甲醛固定液，石蜡包埋，4μm厚切片。所有病理切片均由湖南肿瘤医院病理科两位有经验的病理医生观察，均为浸润性导管癌和浸润性小叶癌。分为4组检测S100-A8蛋白的表达：①乳腺良性疾病（BBD）。②无淋巴结转移的乳腺癌原发灶（NMBT）。③有淋巴结转移的乳腺癌原发灶（PBT）。④配对的淋巴结转移灶（PMLN）。

1.2试剂

兔单克隆免疫球蛋白（IgG）抗体S100-A8购自Abcam公司（英国）。柠檬酸抗原修复液（粉）（0.01M，pH：6，mvs-0066），0.01M PBS（pH：7.2～7.4）。DAB显色试剂盒（聚合物kit-0015）和Elivision^TMplus Polyer HRP试剂盒（大鼠和家兔）kit-9902（迈新生物技术产品，福建）。家用微波炉（格兰仕）对微波抗原修复。

1.3免疫组化方法

石蜡切片在烤箱烤60℃ 2 h，然后依次在二甲苯中脱蜡、梯度乙醇洗涤、流水清洗，柠檬酸抗原修复液中微波修复20 min。3%过氧化氢孵育15 min，非免疫血清封闭。滴加S100-A8抗体（1：200）4℃过夜。孵育链霉亲和素一过氧化物酶15 min，然后过氧化物酶标记二抗孵育15 min后，DAB显色。

1.4免疫组化染色结果评分

免疫组化染色结果判断由两位高年资病理医生进行，将结果进行比对，对不一致的结果将重验并达到一致。总的免疫组化染色评分（total immuno-staining score，TIS）综合染色比例和强度进行。

1.5统计学分析

应用Wilcoson signed-rank检验和MeNemar检验分析S100-A8各组乳腺病变中的表达差异。使用X²检验分析S100-A8表达与临床病理指标间的关系。Kaplan-Meier法分析S100-A8阳性和阴性乳腺癌患者的生存状态，Multivariat Cox风险分析$100-A8在乳腺癌预后中的作用。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 S100-A8在各组乳腺病变组织中表达

免疫组化结果显示S100-A8阳性着色位于细胞质。阳性表达率在BBD、NMBT、PBT、PMLN分别为13.3%（2/15）、37.3%（31/83）、34.9%（38/109）、18.3%（20/109）。NMBT、PBT阳性表达率均明显高于PMLN、BBD（P<0.01），BBD和PMLN，NMBT和PBT之间差异无统计学意义。详见图1～2。

2.2 S100-A8蛋白表达与临床病理特征之间的相关性

S100-A8与组织学类型、雌激素受体（ER）的表达显著相关。乳腺浸润性导管癌的S100-A8阳性率较浸润性小叶癌，ER阴性乳腺癌的S100-A8阳性率较ER阳性乳腺癌更高。详见表1。

此外，Kaplan-Meier分析（图3）表明，蛋白S100-A8阳性乳腺癌病例可能有更好的生存状态，但目前的研究显示差异无统计学意义（P=0.094）。此外，Cox回归分析结果显示组织学分级和淋巴结转移情况与乳腺癌总生存率的预后相关。详见表2。

3讨论

乳腺癌是一种系统性疾病，100%～15%乳腺癌患者在3年内有侵袭性疾病和发生远处转移的原发肿瘤，转移仍是乳腺癌总生存率的重要危险因素，因此，必须明确乳腺癌的转移机制。区域性腋窝淋巴结总是首先受累的转移。在Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌患者中保乳手术的复发率是根治术的2.8倍，淋巴结复发在保守治疗中高两倍多。精确有效的腋窝淋巴结状况评价是乳腺癌患者预后判断的重要方法。

本研究结果提示S100-A8与乳腺癌区域腋窝淋巴结转移有关，但与乳腺癌总体生存率无显著相关性。S100-A8阳性表达率偏低可能是其中的原因，需要增大样本数量进一步研究。本研究结果也发现该蛋白表达与雌激素受体（ER）水平有关，可能是ER相关作用过程中的一个效应分子。而它在浸润性导管癌和小叶癌中表达的差异没有过类似报道，还有待进一步研究确定其意义。本组乳腺癌病例Cox回归分析显示组织学分级和淋巴结转移情况与乳腺癌总生存率的预后相关，虽然S100-A8阳性表达与总生存期差异无统计学意义，但鉴于其与淋巴结转移的显著相关性，故其仍可能与乳腺癌预后有关。

S100-A8也称为粒细胞相关蛋白8，有报道这种小细胞内钙结合蛋白可被分泌以及在前列腺癌细胞外间质中表达。S100-A8蛋白在多种肿瘤如食管鳞癌和喉癌参与细胞周期、分化、趋化作用和炎症信号转导通路。此外，蛋白质S100-A8是NF-KB信号通路的新成员。Fu等发现S100-A8通过NF-KB信号通路与人类白细胞抗原（HLA-B）相互作用参与喉癌的发生发展。另有研究表明，锌可以通过激活和抑制蛋白S100 A8-rage互动和下游NF信号促进和拮抗肿瘤发生。

综上所述，蛋白S100-A8是预测乳腺癌淋巴结转移的一个潜在的生物标志物。目前关于该蛋白在恶性肿瘤中功能的研究报道不多，本研究只是对其临床病理学意义进行初步研究，还需进一步深入研究S100-A8蛋白如何参与乳腺癌转移过程。