右美托咪定混合氯胺酮对新生大鼠离体海马细胞凋亡的影响

吴新海+赵中保+莫丽贤

【摘要】 目的 探讨右美托咪定（Dex）混合氯胺酮对新生大鼠离体海马细胞凋亡的影响。方法 SD新生大鼠（出生7 d）海马神经元体外培养6 d， 采用随机数字表法分为对照组（C组）， 100 μmol/L氯胺酮组（K组）， 10 μg/ml Dex组（D组）， 10 μg/ml Dex 混合100 μmol/L氯胺酮组（DK组）， 各6只。孵育24 h后采用免疫组化法检测Caspase-3蛋白的表达， 双染法检测神经元凋亡。结果 与C组比较， K组的海马细胞凋亡率和Caspase-3表达水平升高（P<0.05）；与C组比较， D组海马细胞凋亡率和Caspase-3表达水平差异无统计学意义（P>0.05）；与K组比较， DK组和D组的海马细胞凋亡率和Caspase-3表达水平降低（P<0.05）。结论 Dex能减轻氯胺酮诱导的新生大鼠离体海马细胞凋亡。

【关键词】 右美托咪定；氯胺酮；海马细胞；凋亡

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.14.210

Influence by dexmedetomidine mixed with ketamine on isolated hippocampus cells apoptosis from infant rats WU Xin-hai， ZHAO Zhong-bao， MO Li-xian. Department of Anesthesiology， Beijing University Shenzhen Hospital， Shenzhen 518036， China

【Abstract】 Objective To investigate influence by dexmedetomidine （Dex） mixed with ketamine on isolated hippocampus cells apoptosis from infant rats. Methods Hippocampal neuron from SD infant rats （7 d after birth） were taken for 6-d culture in vitro， and they were randomly divided into control group （group C）， 100 μmol/L ketamine group （group K）， 10 μg/ml Dex group （group D）， and 10 μg/ml Dex mixed with 100 μmol/L ketamine group （group DK）， with 6 rats in each group. After 24 h of incubation， immunohistochemistry method was applied to detect expression of Caspase-3 protein， and double-staining method was used to detect neuronal apoptosis. Results Comparing with group C， group K and increased hippocampus cells apoptosis rate and Caspase-3 expression level （P<0.05）， and group D had no statistically significant difference of hippocampus cells apoptosis rate and Caspase-3 expression level （P>0.05）. Comparing with group K， groups KD and D had reduced hippocampus cells apoptosis rates and Caspase-3 expression levels （P<0.05）. Conclusion Dex can relieve ketamine-induced isolated hippocampus cells apoptosis from infant rats.

【Key words】 Dexmedetomidine； Ketamine； Hippocampus cells； Apoptosis

氯胺酮可改变发育中大鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDA）的表达及谷氨酸的活化， 诱导海马细胞变性和远期认知功能的障碍[1， 2]。高选择性的α2 受体激动剂Dex是高选择性α2肾上腺素受体， 作用于中枢神经与周围神经系统及其他器官组织的α2肾上腺素受体， 动物实验证实Dex具有神经保护作用， 能减轻异氟烷导致的新生大鼠海马细胞凋亡[3， 4]；而Dex与氯胺酮合用对新生大鼠海马细胞凋亡的影响尚不清楚。现将本院研究结果报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 实验材料：清洁级出生7 d的雄性SD大鼠（北京大学深圳医院实验动物中心提供）， 体重10～16 g。盐酸氯胺酮（上海制药一厂）， Dex（江苏恒瑞医药股份有限公司）， DMEM/F-12（Sigma）， B27（Gibi-co）， 胎牛血清（杭州四季青）， Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒（碧云天生物技术研究所）， Caspase-3免疫组化试剂盒（江苏海门碧云天技术研究所）， 激活型caspase-3单克隆抗体（美国Cell Signaling Technology公司）， β-actin单克隆抗体（美国Santa Cruz公司）。实验用仪器：CO2恒温细胞培养箱， 流式细胞仪（BD公司）， 倒置相差显微镜（日本Olympus）， 高速低温离心机。……