人MUC5AC启动子荧光报告基因的构建与分析

王孝芸，蓝楠，张沄，王星，李国平

(西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室，四川 泸州 646000)

人MUC5AC启动子荧光报告基因的构建与分析

王孝芸，蓝楠，张沄，王星，李国平

(西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室，四川 泸州 646000)

目的 构建人MUC5AC启动子荧光报告基因并进行分析。方法 PCR技术克隆人MUC5AC启动子[(-1 300)～(+48)bp]长度片段的基因，将纯化的PCR产物与T载体连接，然后将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，并利用酶切和测序进行重组质粒鉴定；将该重组质粒克隆至pGL3-ehancer荧光报告基因载体上，用脂质体转染法将荧光报告基因转染至人支气管上皮细胞(16HBE细胞)，分别用1 ng/mL的重组细胞因子IL-4和IL-13刺激细胞24 h，并设不做任何处理的对照组；用Promega双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测相对荧光素酶活性(Rlus1/Rlus2)。结果 人MUC5AC启动子荧光报告基因构建成功，IL-4和IL-13刺激组的相对荧光素酶活性均高于对照组[IL-4(21.666 7±2.081 67)，IL-13(26.567 8±1.527 53)，对照组(8.33±1.527 53)；F=89.815，P= 0.000]。结论 MUC5AC启动子核心区域为(-1 300)～(+48)bp范围，IL-4和IL-13可作用于该区域并促进MUC5AC高表达。

MUC5AC；启动子；荧光报告基因；IL-4；IL-13

气道黏液高分泌是哮喘的一大特征。黏蛋白是黏液中的主要成分，是一种糖基化蛋白，其编码基因为MUC。MUC5AC是气道表达最多的一种蛋白，在气道杯状细胞中高表达，是黏液增生和化生的标志[1-2]。IL-4和IL-13均属于TH2型细胞因子，促进哮喘的发生和发展，对气道黏液高分泌有重要调节作用。气道黏液高分泌存在多种作用机理，如IL-13/IL-4R信号途径和表皮因子受体(EGFR)途径等[3-4]，而具体调控机制还有待深入研究。

本研究旨在通过序……