PCR检验法在细菌检验中的临床效果分析

王冬梅

PCR检验法在细菌检验中的临床效果分析

王冬梅

目的探讨聚合酶链式反应(PCR)检验法在细菌检验中的临床效果。方法86份细菌样本,随机分为观察组和对照组各,43份。对照组采用细菌培养法进行检验,观察组应用PCR方法进行检验。比较两种检查方法的阳性检出率。结果观察组阳性检出率为77%,明显高于对照组的30%(P＜0.05)。结论PCR检验法在细菌检验中具有较高检出率,准确度高,检测成本低廉,操作简便,检出迅速,值得临床广泛应用。

聚合酶链式反应；细菌检验；临床效果

细菌检验在临床医学检验中占有重要的位置,为临床疾病的诊断和治疗提供准确的依据。近年来,随着临床医学检验技术的不断改进,随着分子生物学的快速发展,PCR检验在临床感染性疾病的诊断和治疗中获得越来越广泛的应用［1,2］。通过PCR的应用能够快速且准确地进行细菌检验。本文主要通过对本院细菌样本进行研究,探讨PCR检验法在细菌检验中的临床效果,报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本院2015年1月～2016年1月收集的86份细菌样本进行研究,其中粪便样本21份,尿液样本25份,脓肿样本30份,血液样本10份。所有研究样本都经过标准化的采集和送检流程,随机分为观察组和对照组,各43份。观察组粪便样本10份,尿液样本13份,脓肿样本12份,血液样本8份；对照组粪便样本11份,尿液样本12份,脓肿样本18份,血液样本2份。两组样本一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。

1.2 检验方法 对照组：按临床检验操作规程采集患者粪便标本接种于SS、麦康凯培养基,尿液、脓肿标本接种于血平板,放入温箱孵育培养24 h；采集静脉血8～10ml,立即注入血培养瓶,采用法国生物梅里埃公司生产的Bact / ALERT 3D 60型血培养仪进行标本培养。仪器发出阳性报警时,查看细菌生长曲线,并用无菌注射器抽取培养瓶内培养液直接涂片,经革兰染色镜检后,报告结果。同时将抽取的培养液转种于血平板、麦康凯平板(35℃)、巧克力平板5%CO2、35℃培养18～24 h,待菌落形成后,采用法国梅里埃Vitek-2 Compact微生物细菌鉴定仪对病原菌进行鉴定及药敏试验检测。

观察组：应用PCR方法进行检验,ABBOTTm2000全自动核酸检测系统,把观察组样本放在生理盐水中,进行离心处理,离心速度为1200 r/min,操作时间为10min,然后去除上清液,加入碱性裂解液并且放置于98℃的温度环境中进行加热,再重新进行离心处理,取其上清液作为基因模板,并且使用PCR扩增仪进行检测。根据要求设置循环参数,针对细菌培养液的检验结果需要严格按照操作说明书与PCR检验试剂的说明进行操作。

1.3 观察指标 比较两种检查方法阳性检出率。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件进行统计分析。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

观察组阳性检出率为77%,明显高于对照组的30%(P＜0.05)。见表1。

表1 两组阳性检出情况比较［n,n(%)］

3 讨论

细菌检验作为临床医学检验中的重要组成部分,在疾病的临床诊断和治疗中发挥着重要的指导作用。目前,临床常用于细菌检验的方法是细菌培养方法,该种方法操作简单,在细菌检验中应用极为广泛。然而,细菌培养方法受到多方面因素的影响,导致检验结果存在一定的误差,且从标本采集到出结果报告需要时间较长(3～7 d)［3］。

PCR检测法,是一种通过体外酶促扩增特定基因或者序列的技术,需要经历高温变性、低温退火、适温延伸的周期,以固定的循环数扩增,从而实现特定DNA的迅速增加。PCR检验方法在各类基因表达及相应的检验领域中获得广泛的应用,包括基因克隆、遗传鉴定、传染病病原分析。采用PCR方法对病原菌进行检验,必须注意针对该菌特异的保守序列设计适宜的引物,以免非特异性片段对PCR的扩增效果产生不良影响。目前,应用 PCR 方法检测感染性病原的主要方向包括两方面：①检测每一种病原的单个特异基因,可同时检测一种或几种病原体是否存在；②检测某一病原的多个基因,可以减少假阳性结果的出现。吕虹等［4］研究人员基于复合探针技术原理,以blaNDM-基因作为待检靶基因建立检测方法,对PCR扩增体系中镁离子浓度、PCR退火温度等进行优化,并对检测的灵敏性、特异性、重复性等进行评价,研究显示,以灵敏度质控品进行灵敏度实验,最低检测限可达2拷贝/体系；非耐药性菌株的检测结果均为阴性；批间批内变异系数均＜5%；只有产NDM-1的鲍曼不动杆菌检测为阳性,其他377株临床分离菌和阴性对照均无响应,由此可见,PCR检验法在检测含blaNDM-1基因的菌株方面具有很好的灵敏性、特异性和重复性。刘广文等［5］利用荧光定量PCR检测El Tor型霍乱弧菌染色体上目的基因zot与基准基因thyA的Ct值差值,根据已知拷贝数菌株N16961的两基因Ct值之差来推算待测菌株中zot基因的拷贝数,研究证明PCR检验法可以准确检测菌株染色体上的基因拷贝数。

虽然对各学科的研究在不断深入,检测方法和检测标准也在不断更新和完善,新方法的出现弥补了旧方法的不足,但是也会受到一些因素的限制,例如检测仪器价格高昂、检测仪器对样品的纯度要求严格等,不利于广泛应用。PCR 技术既具备快捷、简便、精密准确等优点,又具备特异性好,灵敏度高便于检测成组样本等优势,降低了检测成本,缩短了检测时间。PCR 技术的广泛应用必将为兽医公共卫生营养健康和疾病预防事业做出巨大贡献。

综上所述,PCR检验法在细菌检验中具有较高的检出率,准确度高,检测成本低廉,操作简便,检出迅速,值得临床广泛应用。

［1］王荣山,吴亦栋,尚世强,等.实时荧光定量PCR检测细菌方法的建立及其临床应用.中华围产医学杂志,2005,8(4):242-245.

［2］王蒙,徐志毅,高斐,等.PCR检测细菌16s rRNA基因在临床感染性疾病诊断中的应用.中国实用医药,2011,6(14):88-89.

［3］王婵媛,吴永贵,齐向明,等.PCR和传统培养法检测腹膜透析相关性腹膜炎致病菌的对比分析.中华肾脏病杂志,2015,31(12):898-904.

［4］吕虹,刘志红,刘琪琦,等.复合探针实时荧光PCR检测细菌耐药基因blaNDM-1方法的建立.生物技术通讯,2012,23(3):411-414.

［5］刘广文,闫梅英,梁未丽,等.荧光定量PCR检测细菌染色体上基因拷贝数.中华微生物学和免疫学杂志,2006,26(4):379-382.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.13.023

2016-04-25］

528329 广东省佛山市顺德区均安医院检验科