沉默结缔组织生长因子表达对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

崔小伟，陈丽琴，周钧，周莉，王淑珍，张晶

(天津市滨海新区大港医院,天津300270)



沉默结缔组织生长因子表达对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

崔小伟，陈丽琴，周钧，周莉，王淑珍，张晶

(天津市滨海新区大港医院,天津300270)

摘要：目的观察靶向沉默结缔组织生长因子(CTGF)表达对肝星状细胞(HSC)-T6增殖、凋亡的影响。方法 将HSC-T6细胞随机分为3组，A、B组分别转染CTGF siRNA及无义序列4～6 h，C组不转染；培养24 h，采用RT-PCR法检测CTGF mRNA，MTT法检测细胞增殖速度，Annexin V/PI 双染色法测算细胞凋亡率，Western blot法检测细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白。结果A组CTGF mRNA表达量(0.12±0.03)明显低于B组(0.87±0.07)和C组(0.85±0.09)，细胞增殖速度(0.21±0.05)明显慢于B组(0.38±0.04)和C组(0.39±0.05)，细胞凋亡率(37.5%±0.6%)高于B组(0.9%±0.3%)和C组(1.1%±0.2%)，Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达量(29.2±0.8，26.4±2.7)均低于B组(66. 7±1.7，64.7±0.9)和C组(68.4±1.7，66.1±2.2)，P均<0.05。结论 靶向沉默CTGF基因可抑制HSC-T6细胞增殖，促进其凋亡，并显著减少Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的合成和分泌。

关键词：酒精性肝硬化；肝星状细胞；结缔组织生长因子；小干扰核糖核酸；细胞增殖；细胞凋亡

近年来，酒精性肝硬化病死率呈上升趋势[1～5]。目前，除早期预防以外，对酒精性肝硬化患者尚无有效治疗手段。以往研究发现过多的细胞外基质(ECM)沉积于肝脏就会形成肝纤维化，活化的肝星状细胞(HSC)是合成ECM的主要来源，在肝纤维化形成过程中起重要作用[6～8]，各种促肝纤维化细胞因子也可通过调控HSC参与肝纤维化的发生、发展。结缔组织生长因子(CTGF)是一种非结构性基质蛋白，能直接介导HSC的活化、合成和分泌ECM[9,10]。小干扰RNA(siRNA) 是基因靶向敲除的新型生物技术。2011年11月～2013年10月，我们通过构建CTGF特异性的siRNA并转染HSC-T6细胞，观察下调CTGF水平对HSC-T6细胞增殖和凋亡的影响。

1材料与方法

1.1材料HSC-T6细胞株购自上海肿瘤研究所；……