B族链球菌感染、预防及检测研究进展



·综述·

B族链球菌感染、预防及检测研究进展

王欣1，韩渊明2综述，魏超君1△审校

(1.甘肃省人民医院临床检验中心，甘肃兰州 730000；

2.甘肃省兰州市第一人民医院泌尿外科，甘肃兰州 730050)

关键词:B族链球菌；感染；预防；疫苗

B族链球菌(GBS)即无乳链球菌感染是造成孕产妇生殖道感染的重要原因，严重时更可引起如泌尿系感染、绒毛膜羊膜炎、产褥感染等。早产、胎膜早破和新生儿败血症等均与其感染有密切关系[1]。王兆莉等[2]的研究发现未发生胎膜早破的正常产妇其生殖道中GBS感染率远低于发生胎膜早破的产妇。孙瑜等[3]研究认为阴道感染GBS后，该菌可继续上行造成宫腔内感染，引起绒毛膜羊膜炎，甚至造成胎儿死亡。

1GBS对孕产妇的影响

1.1GBS与胎膜早破(PROM)临床研究证实,泌尿生殖道的GBS感染可引起PROM、早产、绒毛膜羊膜炎[4-5]，且由于PRDM而引起早产的孕妇组GBS感染率明显高于足月产的孕妇组[6]。

1.2GBS与早产当GBS数量多且毒力强、孕妇免疫力低下或引起阴道炎的GBS上行造成PROM时，机体释放的磷脂酶A2可刺激羊膜等组织产生细胞因子及前列腺素，它们引起子宫收缩导致早产发生[7-9]。Klebanoff等[10]研究表明,感染GBS的孕妇较健康孕妇发生早产的可能性增加20%～60%，且其分娩的胎儿为低或极低出生体质量儿的概率也相应增加。

1.3GBS与羊膜腔感染孕妇患细菌性阴道炎等疾病后致病菌上行造成胎盘、胎膜及羊水等感染即为羊膜腔感染。由于GBS对绒毛膜的穿透能力远大于其他可引起生殖道感染的致病菌如大肠埃希菌等,故由GBS造成的羊膜腔感染病情也更严重。

2GBS与新生儿及婴儿感染

目前普遍以患儿发病时间及临床表现的差异为分类依据，将新生儿和婴儿GBS感染分为两型。(1)早发型感染：患儿出生后7 d内发生且以生后24 h内发生多见，主要临床表现为肺炎和败血症，其中GBS肺炎可有发绀、呼吸暂停及呼吸窘迫等严重症状。(2)晚发型感染：患儿出生7 d后至出生后3个月发生，多见于足月儿，常呈隐匿性发病，主要临床表现为发热、嗜睡和颅内高压等，若伴发败血症则预后较差。

3GBS的检测

3.1微生物学检验方法GBS培养是检测GBS感染的重要方法之一。虽然GBS培养所需时间较其他检测方法长且阳性率不高,但可利用培养出的细菌进行进一步深入研究，并且可根据药敏试验结果选择敏感抗菌药物治疗。

3.2免疫学检验方法

3.2.1乳胶凝集法实验原理为检测GBS荚膜多糖抗原，采用吸附了抗GBS荚膜多糖抗体的胶乳混悬液进行检验。此种方法敏感度高，操作简便且成本低廉,适合进行快速检测时使用。

3.2.2免疫层析法免疫层析法是一种快速且步骤简单的检测GBS抗原的方法。当标本含有GBS抗原时，其可与染料或胶体金等标记的针对GBS的单克隆抗体特异性结合形成抗原抗体复合物，此复合物可被固相化的多克隆抗体捕获从而产生有色条带[11]。

3.3分子生物学检验方法

3.3.1斑点印迹法Mavenyengwa等[12]将GBS被热十二烷基硫酸盐溶液裂解的裂解物经过聚丙烯酰胺凝胶电泳转移至PVDF膜后,依次与抗-R3单克隆抗体以及耦联过氧化物酶的抗IgM抗体反应,产物与底物显色后产生有色斑点。此方法特异性较高，但对操作人员及实验设备要求严格。

3.3.2PCR技术

3.3.2.1常规PCRJordan等[13]采用单一PCR技术，Rallu等[14]使用实时荧光定量PCR技术分别检测GBS的16S rDNA以及编码C5a肽酶的scpB基因。Parham等[15]通过定量PCR技术检测被探针捕获到的GBS基因组DNA，该寡核苷酸探针长度不同，以cfb基因为靶基因。此方法可将特异性的GBS基因片段浓集、纯化，使得高效检测GBS成为可能。

3.3.2.2多重PCRPoyart等[16]采用以荚膜多糖cps基因为靶基因的多重PCR技术检测已知的多种GBS荚膜多糖。Zeng等[17]、Zhao等[18]使用从Ⅰa到Ⅷ共9个GBS血清特异性基因以及7个表面蛋白抗原基因和cfb菌种特异性基因为靶基因，设计出33种引物和34种探针，这种多重PCR-反向线点杂交技术(mPCR/RLB)可同时检测GBS的分子血清型和表面蛋白基因。此技术与多重PCR方法相比提高了GBS检测的灵敏度和特异性以及检测效率，可避免交叉反应，在大规模的GBS流行病学调查研究时更加适宜使用。此外，Wen等[19]采用DNA芯片技术检测9种GBS血清型，可用于GBS血清特异性疫苗的研制以及GBS的发病机制研究。

4GBS预防策略的进展

从妊娠期抗菌药物预防(IAP)到疫苗，美国疾病预防控制中心于2010年颁布了《围产期GBS预防指南》，针对妊娠期GBS的预防和控制提出了两种方案，该方案已被美国妇产科学院、护士助产士协会、药理学会、流行病学会、儿科学会及微生物学会认可。方案一：对所有孕妇于妊娠35～37周时进行GBS筛查。方法是将阴道前端及直肠采集的标本进行细菌培养。因使用平板直接接种与使用增菌肉汤接种相比约有50%的GBS携带者出现假阴性结果，故推荐使用增菌肉汤培养来提高检出率。对培养结果为阳性的孕妇进行青霉素预防性治疗。方案二：对下列高危情况者直接给予青霉素预防性治疗：妊娠37周之前分娩、产时体温大于或等于38 ℃，破膜时间大于或等于18 h、上次新生儿GBS感染史,以及本次妊娠有GBS菌尿。

研究表明，近年来GBS对青霉素耐药率随着抗菌药物广泛使用而逐渐升高，而对红霉素和克林霉素的耐药率已从小于5%升至20%～30%[20-21]。Pettersson等[22]认为，IAP虽能使新生儿早发型GBS感染率降低，但新生儿晚发型GBS感染率不能降低。IAP还可能通过母体影响新生儿肠道内环境，增加了由于耐药的革兰阴性菌引起的新生儿脓毒症的发病率和病死率。因此，目前认为疫苗接种是预防GBS感染的一种更加有效的方法，其不仅可防止新生儿发生GBS感染，而且也可预防诸如流产、死产和产妇菌血症[23-24]等其他GBS相关疾病的发生。

5结论

目前，新生儿GBS感染已引起全球公共卫生机构的广泛关注。GBS疫苗是预防感染的有效途径，研发安全有效的GBS疫苗已成为热点[25-26]，但仍有部分问题尚未解决[27]，例如如何延长疫苗保护时间以及研制针对不同GBS血清型的疫苗。针对致病性强的GBS血清型如Ⅰa型、Ⅰb型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅴ型制备多效价GBS疫苗的技术仍处于临床Ⅰ期、Ⅱ期实验阶段[28]。GBS疫苗研制的重点主要集中在如何选用GBS表面蛋白方面，如C蛋白复合体中的A、B抗原[29]、RIB蛋白、R蛋白等；此外，载体蛋白与荚膜多糖耦联的结合疫苗，以及基因工程疫苗等均在研制过程中。Valentin-Hansen等[30]的研究结果显示目前GBS的蛋白-多糖疫苗已进入三期临床实验阶段，这将对GBS感染的预防起到重大作用。

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(收稿日期：2015-12-08)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.038

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)04-0521-03

作者简介：王欣，女，主管检验师，主要从事微生物检验研究。△通讯作者，E-mail:weichaojun0312@126.com。