生物反应器中PRRSV工业规模增殖工艺的建立

冯磊++王伟峰++吴培培++褚轩++陈丽++侯继波

摘要：分析比较了3种不同微载体悬浮培养工艺——分批换液式、消化传代放大式、循环灌注培养式对Marc-145细胞微载体培养效能及生理代谢的特点及差异，并实现了从5 L至60 L反应器放大过程的PRRSV实际增殖应用。结果表明，在5 L动物细胞反应器中使用相同的微载体用量6 g/L，分批换液式培养和消化传代放大式培养仅获得27×105～28×105 cells/mL的细胞密度，低于循环灌注培养式的培养能力（59.4×105 cells/mL）。根据这3种不同培养工艺的特点，设计并实施了可应用于实际生产的工艺流程，即Marc-145种子细胞以循环灌注培养方式在5 L反应器中完成初级培养，经消化传代工艺，将种子细胞放大接种于60 L反应器中进行分批换液式的二级培养，用于PRRSV的大规模增殖，结果显示PRRSV增殖滴度可达到108.3TCID50/mL。该过程成功地模拟了Marc-145细胞在工业级水平上的放大培养操作工艺，其放大倍数达到1 ∶3的传代系数，具备实际应用价值。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；微载体培养；Marc-145细胞；循环灌注培养；分批换液式培养；消化传代式培养

中图分类号： Q943.1；S858.285.3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）02-0247-05

收稿日期：2014-12-26

基金项目：公益性行业（农业）科研专项（编号：201303046）。

作者简介：冯磊（1979—），男，江苏南通人，博士，副研究员，主要从事兽用生物制品工程技术研究。E-mail：fenglnt@hotmail.com。

通信作者：侯继波，研究员。E-mail：houjibo@jaas.ac.cn。猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是一种严重危害养猪业的传染病（猪蓝耳病）[1]。控制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的主要办法是使用疫苗进行免疫防控，而提高病毒增殖规模及滴度是疫苗生产的一个重要目标。……