激流灌注式生物反应器培养猪瘟活疫苗工艺的研究

郑朝朝 柳珊 邹立宏 刘云涛 刘涛 郁宏伟

摘要：为建立规模化培养猪瘟活疫苗的生产工艺，本研究利用工作体积为10L的激流灌注式生物反应器培养猪睾丸细胞（swine testis，ST），接种猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）进行培养研究。研究结果显示，培养4d细胞数可增长5-7倍，接种病毒后15d可收获毒液6次，收获量至少与200个10L转瓶单次收获量相当，产品各项检测均合格。本工艺极大地缩短了培养时间，为规模化培养工艺的推广与使用提供了技术参数。

关键词：猪瘟；脾毒；细胞毒；激流灌注式生物反应器

猪瘟是由猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）引起的猪的一种热性、急性、接触性传染病。此病于1833年首先在美国等地发现，以后遍及世界各大洲，发病率和死亡率高，危害极大。猪瘟的治疗无特效药物，最有效的方法就是疫苗的免疫接种，因此疫苗免疫效果的优劣对猪瘟防控起了决定性作用。2007年9月，猪瘟兔化弱毒脾淋疫苗被农业部定为政府采购推广应用的首选疫苗。

本研究中应用激流灌注式生物反应器（工作体积为10L）对猪瘟病毒的培养工艺进行了初步探索：以第一代细胞毒做为毒种，培养15d可收获毒液6次，各收次病毒液效价均可达到1.0×lO⁶RID/mL以上，病毒收获量至少与200个10L转瓶的单次收获量相当，且各种检测均符合规程要求。该工艺与原有的转瓶生产工艺相比，培养时间缩短一半，产品质量稳定，效价高。该工艺的建立为规模化培养工艺的推广与使用提供了技术参数。

1 材料和方法

1.1 细胞、病毒及实验动物

猪睾丸细胞（ST）购自广东永顺生物制药股份有限公司；……